桃核承氣湯預防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴張術后再狹窄的實驗研究

于文慧，徐恒，張百亮，趙鋼*

(1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

桃核承氣湯預防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴張術后再狹窄的實驗研究

于文慧1，徐恒2，張百亮1，趙鋼1*

(1.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江省醫院，黑龍江 哈爾濱 150001)

目的：觀察桃核承氣湯對動脈硬化閉塞癥家兔模擬球囊擴張術后再狹窄的預防作用。方法：24只家兔造模成功后，全部進行球囊擴張術手術治療，隨機分為中藥組和對照組，中藥組采用桃核承氣湯治療；對照組采用同劑量的生理鹽水，治療4周后采集血樣檢測AT-Ⅱ、ET-1、TXB2、NO、6-K-PGF1α、CGRP水平，與造模成功后的血液樣本比較。結果: 桃核承氣湯能有效提高CGRP、NO、PGF1α水平(P<0.01)，降低ET-1、AT-II、TXB2水平(P<0.01),治療效果優于空白對照組(P<0.01)。結論：桃核承氣湯對動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴張術后再狹窄有顯著預防作用。

桃核承氣湯；動脈硬化閉塞癥；球囊擴張；再狹窄

動脈硬化閉塞癥(ASO)是發生在動脈系統的常見疾病，發病率逐年上升，死亡率、截肢率居高不下，引發眾多臨床醫生關注。治療動脈硬化閉塞癥的有效方法首推球囊擴張術，但球擴后出現動脈再狹窄，一直是困擾臨床的難題，嚴重制約了這一技術的發展。再狹窄的形成是機體出現血管損傷后出現應對反應的病理生理復雜的過程，牽涉到多個因素與眾多過程[1]。面對球囊擴張術后出現動脈再狹窄這一前所未有的病理過程，中醫理論面臨著全新的機遇與挑戰。中醫學理論體系如何解釋？如何利用中醫藥干預?切入點在哪里? 能取得怎樣的效果？目前仍然是一片空白。本課題在建立家兔股動脈閉塞癥模型的基礎上，進行球囊擴張，并應用桃核承氣湯進行預防性治療，應用中醫藥理論指導臨床實踐，對這一全新的領域進行初探。

桃核承氣湯載于《傷寒論》，主治下焦蓄血證，為活血化瘀代表方劑。現代醫學曾對這一方劑重新解讀，認為古方所載蓄血證與目前臨床的微循環不暢有關,常在血流動力學、流變學方面發生變化從而出現問題。而桃核承氣湯具有活血化瘀作用，可以通暢血流，消除瘀滯，改善血液流變學和血流動力學的異常指標，促進血黏度及血液成分動態平衡。本實驗應用桃核承氣湯預防動脈硬化閉塞癥家兔球囊擴張術后再狹窄，探討中藥防治再狹窄的思路。

1 材料、試劑與藥物

1.1 實驗動物

家兔(新西蘭兔)，質量(2.0±0.5)kg，雄性，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物許可證號：SYXK(黑)2016004。

1.2 試劑

6-酮-前列腺素F1α、血栓素B2試劑盒(弘博生物科技公司)；血漿血管緊張素Ⅱ試劑盒(北京福瑞生物工程公司)；降鈣素基因相關肽試劑盒(弘博生物科技公司)；血漿血內皮素、一氧化氮試劑盒(弘博生物科技公司)。

1.3 實驗藥物

膽固醇(北京化學試劑公司)；牛血清白蛋白(中國醫藥(集團)上海化學試劑公司)；桃核承氣湯(桃仁∶大黃∶桂枝∶甘草∶芒硝=2∶2∶1∶1∶1，由黑龍江中醫藥大學制劑室制作)。

1.4 儀器設備

752C紫外可見分光光度計(上海第三分析儀器廠)；Qwin550CW圖像分析系統(德國Leica公司)；球囊導管2.5 mm×40 mm、3.0 mm×40 mm、0.018 in×300 cm導絲和壓力泵等(美敦力公司)。

2 方法

2.1 高脂飼料

在基礎飼料中混入2%大豆油，同時加入膽固醇1 g/(d·只)。

2.2 動脈硬化閉塞癥家兔模型

根據李令根[2]文獻，采用高脂飼料喂養—股動脈環縮—免疫損傷方法制成“股動脈硬化閉塞癥家兔”改良模型。高脂飼料喂養新西蘭大白兔3 d，在10%烏拉坦麻醉下(5 mL/kg)，進行股動脈環縮手術，于右側腹股溝股動脈搏動明顯處縱形切口，暴露股動脈，在無血管分支處，手術線環繞動脈將其口徑縮至約2/3(先將手術線繞動脈2周，標記。將標記的長度再環繞3周)，清洗、縫合切口。第7 d靜脈注射牛血清白蛋白(250 mg/kg)制作免疫損傷動脈內膜。繼續高脂飼料喂養，共8周，制成“家兔股動脈硬化閉塞癥”模型。

