武當山區市售重樓飲片中總皂苷含量分析研究

胡懷明++++++沈婷++++葉方+++++黃良永+++++梁文斌

[摘要] 目的 比較武當山區市售重樓飲片中總皂苷的含量，考察醫院、藥店等醫藥市場上銷售的重樓飲片質量情況，為中藥重樓的生產、經銷、臨床使用和監管提供參考。 方法 收集武當山區（以湖北省十堰市為主）醫院、藥店中重樓飲片樣品，用高氯酸顯色，在406 nm波長處使用紫外-可見分光光度法測定重樓飲片中總皂苷含量。 結果 市售重樓飲片中重樓總皂苷的含量差異明顯，收集到的23個樣本中總皂苷含量最低的只有1.79%，最高達11.79%。 結論 市售重樓飲片的質量參差不齊，會影響臨床用藥的安全性、有效性。需要加強對中藥重樓的生產、經銷監管。推動中藥材規范化種植，以保證中藥質量的穩定可控。

[關鍵詞] 重樓；總皂苷；含量

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（c）-0132-04

Research of the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area

HU Huaiming1，2 SHEN Ting3 YE Fang1，2 HUANG Liangyong1，2 LIANG Wenbin1，2

1.Department of Pharmacy， Shiyan City Taihe Hospital Affiliated to Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 2.Engineering Research Center for Herbal Utilization of Hubei Province， Hubei University of Medicine， Hubei Province， Shiyan 442000， China； 3.College of Pharmacy， Hubei University of Chinese Medicine， Hubei Province， Wuhan 430065， China

[Abstract] Objective To compare the content of total saponins in commercially available Paris polyphylla from Wudang Mountain Area to investigate the quality of herbal pieces purchased from hospitals， pharmacies and other pharmaceutical markets. It provides a reference for production， distribution， clinical application and regulation of Paris polyphylla. Methods Herbal pieces of the Paris polyphylla were collected from hospitals and pharmacies in Wudang Mountain Area （mainly in Shiyan， Hubei Province）. The content of total saponins in Paris polyphylla was determined by an ultraviolet-visible spectrophotometer at 406 nm with perchloric acid as chromogenic reagent. Results The content of saponins in Paris polyphylla from 23 samples had obvious differences， the minimum was 1.79%， and the maximum was up to 11.79%. Conclusion The quality of Paris polyphylla is unstable which can affect the safety and efficacy of clinical application. The supervision of the production and marketing of Paris polyphylla need to be strengthened. Only by promoting the standardized planting of Chinese medicine materials， the stable quality of Paris polyphylla can be ensured.

[Key words] Paris polyphylla； Total saponins； Content

重樓為百合科重樓屬植物[1]，有清熱解毒，消腫止痛，涼肝定驚之功效。現代藥理研究發現重樓具有免疫調節、止血、抗腫瘤[2-4]、心血管系統作用[5]等多種藥理活性，其活性成分主要為重樓總皂苷[6]和黃酮類化合物[7-8]。我國主要分布在云南、貴州、四川、湖北等地[9-10]，武當山區分布有2種6變種[11]，《中國藥典》（2015版）規定藥用重樓為云南重樓[Paris polyphylla Sm. var. yunnanensis（Franch.）Hand.-Mzt.]或七葉一枝花[P. polyphylla Sm. var. chinensis（Franch.）Hara.]的干燥根莖[12]。但藥農在采挖野生重樓過程中沒有區分是否藥典規定的品種，藥材收購商也無鑒別真偽能力，所以當前我國中藥材市場上存在著中藥品種不純正、摻假造假等多種現象，影響臨床療效和安全[13]，因此加強質量控制和監管是保證中藥材質量的關鍵舉措。《中國藥典》[12]采用HPLC法測定重樓皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量作為質量控制方法，而中藥的特點是整體性和模糊性[14]，幾種單體成分不能完全反映中藥的整體質量。采用紫外-可見分光光度法測定重樓中總皂苷的含量可以作為重樓質量控制方法的有益補充[15]。endprint

1 儀器與試藥

1.1 儀器

TU-1901全自動紫外可見分光光度儀（北京通用普析儀器有限責任公司）；TDL-5A高速離心機（德國菲恰爾）；FA-2004電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；AUW-120D型電子分析天平（日本島津）；電熱恒溫水浴鍋（北京醫療設備廠）；XT-NX1氮吹儀（Made in U.S.A.）。

1.2 試藥

重樓皂苷Ⅶ對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111593-201303，含量92.5%），重樓飲片樣本搜集于以湖北省十堰市為主的武當山區醫院藥房、社會藥店等地。樣本粉碎過三號篩備用。甲醇為色譜純，無水乙醇、高氯酸等試劑為分析純，水為自制超純水。

