天然維生素E軟膠囊中維生素E的含量測定

徐文峰++++++徐碩++++++何笑榮++++++姜文清++++++吳學軍++++++鄺詠梅++++++金鵬飛

[摘要] 目的 應用高效液相色譜法（HPLC）建立天然維生素E軟膠囊的含量測定方法。 方法 采用Alltima C18色譜柱（150 mm × 4.6 mm，5 μm），以甲醇為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長285 nm。 結果 在本方法中，維生素E的線性關系良好，線性相關系數為0.9999；專屬性強，精密度和穩定性良好，相對標準偏差（RSD）分別為0.17%和0.87%；平均加樣回收率（n = 6）為100.8%，加樣回收率良好。含量測定結果顯示3個批號樣品中維生素E的含量分別為標示量的101.2%、100.8%、102.7%。 結論 該方法準確、簡單、快速，可用于天然維生素E軟膠囊的含量測定。

[關鍵詞] 天然維生素E軟膠囊；維生素E；高效液相色譜法；含量測定

[中圖分類號] R927 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2017）10（c）-0136-04

Determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules

XU Wenfeng XU Shuo HE Xiaorong JIANG Wenqing WU Xuejun KUANG Yongmei JIN Pengfei

Department of Pharmacy， Beijing Hospital National Center of Gerontology， Beijing 100730， China

[Abstract] Objective To establish a high performance liquid chromatography （HPLC） method for the determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules. Methods An Alltima C18 column （150 mm× 4.6 mm， 5 μm） was used for the separation， with methanol as the mobile phase at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 285 nm. Results The method showed good linearity with correlation coefficient of 0.9999 for vitamin E. The assay method showed good specificity. The precision and stability were satisfactory with the relative standard deviations （RSD） of 0.17% and 0.87% respectively. The average spiked recovery was 100.8% （n = 6）， the recovery rate was good. The determination results was 101.2%， 100.8% and 102.7% of the labeled amount of the three batches of samples respectively. Conclusion The established method is accurate， simple and fast， and can be used for determination of narural vitamin E in Natural Vitamin E Soft Capsules.

[Key words] Natural Vitamin E Soft Capsules； Natural vitamin E； HPLC； Determination

維生素E為微黃色至黃色澄清的黏稠液體，幾乎無臭，遇光色漸變深，不溶于水，溶于無水乙醇、丙酮等有機溶劑，在空氣中會緩慢氧化，紫外線照射可使其分解。維生素E分為合成型或天然型，合成型為dl-α-生育酚醋酸酯，d-α-生育酚醋酸酯[1]。大量研究表明，維生素E具有抗氧化、調節機體免疫力、促進生育、抗衰老、細胞保護等生物學功能[2-5]。維生素E屬于人體必需的植物源脂溶性維生素，機體不能合成，必須從膳食中獲取。植物油中富含天然維生素E，是膳食維生素E的主要來源[6]，同時維生素E也常被作為藥品、營養保健品和食品添加劑使用。維生素E的定量方法有氣相色譜法[1，7-11]、氣相色譜-質譜法[12-13]、高效液相色譜法[14-17]、高效液相色譜-質譜法[18]、毛細管電泳法[19]、紅外光譜法[20]等。楊紅娟等[21]采用高效液相色譜法對天然維生素E軟膠囊中α-生育酚的含量測定進行了研究，但高效液相色譜法測定天然維生素E軟膠囊中d-α-生育酚醋酸酯的含量尚未見報道。本實驗應用高效液相色譜技術建立了天然維生素E軟膠囊中維生素E含量測定的方法，對于補充其質量控制具有一定參考價值。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260型高效液相色譜系統，配有四元梯度泵（型號：G1311C），自動進樣器（型號：G1329B），柱溫箱（型號：G1316A），DAD檢測器（型號：G4212B）（安捷倫科技有限公司，美國）；Mettler XP-205型電子天平（精密度為十萬分之一，梅特勒-托利多集團，瑞士）；KQ-800KDE型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司，中國）；Milli-Q超純水系統（密理博中國有限公司，美國）。endprint

1.2 試藥

無水乙醇（分析純，批號：20141113，國藥集團化學試劑有限公司）；甲醇[色譜純，批號：164787，賽默飛科技（中國）有限公司]；實驗用水為純凈水；甘油[批號：20851101，國藥控股星鯊制藥（廈門）有限公司]；大豆油（批號：20170519，益海嘉里食品營銷有限公司）；維生素E對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號：100062-201110，含量為97.7%）；天然維生素E軟膠囊[每粒含有天然維生素E 400 IU（相當于維生素E 294.1 mg）[22]，批號：450279-12、442049-17、423022-11，美國“天然素”藥廠]。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱選擇十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Alltima，150 mm × 4.6 mm，5 μm）；甲醇為流動相；檢測波長為285 nm；流速為1.0 mL/min；進樣體積為10 μL；28℃。所用溶液進樣前均經0.22 μm孔徑尼龍濾膜過濾。

