阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學及生物利用度研究Δ

徐旖旎，王益，嚴俊麗，賀智勇，周雪，沈祥春，陶玲#（1.貴州醫科大學藥學院，貴陽550004；.貴州省普通高等學校天然藥物藥理與成藥性評價重點實驗室，貴陽55005）

阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學及生物利用度研究Δ

徐旖旎1，2＊，王益1，2，嚴俊麗1，2，賀智勇1，2，周雪1，2，沈祥春2，陶玲1，2#（1.貴州醫科大學藥學院，貴陽550004；2.貴州省普通高等學校天然藥物藥理與成藥性評價重點實驗室，貴陽550025）

目的：研究阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學行為及生物利用度。方法：將12只SD大鼠隨機分為阿司匹林混懸液組（10 mg/kg）和阿司匹林磷脂復合物自微乳組（10 mg/kg），每組6只。各組大鼠分別ig給藥，并于給藥前及給藥0.083、0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h后于頸靜脈采血0.6 mL。采用高效液相色譜法測定2組大鼠血漿中水楊酸的濃度，并采用DAS 2.0藥動學軟件計算藥動學參數和相對生物利用度。結果：阿司匹林混懸液和阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學過程均符合一室模型。水楊酸在阿司匹林混懸液組和阿司匹林磷脂復合物自微乳組大鼠的cmax分別為（1.904±0.208）、（6.457±1.091）μg/mL，AUC0-12h分別為（12.860±1.327）、（47.270±12.860）μg/（h·mL），tmax分別為（2.167±0.983）、（0.917±0.540）h。與ig阿司匹林混懸液比較，ig阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內水楊酸的cmax、AUC0-12h均顯著增加（P＜0.01），tmax顯著減?。≒＜0.05），相對生物利用度為367.57%。結論：阿司匹林制成磷脂復合物自微乳后可提高水楊酸在胃腸道的吸收，相對生物利用度較高。

阿司匹林；磷脂復合物；自微乳；高效液相色譜法；藥動學；相對生物利用度；大鼠

隨著我國人口老齡化的急劇發展，阿司匹林作為抑制血小板聚集的常用藥物在臨床的應用越來越廣泛[1]，但其生物利用度低、胃黏膜副作用嚴重[2-3]。自微乳給藥系統（Self-microemulsion drug delivery system，SMEDDS）是一種新型藥物載體，由油相、乳化劑、助乳化劑、不含或含少量水構成，口服后遇體液并在胃腸蠕動下（通常在37℃）可自發分散形成水包油型微乳，是一種透明或半透明、低黏度、動力學和熱力學都很穩定的混合體系。本課題組前期研究表明，將阿司匹林制備為磷脂復合物后，其生物利用度有顯著提高，對大鼠胃黏膜的損傷大幅減輕。為了進一步發揮阿司匹林磷脂復合物的優勢，結合其脂溶性較高的特點，筆者研制了阿司匹林磷脂復合物自微乳給藥系統[4-8]，并對阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學行為和相對生物利用度進行考察，為阿司匹林新遞送系統的研究提供一定的實驗基礎。

1 材料

1.1 儀器

2700紫外可見分光光度計（日本島津公司）；BS223S分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司，精度：0.001 g）；1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；20R臺式離心機（美國貝克曼庫爾特公司）。

1.2 藥品與試劑

阿司匹林原料藥[阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號：D1316056，純度：99%]；水楊酸對照品（批號：100106-201104，純度：99.9%）、苯甲酸對照品（批號：100419-201302，純度：100.0%）均購自中國食品藥品檢定研究院；冰醋酸（上海申博化工有限公司，批號：201601101）；水合氯醛（天津市大茂化學試劑廠，批號：20150526）；四氫呋喃（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20140922）；乙腈、甲醇為色譜純；阿司匹林混懸液（批號：2017021501，主要含阿司匹林原料藥和羧甲基纖維素鈉）、阿司匹林磷脂復合物（批號：2017021502）均由貴州省普通高等學校天然藥物藥理與成藥性評價重點實驗室自制；其余試劑均為分析純。

