云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導培養研究

李云海+陳麗華++楊榮蓮++陳李梅

摘要 以云南龍竹種子無菌苗為試驗材料，探究不同濃度的細胞分裂素6-BA對其叢芽誘導培養的影響。試驗在MS培養基中設置了6-BA 4個濃度梯度的處理，分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L。結果表明，云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導初代培養較適宜的6-BA濃度為2.0 mg/L。在此培養基中培養40 d后，其芽的增殖倍數可達到4.9倍，苗長勢也較好。

關鍵詞 云南龍竹；組織培養；種子無菌苗；叢芽誘導

中圖分類號 S795 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）20-0135-01

云南龍竹（Dendrocalamus yunnanicus Hsuch et D.Z.Li）是世界上最大的2種竹類植物之一，為暖熱性喜溫怕寒竹種，主要分布于云南中部、東南部和越南等地區；云南龍竹的繁殖過去多采用母竹分蔸栽植法或其他無性繁殖方式[1]。從有報道的文獻資料來看，1996年譚宏超[2]報道了采用云南龍竹節間切口埋桿法育苗，成活率可達74%；在用ABT生根粉進行處理和選好育苗季節情況下，主枝次生枝扦插成活率可達86%以上。2011年，牟光儀等[1]從種子收集及篩選、種子儲存、播種育苗、營養土配制、移栽管理等方面總結出了一套云南龍竹有性繁殖育苗及栽植培育技術。2012年，李春芳等[3]以云南龍竹的穎果為試驗材料，通過種子萌發建成叢芽無菌無性系進行快繁和離體保存研究；篩選出了叢芽誘導、生根和離體保存等較適宜的培養基激素組合和延長繼代時間的離體保存溫度等。2016年，李云海等[4]對云南龍竹種子外植體用升汞滅菌的適宜時間進行了試驗研究，獲得了污染率低和成活率較高的滅菌處理方法，并得到了一定數量的試管無菌小苗。本文即是在上述工作和獲得的無菌苗基礎上，從不同濃度的6-BA激素對云南龍竹種子外植體無菌苗叢芽誘導的影響方面進行試驗研究和觀察，初步結果現報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為云南龍竹的種子。

1.2 試驗方法

把在MS+6-BA 1 mg/L+瓊脂粉4.5 g/L+蔗糖30 g/L的培養基中培養2周后的種子無菌小苗，接種到6-BA濃度分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的培養基中，每個處理接種6瓶，每瓶培養基中接種5株，置于25～28 ℃、光照強度1 500～2 000 lx、光照時間12 h/d的條件下培養。培養40 d后，比較在培養基中不同6-BA濃度情況下叢芽的增殖情況。

2 結果與分析

培養40 d后，各處理培養基中叢芽增殖情況結果如表1所示。表中加號前面的數字表示原始接種的芽數，加號后面的數字表示增殖的芽數。從表1可以看出，6-BA濃度1.0～2.5 mg/L芽的增殖倍數分別為2.7、3.2、4.9和5.3倍。

根據表1的結果，把各處理中芽的總數進行方差分析，結果如表2所示。重復間的F=0.27F0.01，說明處理間差異極顯著。方差分析結果顯示，不同的6-BA濃度對云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導的影響是顯著的。

通過多重比較可以得出，6-BA各濃度處理之間的差異極顯著；6-BA 1.0 mg/L處理與6-BA 1.5 mg/L處理之間、6-BA 2.0 mg/L處理與6-BA 2.5 mg/L處理之間差異不顯著。說明6-BA 2.0 mg/L處理、6-BA 2.5 mg/L處理中的6-BA濃度可以起到極顯著地促進云南龍竹種子無菌苗叢芽增殖的良好效果。6-BA 2.0 mg/L處理與6-BA 2.5 mg/L處理之間差異不顯著，說明在6-BA 2.0 mg/L處理的基礎上再增加6-BA的濃度，從叢芽增殖效果來看，與6-BA 2.0 mg/L處理相比已經沒有那么顯著。由此可得出，云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導初代培養適宜的6-BA濃度為2.0 mg/L。

3 結論與討論

本試驗以云南龍竹種子為外植體，采用以芽繁芽的方式。將竹種用0.1%升汞溶液徹底消毒滅菌后，在MS基本培養基中培養萌發至獲得無菌小苗，并將無菌小苗在MS+6-BA 1 mg/L+瓊脂粉4.5 g/L+蔗糖30 g/L的培養基中進行過渡培養。2周后，將無菌苗轉接到含細胞分裂素6-BA濃度分別為1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L的培養基中進行叢芽誘導初代培養。經過40 d培養后，把從各處理中所得到的芽個數數據進行統計分析，初步得出，在培養基中細胞分裂素6-BA濃度由1.0 mg/L按梯度逐漸增加到2.5 mg/L的過程中，側芽數也在逐漸增加。當6-BA的濃度為2.5 mg/L時其芽的增殖倍數為5.3倍，但其增殖效果與處理6-BA濃度為2.0 mg/L時的增殖效果之間差異不顯著。因此，本試驗篩選出了云南龍竹種子無菌苗叢芽誘導初代培養較適宜的6-BA激素的濃度為2.0 mg/L。

此次試驗結果為初步得出的數據，其叢生芽雖較健壯，但它的增殖倍數仍然有較大提高空間。為了得到高倍快速增殖的叢芽，且能用于種苗的快速繁殖，在其繼代培養中有諸多因素值得深入試驗研究。

4 參考文獻

[1] 牟光儀，李霖，方洪剛.云南龍竹有性繁殖與栽培技術[J].世界竹藤通訊，2011，9（6）：23-25.

[2] 譚宏超.云南龍竹、大葉慈竹育苗技術研究[J].云南師范大學學報（自然科學版），1996，16（3）：69-75.

[3] 李春芳，程治英，楊俊波，等.云南龍竹的快速繁殖和離體保存研究[J].亞熱帶植物科學，2014，41（2）：27-31.

[4] 李云海，陳麗華，劉艷.云南龍竹種子外植體適宜滅菌時間篩選試驗[J].現代農業科技，2016（6）：159.