2.3 實驗分組及處置方法

全部24只“家兔股動脈硬化閉塞癥”模型隨機分為2組，空白對照組，桃核承氣湯治療組，每組12只，全部進行球囊擴張治療。經兔耳緣靜脈烏拉坦作全身麻醉，仰位固定在兔臺上，右腹股溝術區剪毛，形成約直徑5cm術區，術區常規消毒，鋪無菌孔巾。在無菌條件下，沿血管走形切開皮膚，分離皮下組織及肌肉顯露右股動脈。直視下股動脈逆行穿刺，成功后，置入穿刺針外鞘，借助外鞘置入0.018 in×300 cm導絲，交換外鞘，沿導絲插入2.5 mm×40 mm球囊，使球囊位于第一次手術結扎線下進行球囊擴張。維持壓力泵壓力6～8個大氣壓，并緩慢回拉球囊，有明顯阻力時表明球囊直徑與血管吻合，如阻力較小，則換用3.0 mm×40 mm的球囊，持續2 min，反復操作3次。退出球囊及導絲，縫合動脈，慶大霉素8萬單位沖洗縫合切口。術后3天各組兔肌注青霉素80萬U抗感染。

2.4 給藥方式

術后第2日開始給藥，空白對照組給予生理鹽水2 ml/kg灌胃,桃核承氣湯組給予2 ml/kg灌胃(含生藥0.8 g)，連續治療4周。

2.5 指標檢測及取血方法

造模成功后及分組治療4周后，各組禁食12 h，空腹采血，檢測AT- Ⅱ、ET-1、TXB2、NO、6-K-PGF1α、CGRP水平。

2.6 統計學處理

3 結果

造模成功后，動脈硬化閉塞癥家兔ET-1、AT-II、TXB2水平顯著提高，CGRP、NO、PGF1α水平明顯降低，通過球囊擴張治療后，空白對照組各個細胞因子變化不明顯，與模型組比較，無統計學意義(P>0.05)。通過桃核承氣湯治療后，可提高CGRP、NO、6-k-PGF1α，降低ET-1、AT-II、TXB2水平， 與模型組比較，有顯著統計學意義(P<0.01)。桃核承氣湯治療組與空白組比較，有統計學意義，治療效果優于空白對照組 (P<0.01)。結果見表1、表2。

表1 各組治療后CGRP、ET-1、NO水平的變化情況比較

注：與模型組比較，*P<0.01;與空白對照組比較，△P<0.01。

表2 各組治療后AT-Ⅱ、TXB2、PGF1α水平的變化情況比較

注：與模型組比較，*P<0.01;與空白對照組比較，△P<0.01。

4 討論

球囊擴張后再狹窄是一個復雜的病理過程， 啟動因素是內膜損傷，關鍵因素是平滑肌細胞增殖， 重要環節是細胞生長因子分泌異常，整個過程復雜曲折，涉及到多個病理環節。因此，只有選擇具有多方面綜合性調節作用的藥物，才可能針對各個環節過程作出調節，取得防治再狹窄形成的效果[3]。中醫學具有獨特的辨證論治理論體系，中藥制劑具有特殊的復方制劑系統，可集抑制平滑肌細胞增殖、防止細胞外基質堆積、抑制血小板聚集、防止血栓形成、降脂、降糖、抗過氧化損傷、保護內皮細胞、調節細胞生長因子分泌作用于一體，實現綜合性調治,其優勢是某種單一西藥或單味中藥無法比擬的[4]。

動脈硬化的過程實際是動脈內皮細胞損傷、血管活性因子分泌失調，導致動脈管徑持續痙攣、平滑肌細胞增生及單核細胞內皮浸潤，吞噬脂質，形成泡沫細胞，并與平滑肌細胞組成粥樣斑塊，出現缺血性情況。一氧化氮(NO)已經被證實具有抑制血管平滑肌細胞增殖，使血管舒張，阻止血管重構等作用。ET具有很強的收縮血管作用，ET1主要在血管內皮表達，ET1升高，損傷動脈內皮細胞功能，促進平滑肌細胞增殖，導致動脈硬化形成。降鈣素基因相關肽(CGRP)是一種神經肽，由37個氨基酸殘基組成。主要在脊神經節細胞中合成，由感覺神經末梢釋放，廣泛分布于體內整個循環系統。CGRP參與多項病理、生理的調控，通過與不同的受體結合，發揮作用。與受體-1的結合發揮強大的舒張血管作用，被稱為最強的血管舒張劑[5]。TXB2的升高與6-K-PGF1α的下降可導致自由基平衡失調，誘發中、小動脈動脈硬化，繼發血栓形成，引起微循環障礙。TXA2與PGI2能改善血小板功能，對血管提供保護的重要因子。動脈內膜細胞損傷，合成PGI2減少，使TXA2/PGI2失調，激活血小板黏附性，增加釋放PDGF，刺激平滑肌及結締組織增生，血管壁增厚，導致微循環障礙，其穩定代謝產物TXB2和6-K-PGF1α的檢測可以間接反應此過程。本實驗證實,模型組ET-1、AT-II、TXB2顯著提高，CGRP、NO、PGF1α明顯降低，經過桃核承氣湯治療后，能有效提高CGRP、NO、PGF1α水平，降低ET-1、AT-II、TXB2水平，促進TXB2/6-K-PGF1α、ET-1/NO的平衡,治療效果優于空白對照組。