1.3 動物

健康SD大鼠12只，♀♂各半，體質量210～250 g，由貴州醫科大學實驗動物中心提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（黔）2012-0001。

2 方法與結果

2.1 阿司匹林磷脂復合物自微乳的制備

根據實驗室前期研究，按阿司匹林磷脂復合物自微乳最優處方，在阿司匹林磷脂中加入辛癸酸甘油酯0.70 g、大豆磷脂0.067 g、15-羥基硬脂酸聚乙二醇酯0.133 g、無水乙醇0.10 g，置于60℃水浴加熱至完全溶解，渦旋混勻，得淡藍色、半透明的阿司匹林磷脂復合物微乳；滴加50 mL純凈水后，磁力攪拌器攪拌（50 r/min）2 min后，即得阿司匹林磷脂復合物自微乳（相當于阿司匹林10.0 mg）。

2.2 色譜條件

色譜柱：Ultimate?LP-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20∶5∶5∶70，V/V/V/V）[9]；柱溫：30℃；檢測波長：276 nm（苯甲酸）、303 nm（水楊酸）；流速：1.0 mL/min；進樣量：15μL。

2.3 溶液的制備

2.3.1 水楊酸對照品溶液的制備精密稱取水楊酸對照品5 mg，置于50 mL量瓶中，甲醇溶解并定容，制備成質量濃度為100 μg/mL的水楊酸對照品貯備液。分別精密吸取貯備液適量，甲醇稀釋制成質量濃度為0.04、0.08、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 μg/mL的系列對照品溶液，過0.45 μm的微孔濾膜，取續濾液，保存備用。

2.3.2 內標溶液的制備精密稱取苯甲酸（內標）對照品10 mg，置于50 mL棕色量瓶中，甲醇溶解并定容，制備成質量濃度為200 μg/mL的內標貯備液。精密吸取內標貯備液1 mL，置于25 mL棕色容量瓶，甲醇稀釋制成質量濃度為4 μg/mL的內標溶液，過0.45 μm的微孔濾膜，取續濾液，避光保存，備用。

2.4 分組、給藥與血漿樣品采集

將12只SD大鼠隨機分為2組，每組6只，實驗前禁食不禁水12 h。2組大鼠分別ig阿司匹林混懸液和阿司匹林磷脂復合物自微乳（給藥劑量均相當于阿司匹林10 mg/kg，根據預實驗確定）。分別于給藥前及給藥0.083、0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h后于頸靜脈取血0.6 mL，置于肝素化的離心管中，5 000r/min離心（離心半徑為8 cm）10 min，吸取上層血漿約0.2 mL，置于－20℃條件下保存，備用[10]。

2.5 血漿樣品處理

精密吸取空白血漿200μL于2 mL離心管中，分別精密加入甲醇1.0 mL和內標溶液（4 μg/mL）200μL[11]，渦旋混勻1 min，10 000 r/min離心（離心半徑為12 cm）5 min，精密吸取上清液15 μL，用于進樣測定。

2.6 方法學考察

2.6.1 專屬性考察分別取大鼠空白血漿、空白血漿+內標溶液、空白血漿+水楊酸對照品溶液（8 μg/mL）以及大鼠ig阿司匹林磷脂復合物自微乳2 h后的血漿樣品，按“2.5”項下方法處理后（不加內標），按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果，苯甲酸、水楊酸的保留時間分別為6.712、8.975 min，2種成分色譜峰分離度為9.02，分離效果良好，血漿內源性物質對于含量測定無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig1 HPLC chromatograms

2.6.2 標準曲線與檢測限精密吸取大鼠空白血漿0.2 mL，分別加入系列對照品溶液1.0 mL，混勻，制成水楊酸質量濃度分別為0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μg/mL的血漿樣品，按“2.5”項下方法處理后，按“2.2”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以水楊酸與內標峰面積的比值為縱坐標（y）、水楊酸質量濃度為橫坐標（x）進行線性回歸，得回歸方程為y＝4.036 6x+1.630 6（r＝0.998 8）。結果表明水楊酸質量濃度在0.2～16.0μg/mL內線性關系良好，檢測限（信噪比為3）為0.084μg/mL。