2.2 對照品溶液的制備

避光操作，取維生素E對照品約250 mg，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加適量無水乙醇，振搖使溶解，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，即為維生素E儲備液（5.0 mg/mL）。精密量取維生素E儲備液1、2、3、4、5 mL，分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，獲得維生素E質量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/mL的對照品溶液。取中間濃度（1.5 mg/mL）的對照品溶液用作含量測定時的對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

避光操作，精密稱取天然維生素E軟膠囊內容物約0.1 g（約相當于維生素E 75 mg），置50 mL容量瓶中，加適量無水乙醇，振搖使溶解，甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

取說明書中的輔料，制備不含維生素E的陰性空白樣品，按“2.3”項下操作，得到陰性對照溶液，用于本實驗的專屬性研究。

2.5 專屬性及系統適應性實驗

分別取陰性對照溶液、維生素E對照品溶液和供試品溶液進樣分析，考察樣品中輔料及其他成分對維生素E色譜峰的干擾。上述3種溶液的色譜圖（圖1）顯示，樣品輔料和其他成分不干擾維生素E的測定。理論板數按維生素E計算應>4000。

2.6 線性和靈敏度

對“2.2”項下系列對照品溶液進樣分析，記錄峰面積，以維生素E的質量濃度（mg/mL）和對應的色譜峰面積進行線性回歸，維生素E在質量濃度0.4976～2.4879 mg/mL范圍內呈良好線性，回歸方程為Y = 2264.22X - 1.75，線性相關系數（r）為0.9999。

將低濃度的對照品溶液以甲醇逐級稀釋后進樣分析，當信噪比（S/N）約為3.0時，確定該方法維生素E的最低檢出限（LOD）為0.12 μg/mL；當S/N約為10.0時，測得該方法維生素E的最低定量限（LOQ）為0.50 μg/mL。

2.7 精密度實驗

取“2.2”項下中間濃度對照品溶液，重復進樣6次，維生素E色譜峰面積的RSD為0.17%，表明儀器精密度良好。

2.8 重復性實驗

取同一批天然維生素E軟膠囊樣品6份（批號：450279-12），分別制備供試品溶液，照含量測定項下方法進樣分析，6份樣品測定結果分別為標示量的100.9%、101.4%、102.2%、100.4%、101.4%、100.6%（平均值為標示量的101.2%），結果維生素E含量的RSD為0.65%，說明方法的重復性良好。

2.9 穩定性實驗

取同一供試品溶液（批號：450279-12），置于儀器自動進樣器內，分別在0、2、4、8、12、24 h分析測定其含量，結果顯示含量基本不變，24 h內維生素E色譜峰面積RSD為0.87%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.10 加樣回收率實驗

在50 mL容量瓶中加入批號為450279-12的天然維生素E軟膠囊內容物約0.1 g，精密加入維生素E儲備液5 mL，加適量無水乙醇，振搖，用甲醇定容，搖勻，過濾，進樣測定。共制備6份樣品，計算加樣回收率和RSD。

2.11 樣品含量測定

應用建立的方法對批號為450279-12、442049-17、423022-11的天然維生素E軟膠囊進行含量測定，每個樣品制備3份，取平均值。測定結果顯示批號為450279-12、442049-17、423022-11樣品中維生素E的含量分別為標示量的101.2%、100.8%、102.7%。

3 討論

本實驗采用高效液相色譜建立了天然維生素E軟膠囊含量測定的方法，該方法操作簡單，重復性好，結果準確可靠，可用于維生素E軟膠囊的質量控制。

3.1 提取溶劑的選擇

適用于天然食品中的維生素E測定方法的現行國家標準，都需要將不同構型的微生物E皂化轉化為生育酚的形式，預處理操作繁瑣[14]?！吨袊幍洹分芯S生素E的含量測定為氣相色譜法，樣品提取溶劑為正己烷[1]，不適用于反相高效液相色譜。維生素E在無水乙醇中易溶，在甲醇中即使超聲30 min樣品也不能完全溶解，故實驗中選擇無水乙醇溶解，甲醇稀釋的方法配制樣品。這樣可以避免完全用無水乙醇配制樣品時液相分析中潛在的溶劑效應。

3.2 流動相的選擇

維生素E在水中幾乎不溶，預實驗中發現，流動相即使選擇甲醇-水（98∶2），維生素E的色譜峰型也會受到影響，故實驗采用純甲醇作為流動相。

3.3 檢測波長的選擇endprint

靈敏度和專屬性是選擇檢測波長需要考慮的兩個方面。分別取維生素E的對照品溶液及空白溶液進樣，從DAD檢測器生成的紫外掃描圖上可以看到維生素E的最大吸收波長為285 nm，而且空白樣品在285 nm處沒有紫外吸收。故本實驗將285 nm作為檢測波長。

3.4 注意事項

維生素E穩定性較差，對光照敏感，長時間光照，其溶液的峰面積會降低，本實驗樣品配制過程需采用棕色容量瓶，液相測定時樣品需采用棕色進樣瓶保存。

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（收稿日期：2017-07-01 本文編輯：李亞聰）endprint