再狹窄的中醫病機為氣陰兩虛、血瘀痰阻[6]，因此益氣養陰、活血祛瘀、化痰通脈為基本治則。桃核承氣湯組成中通經散瘀藥有桂枝，瀉熱軟堅祛瘀藥有大黃、芒硝，活血化瘀藥有桃仁，益氣藥有甘草[7]。方中大黃與芒硝相須配伍，瀉熱祛瘀；桃仁與桂枝相使配伍，破血通經；桃仁與大黃、芒硝相使配伍，桃仁助大黃、芒硝軟堅祛瘀，大黃、芒硝助桃仁破血化瘀；桃仁與甘草相反相使配伍，相反者，補瀉同用，桃仁破血，甘草益氣，相使者，益氣帥血行瘀。方藥相互為用，以奏瀉熱祛瘀，通經益氣之效。

中醫藥在解決球囊擴張術后再狹窄方面有良好的前景，但目前對復方的研究較少，相對滯后，今后應采用整體造模，對中藥復方作用從細胞、分子、基因水平多方面，由淺入深，分層次，利用現代化的先進方法深入研究，闡明球囊擴張術后再狹窄發病機制的各個病理生理過程，可能會在這一研究領域取得重大進展。

[1] Kanamasa K,Ogawa I,Hayashi T,et al.Prevention of coronary arterial renarrowing by continuous 3-day infusion of tissue plasminogen activator after successful PTCA:a randomized,double blind,placebo-controlled study[J].Angiology,2000,51(5):367-375.

[2] 李令根,徐恒,許宇飛,等.康脈注射液對股動脈硬化閉塞癥家兔血管內皮細胞活性因子的影響[J].中國中西醫結合外科雜志,2003,8(9):263-264.

[3] 郭鈺琪,齊冬梅,郝鈺,等.三七皂苷R1調節炎性T細胞亞群保護血管內皮的實驗研究[J].中國藥理學通報,2012,28(2):240-244.

[4] 劉桂林,竇迎春,喬云,等.三七總皂苷對動脈粥樣硬化血管內皮的保護作用[J].中西醫結合心腦血管病雜志,2013,11(9):1094-1096.

[5] 趙鋼,吳明遠,田旭升,等.蓬子菜沖劑對降鈣素基因相關肽和腎上腺髓質素水平的影響[J].中國中西醫結合外科雜志,2007,13(2):66-68.

[6] 毛丹.益氣活血通絡法防治冠狀動脈支架術后再狹窄的臨床研究[J].中醫藥信息,2016,33(3):102-105.

[7] 王付.桃核承氣湯的理論探索與實踐[J].中國實驗方劑學雜志,2012,8(1):211-213.

PreventionofRestenosisbyTaoheChengqiDecoctioninArteriosclerosisObliteransRabbitsafterBalloonDilatation

YU Wen-Hui1, XU Heng2, ZHANG Bai-Liang1, ZHAO Gang1*

(1.TheFirstAffiliatedHospitalofHeilongjiangUniversityofChineseMedicine,Harbin150040,China; 2.HeilongjiangProvincialHospital,Harbin150001,China)

Objective: To observe the preventive effect of Taohe Chengqi decoction for restenosis in arteriosclerosis obliterans rabbits after balloon dilatation. Methods:24 model rabbits were randomly divided into the Chinese medicine group and the control group after being performed balloon dilatation. Chinese medicine group was treated with Taohe Chengqi decoction, whereas the control group was fed with normal saline. After 4 weeks, the levels of AT-II, ET-1, TXB2,NO, 6-K-PGF1α,and CGRP were tested and compared to those before treatment. Results: Taohe Chengqi decoction significantly reduced ET, TXB2and AT-Ⅱand increased NO, CGRP, 6-K-PGF1α(P<0.01), which were better than the control group(P<0.01). Conclusion: Taohe Chengqi decoction has a remarkable preventive effect for restenosis in arteriosclerosis obliterans rabbits after balloon dilatation.

Taohe Chengqi decoction; Atherosclerosis obliterans; Balloon dilatation; Resteonsis

R285.5

A

1002-2406(2017)06-0032-03

中華人民共和國教育部春暉計劃(No.Y-41)

于文慧(1976-)，女，副主任醫師，主要研究方向：中西醫結合治療周圍血管疾病。

趙鋼*(1958-)，男，教授，主任醫師，博士研究生導師，主要研究方向：中西醫結合治療周圍血管疾病。

2016-09-01

修回日期：2016-10-10