2.6.3 精密度、穩定性、回收率考察按相關規定進行操作，考察精密度、穩定性、方法回收率與提取回收率。結果，日內（n＝6）、日間（n＝5）精密度的RSD≤5.81%，穩定性試驗的RSD≤4.19%（n＝3），方法回收率為98.61%～103.55%（RSD≤5.24%，n＝5），提取回收率為75.36%～86.77%（RSD≤4.54%，n＝5），均符合相關規定。

2.7 阿司匹林磷脂復合物在大鼠體內的藥動學研究

2.7.1 血藥濃度的測定取“2.4”項下血漿樣品，按“2.5”項下方法處理后，按“2.2”項下色譜條件進樣測定。2組大鼠的藥-時曲線見圖2。

圖2 2組大鼠體內水楊酸的藥-時曲線Fig2 Plasma concentration-time curves of salicylic acid in rats in vivo in 2 groups

2.7.2 藥動學參數與相對生物利用度的計算采用DAS 2.0藥動學軟件計算藥動學參數，采用Excel 2007軟件進行t檢驗，結果見表1。結果，阿司匹林混懸液和阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠體內的藥動學過程均符合一室模型，權重因子為1/C。2組大鼠體內水楊酸的藥動學參數見表1。

表1 兩組大鼠體內水楊酸的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of salicylic acid in ratsin vivo in 2 groups（±s，n＝6）

表1 兩組大鼠體內水楊酸的藥動學參數（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of salicylic acid in ratsin vivo in 2 groups（±s，n＝6）

注：與阿司匹林混懸液比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01Note：vs.aspirin suspension，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

阿司匹林磷脂復合物自微乳47.270±12.860＊＊74.040±36.170＊＊0.917±0.540＊6.457±1.091＊＊4.928±0.389 5.663±3.412藥動學參數AUC0-12h，μg/（h·mL）AUC0-∞，μg/（h·mL）tmax，h cmax，μg/mL MRT0-12h，h t1/2，h阿司匹林混懸液12.860±1.327 16.720±3.086 2.167±0.983 1.904±0.208 4.762±0.175 5.208±1.699

結果表明，阿司匹林磷脂復合物自微乳在大鼠血漿中水楊酸的tmax、cmax、AUC0-12h分別是阿司匹林混懸液的42%（P＜0.05）、3.39倍（P＜0.01）和3.72倍（P＜0.01）。利用公式（相對生物利用度＝AUC0-12h阿司匹林磷脂復合物自微乳/AUC0-12h阿司匹林混懸液×100%）計算相對生物利用度，結果阿司匹林磷脂復合物自微乳的相對生物利用度為367.57%，表明與阿司匹林混懸液相比，阿司匹林磷脂復合物自微乳顯著提升了藥物的口服生物利用度。

3 討論

阿司匹林進入體內后，在血漿中易被酯酶水解成水楊酸，通常通過測定血漿中水楊酸的濃度變化來研究體內阿司匹林的藥動學過程[12]。本研究所用血漿樣品中也未檢測到阿司匹林，因此，參考2015版《中國藥典》（二部）測定水楊酸含量的流動相條件，通過HPLC法測定血漿中水楊酸含量。方法學考察結果表明，該方法能使血漿中內源物質和內標、水楊酸得到較好的分離，方法簡便，測定結果準確，重復性良好。

磷脂是生物膜的主要成分，近來已有較多報道提出，將弱吸收的藥物與磷脂制備成磷脂復合物后，可以有效提升藥物的口服生物利用度[13-14]。前期實驗中，筆者成功將阿司匹林制備成磷脂復合物，提高了阿司匹林的脂溶性和油水分配系數。

