半枝蓮乙醇提取物對順鉑抗肝癌的增效作用研究

孫敘秋 魯朔焱 張羽豐

（貴州省松桃縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科 松桃554100）

半枝蓮乙醇提取物對順鉑抗肝癌的增效作用研究

孫敘秋 魯朔焱 張羽豐

（貴州省松桃縣人民醫(yī)院消化內(nèi)科 松桃554100）

目的：探討半枝蓮乙醇提取物對順鉑抗肝癌的增效作用。方法：采用MTS/PMS法檢測半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨及聯(lián)合用藥時對肝癌細胞增殖的影響，金正均法計算Q值判斷兩藥相互作用關(guān)系。結(jié)果：半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨用藥時可呈時間和濃度依賴性地抑制肝癌細胞增殖率；半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應用后對兩種肝癌細胞的抑制作用大于單獨用藥（P＜0.05），且可產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用（Q＞1.15）。結(jié)論：半枝蓮乙醇提取物與低劑量的順鉑聯(lián)合應用時可顯著增強順鉑對肝癌細胞增殖的抑制作用，產(chǎn)生協(xié)同抗肝癌作用。

肝癌；半枝蓮乙醇提取物；順鉑

肝癌是臨床常見、多發(fā)惡性腫瘤，發(fā)病初期隱匿性較強，且病程進展快，病死率極高，嚴重威脅人類生命健康。目前臨床治療主要根據(jù)肝癌的不同階段進行個體化綜合，主要包括手術(shù)、放化療等[1]。順鉑是臨床應用較廣泛的抗腫瘤藥物，但由于其毒性，臨床治療效果并不十分理想。隨著現(xiàn)代中醫(yī)學對腫瘤研究的深入，中藥聯(lián)合化療藥物抗腫瘤的優(yōu)勢日益凸顯，不僅能夠提高化療藥物的療效，還可通過降低化療藥物的劑量減輕不良反應。半枝蓮是臨床常用的抗腫瘤組方藥物，具有清熱解毒、散瘀止血、利尿消腫的作用[2]。本研究探討半枝蓮乙醇提取物對順鉑抗肝癌的增效作用。現(xiàn)報告如下：

1 方法

1.1 試驗方法 （1）HepG2和Bel7402細胞由中國醫(yī)學科學院國家藥物篩選中心購買。HepG2細胞采用含10%滅活小牛血清DMEM完全培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。Bel7402細胞采用含10%滅活小牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)，收集對數(shù)生長期細胞待用。（2）采用MTS/PMS法檢測單獨及聯(lián)用藥對細胞增殖的影響，將對數(shù)生長期的HepG2和Bel7402細胞接種于96孔培養(yǎng)板，每孔濃度100 μL，約含3 000個細胞，分別加入陰性對照（正常細胞）、不同濃度的順鉑（10、5、2.5、1.25、0.5 μg/ml），半枝蓮乙醇提取物（100、75、50、25、5 μg/ml） 單藥作用 24 h、48 h 及聯(lián)合（0.5 μg/ml順鉑 +100、50、25 μg/ml的半枝蓮乙醇提取物）作用48 h。培養(yǎng)結(jié)束后，按20∶1比例將MTS和PMS混合加入至稀釋培養(yǎng)基。繼續(xù)培養(yǎng)3 h后用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測各孔吸光度（OD）值，波長490 nm，抑制率 =（1－OD實驗組/OD對照組）[3～4]。（3）采用金正均法計算可知兩種藥物相互作用時Q值，Q＞1.15為協(xié)同作用。

1.2 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 14.0統(tǒng)計學軟件，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨用藥對肝癌細胞的影響 半枝蓮乙醇提取物在0～100 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈濃度和時間依賴性地抑制HepG2、Bel7402細胞增殖；順鉑在0～10 μg/ml定的濃度范圍內(nèi)亦呈濃度范圍內(nèi)濃度和時間依賴性地抑制HepG2、Bel7402細胞增殖。見表1。

表1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨用藥對肝癌細胞的影響（±s）

表1 半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨用藥對肝癌細胞的影響（±s）

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2.2 半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)用對肝癌細胞增殖的影響 100、50、25 μg/ml濃度的半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應用后對兩種肝癌細胞的抑制作用大于單獨用藥，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學意義。見表2。

表2 半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)用對肝癌細胞增殖的影響（%）

2.3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析 HepG2細胞在50 μg/ml半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑（0.5 μg/ml）聯(lián)用時可產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤效果 （Q＞1.15）；Bel7402 細胞在 50、100 μg/ml半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑（0.5 μg/ml）聯(lián)用時可產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用（Q＞1.15）。見表3。

表3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析（±s）

表3 不同濃度半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑相互作用分析（±s）

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3 討論

化學治療是目前腫瘤綜合治療的重要手段，但化療引起的不良反應會對患者身心健康帶來嚴重影響，從而抵觸化療，甚至放棄生命。因此，選擇合適的化療藥物，制定完善的治療方案，最大程度減輕化療過程中的不良反應是腫瘤患者治療的關(guān)鍵。順鉑屬于細胞周期的非特異性藥物，具有細胞毒性，可抑制癌細胞DNA復制，損傷其細胞膜結(jié)構(gòu)，具有較強的廣譜抗癌作用，是目前臨床常用的抗腫瘤藥之一[5]。隨著但該藥具有細胞毒性，副作用較多。研究發(fā)現(xiàn)[6]，順鉑與中藥聯(lián)合應用可緩解其副作用，效果顯著。因此，以中藥類聯(lián)合鉑類為主化療成為現(xiàn)階段抗癌的主要手段。

本研究結(jié)果顯示，半枝蓮乙醇提取物與順鉑單獨用藥時均可呈時間和濃度依賴性地抑制肝癌細胞增殖率；半枝蓮乙醇提取物與低劑量順鉑聯(lián)合應用后對兩種肝癌細胞的抑制作用大于單獨用藥（P＜0.05），且可產(chǎn)生協(xié)同抗癌作用（Q＞1.15）。說明半枝蓮乙醇提取物與低劑量的順鉑聯(lián)合應用時可顯著增強順鉑對肝癌細胞增殖的抑制作用，產(chǎn)生協(xié)同抗肝癌作用，具有較高的臨床應用價值。

[1]張燕,王琪鴻,牛素生,等.片仔癀與阿霉素聯(lián)用對骨肉瘤耐藥細胞增殖和凋亡的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志,2015,32(3):705-708

[2]譚建福,趙云,周軍.半枝蓮在治療腫瘤中的臨床應用及研究進展[J].醫(yī)學綜述,2013,19(24):4442-4444

[3]林敬明,劉煜,羅榮城.半枝蓮提取物抗人肝癌Hep-G2細胞增殖及其機制研究[J].南方醫(yī)科大學學報,2006,26(7):975-977

[4]牟衛(wèi)偉,許煥麗.半枝蓮乙醇提取物對順鉑抗肝癌的增效作用研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2017,32(1):306-309

[5]劉一,楊玉飛,白玉,等.鉑類抗癌藥物及其作用機理的分析技術(shù)進展[J].化學通報,2013,76(10):867-869

[6]代志軍,王西京,紀宗正,等.半枝蓮提取物對H22肝癌荷瘤小鼠化療的增效減毒作用[J].中西醫(yī)結(jié)合學報,2008,6(7):720-724

R735.7

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2017.10.102

2017-09-11）