2 方法與結果

2.1 供試品溶液的制備

精密稱取2.0 g重樓飲片粉末置磨口三角燒瓶中，加入90%乙醇24 mL，水浴回流提取1 h，3000 r/min離心5 min，濾渣重復提取1次，上清液合并至100 mL量瓶中，用90%乙醇定容至刻度[16]。精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，得到供試品溶液A1～A23。

2.2 對照品溶液的制備

取重樓皂苷Ⅶ適量，精密稱定，加甲醇稀釋成每毫升含0.1 mg的對照品溶液。

2.3 檢測波長的選擇

分別吸取對照品溶液和供試品溶液A1適量，置于10 mL具塞試管中，氮氣吹干后加入5 mL高氯酸，密塞，60℃水浴反應15 min后，置冷水浴中冷至室溫，在350～600 nm范圍內進行掃描，結果樣品和對照品溶液均在406 nm處有最大吸收，且較穩定，因此確定406 nm為測定波長。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按“2.3”項下處理顯色后，在406 nm波長處測定吸光度。以吸光度（Y）為縱坐標，重樓皂苷Ⅶ對照品含量（X，mg）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為Y=3.7855 X-0.0026，R2=0.9944。表明重樓皂苷Ⅶ含量在0.00962～0.2886 mg之間時與吸光度呈良好的線性關系。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1 mL于具塞試管中，按“2.3”項下方法操作顯色后，在406 nm波長下連續測定吸光度，結果得吸光度的RSD為0.99%（n=5），表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 精密稱取16號重樓飲片粉末2 g，共計6份，按“2.1”項下方法處理后，分別精密吸取各溶液1 mL于6只具塞試管中，按“2.3”項下方法顯色后，在406 nm波長下測定吸光度，計算總皂苷含量。結果得6份樣品平均含量為2.58%，RSD為0.79%（n = 6），表明方法重復性良好。

2.4.4 穩定性試驗 取A1號供試品溶液1 mL于具塞試管中，按“2.3”項下方法顯色后，在0、0.5、1.0、2.0、4.0 h時測定其吸光度，結果得RSD為1.93%（n = 5），表明樣品溶液在顯色后4 h內穩定性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 精密稱取同批次20號重樓飲片粉末約1 g，共計6份，按“2.1”項下方法提取定容至100 mL量瓶中后，精密吸取提取液1.0 mL于10 mL量瓶中，再加入濃度為0.2405 mg/mL對照品溶液1.0 mL，混勻，用甲醇定容至刻度。精密量取混合溶液1.0 mL置于具塞試管中，按“2.3”項下方法顯色后，在406 nm波長下測定其吸光度，計算加樣回收率。見表1。

2.5 樣品含量測定

精密量取供試品溶液A1～A23各1 mL，分別置于具塞試管中，揮干后加入5 mL高氯酸，置60℃水浴中15 min，取出，冷水浴至室溫，在406 nm波長處測定吸光度，計算樣品中重樓總皂苷的含量。見表2。

3 討論

3.1 市售重樓中藥飲片質量參差不齊

從測定的23個重樓飲片樣本中總皂苷含量的結果分析可以看出，武當山區市售重樓飲片中重樓總皂苷的含量差異較明顯，最低的只有1.79%，最高達11.79%。雖然樣本主要收集于以十堰市及其周邊地區為主的醫院、藥店，范圍較小，樣本量也不足，但從收集的信息看，這些樣本產于湖北、云南、四川幾個重樓主產區，主要經銷公司包括湖北、安徽、河南幾個省，輻射面可能很廣，所以這些樣本具有一定的代表性。各樣本之間總皂苷存在明顯差異，說明藥材市場上重樓飲片的質量參差不齊，肯定會影響臨床用藥的安全性、有效性。

3.2 保證中藥飲片質量要從源頭做起

由于重樓對生長環境要求較高，而且需要生長五年以上才能藥用[17-19]。重樓價格逐年上漲，剛采挖的鮮品售價每公斤超過百余元，藥農為逐利不再遵循采大留小的傳統，進行滅絕性采挖，重樓中的有效成分含量富集不足[19-20]，藥農在采挖過程中也不能區分品種，藥材的質量就不能保證。通過分析比較市售重樓飲片總皂苷含量也驗證了目前重樓資源現狀。武當山區是南水北調中線工程上游水源地，優良的自然環境適于推廣重樓等中藥材種植[9-10]。應當以保護上游水資源、發展生物產業為契機，推動中藥材規范化、產業化種植，以保證中藥質量的穩定可控，為本地區中藥資源的合理開發利用和可持續發展做出應有的貢獻。

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（收稿日期：2017-07-25 本文編輯：李亞聰）endprint