本文在阿司匹林磷脂復合物基礎上進行了自微乳遞送系統研究，結果表明，阿司匹林磷脂復合物自微乳的AUC顯著高于阿司匹林混懸液，cmax也有顯著的提升，而tmax明顯縮短，說明阿司匹林磷脂復合物自微乳遞送系統吸收速度加快，吸收程度也顯著提高。這可能是因為自微乳在胃腸道自發形成細小納米乳滴，增大有效的比表面積，增加了藥物與胃腸上皮細胞的接觸；且處方中表面活性劑改變了胃腸道屏障的特性，從而增加藥物的轉運、促進藥物吸收，使生物利用度得到明顯提升。另外可能的原因是微乳中的脂質在胰酶和膽汁的作用下發生脂解，形成粒徑更小的微乳乳滴和膽鹽膠束，可以進一步增加藥物的溶解度和促進藥物的跨膜吸收轉運；處方中的脂質成分可以經腸道淋巴管吸收，減小藥物的首關效應，進而進一步提高生物利用度。與阿司匹林混懸液比較，阿司匹林磷脂復合物自微乳相對生物利用度達到367.57%，是阿司匹林磷脂復合物的1.91倍，顯著高于阿司匹林磷脂復合物的生物利用度（前期研究結果顯示阿司匹林磷脂復合物相對于阿司匹林混懸液的相對生物利用度為192.03%），可以推測阿司匹林磷脂復合物自微乳生物利用度的提高，是磷脂復合物和自微乳協同作用的結果。

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Pharmacokinetic and Bioavailability Study of Aspirin Phospholipid Complex Self-microemulsion in Rats in vivo

XU Yini1，2，WANG Yi1，2，YAN Junli1，2，HE Zhiyong1，2，ZHOU Xue1，2，SHEN Xiangchun2，TAO Ling1，2（1.School of Pharmacy，Guizhou Medical University，Guiyang 550004，China；2.High Educational Key Libratory of Natural Medicinal Pharmacology and Drugability of Guizhou Province，Guiyang 550025，China）

OBJECTIVE：To study the pharmacokinetics behaviors and the bioavailability of aspirin phospholipid complex self-microemulsion in rats in vivo.METHODS：12 SD rats were randomly divided into aspirin suspension group（10 mg/kg）and aspirin phospholipid complex self-microemulsion group（10 mg/kg），6 in each group.Rats were intragastrically administrated，and blood sample 0.6 mL was taken from jugular vein before administration and after 0.083，0.25，0.5，0.75，1.0，2.0，3.0，4.0，6.0，8.0，12.0 h of administration.HPLC was used to determine the concentration of salicylic acid in rats’plasma.DAS 2.0 pharmacokinetic software was adopted to calculate the pharmacokinetic parameters and relative bioavailability.RESULTS：The pharmacokinetic processes of both aspirin suspension and aspirin phospholipid complex self-microemulsion were in line with one-compartment model.The salicylic acid of cmaxof rats in aspirin suspension group and aspirin phospholipid complex self-microemulsion group were（1.904±0.208），（6.457±1.091）μg/mL；AUC0-12hwere（12.860±1.327），（47.270±12.860）μg/（h·mL）；tmaxwere（2.167±0.983），（0.917±0.540）h，respectively.Compared with aspirin suspension，salicylic acid of cmaxand AUC0-12hof aspirin phospholipid complex self-microemulsion in rats in vivo were significantly increased（P＜0.01），while tmaxwas significantly decreased（P＜0.05）；the relative bioavailability was 367.57%.CONCLUSIONS：Making aspirin into phospholipid complex self-microemulsion can improve the gastrointestinal absorption，with high relative bioavailability.

Aspirin；Phospholipid complex；Self-microemulsion；HPLC；Pharmacokinetics；Relative bioavailability；Rats

R945

A

1001-0408（2017）31-4373-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.14

貴州省科技計劃項目（No.黔科合支撐〔2017〕2890）；貴州省科技創新人才團隊建設項目（No.黔科合人才團隊〔2015〕4025號）；貴州省高層次創新型人才培養項目（No.黔科合人才〔2015〕4029）；貴陽市科技計劃項目（No.筑科合同〔20141001〕12號）；貴州省普通高等學校創新團隊建設項目（No.黔教合人才團隊字〔2014〕31）

＊講師，博士研究生。研究方向：心血管藥理。電話：0851-8418160。E-mail：605446623@qq.com

#通信作者：教授，碩士生導師。研究方向：藥物制劑新技術和新劑型。電話：0851-8418160。E-mail：649511230@qq.com

2017-06-09

2017-09-10）

（編輯：劉明偉）