奶牛布魯氏菌病血清學診斷方法的比較體會

武利宏

（臨江鎮農業畜牧服務中心，黑龍江同江 156400）

奶牛布魯氏菌病血清學診斷方法的比較體會

武利宏

（臨江鎮農業畜牧服務中心，黑龍江同江 156400）

本文主要就對三種奶牛布魯氏菌病血清學診斷方法展開了對比分析，即比較了虎紅平板凝集試驗、快速診斷試紙卡檢測、間接酶聯免疫吸附試驗在進行奶牛布魯氏菌病血清學檢測時的優點與缺陷。結果顯示：虎紅平板凝集試驗方法操作簡便且成本相對較低，對于陽性病牛有著較高的檢出率，然而且缺陷則是特異性相對較差，且較易發生假陽性情況；快速診斷試紙卡檢測和間接酶聯免疫吸附試驗血清學診斷方法相對比，在敏感性、特異性、陽性檢出率等方面的比較均無明顯差異，無統計學意義（P＞0.05）。在實際的奶牛布魯氏菌病血清學診斷過程中還應具體結合以發病地區的實際情況，與自身條件來選取出適宜的檢測方法。

奶牛；布魯氏菌病；血清學診斷；敏感性；特異性；陽性檢出率

目前臨床上針對布魯氏菌病病癥的診斷方法主要是以血清學檢驗為主，較為主流的血清學檢驗方法就包括了虎紅平板凝集試驗、快速診斷試紙卡檢測、間接酶聯免疫吸附試驗等方面，據此，下文將就這三種血清學診斷方法的優缺點展開具體分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

于2015年3月～2016年7月，分多次由某規模化養殖場采集具備布魯氏菌病典型癥狀奶牛學樣2627份。

1.1.2 試劑

采用布魯氏菌虎紅平板凝集抗原（生產企業：上海恪敏生物科技有限公司）、布魯氏菌抗體快速檢測試劑卡（生產企業：深圳真瑞生物科技有限公司）、間接酶聯免疫吸附試驗試劑盒（生產企業：上海撫生實業有限公司）

1.1.3 儀器

酶標儀（產品型號：南京德鐵HBS-1096A）、自動洗板機（產品型號：五星行RT-6000）、高速冷凍離心機（產品型號：GL-2050MS）、Eppendorf 移液槍（產品規格：0.1～2.5μl，生產企業：上海艾研生物科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 制備血清

將所采集到的血液樣本放置在37℃的環境下持續靜置60min，再于4℃條件下靜置60min。而后將樣本放進離心套筒當中校對平衡，對稱置入離心機內，離心機轉速保持在3000r/min。抽取經過離心后的采血管，采用Eppendorf 移液槍抽出上部清液，分配到經高壓滅菌處理后的離心管內，存儲于-20℃的環境當中。

1.2.2 虎紅平板凝集試驗

預先準備好布魯氏菌虎紅平板凝集抗原、制備出的陽性及陰性血清；要確保所檢測的血清保持清潔且未出現溶血及腐敗現象；置于清潔玻璃板并聚集于4cm2的格狀區域內，并對其進行均勻攪拌為凝集試驗做好準備。依據國標GB/T18646-2002進行試驗檢測與結果判斷。

1.2.3 快速診斷試紙卡檢測

把未開啟的快速診斷試紙卡以及檢測樣本置于正常室溫環境下；吸取血清直至達到刻度線位置，于平面內所置入的試紙卡加樣孔逐步滴加血清。對試紙卡加樣孔內逐漸底滴加經稀釋處理后的液體。依據試紙卡操作說明要求判定檢測結果。

1.2.4 間接酶聯免疫吸附試驗

此項試驗操作過程可依據試劑盒應用說明書來開展，把完成包裝后的抗原板置入檢測血清，對陽性血清樣本及陰性血清樣本進行對比分析，而后再通過孵育、洗板、加酶標抗體、加終止液等處理后再依據OD值對其結果做出判斷。

1.3 數據分析

應用SPSS22.0軟件開展統計學分析研究，以（%）來表示計數資料，采用x2來對三種不同診斷方法的陽性檢出率進行組間對比驗證，比較結果以P＜0.05表示有統計學意義。

2 結果

虎紅平板凝集試驗、快速診斷試紙卡檢測、間接酶聯免疫吸附試驗三種診斷方法的陽性檢出率分別達到了50.4%、45.26%、45.72%，其中虎紅平板凝集試驗的陽性檢出率明顯高于另外兩種診斷方法，且組間對比差異顯著有統計學意義（P＜0.05）。但在檢出靈敏性方面相對較低。快速診斷試紙卡檢測、間接酶聯免疫吸附試驗兩種方法的組間對比結果無明顯差異，不具有統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三種檢測方法的檢測結果對比 （份）

3 討論

奶牛布魯氏菌病的傳染來源主要為患病牲畜。其糞尿、乳汁等排出物均存在有不同程度的病原菌，在接觸到周圍環境后便會導致牲畜飲水、圈舍、飼料槽等將會受到病菌污染。在患病母畜流產時，病原菌也將會隨子宮分泌物、胎衣等一起排出，其危害將更加巨大。布魯氏菌病的爆發不但會導致養殖戶將面臨巨大的經濟虧損，同時還會導致人體患病，所產生的安全隱患極其嚴重。

本次研究結果表明虎紅平板凝集試驗相較于快速診斷試紙卡檢測、間接酶聯免疫吸附試驗在陽性檢出率方面準確性較高，但其檢出靈敏性相對較差。而后兩種血清學診斷方面比較無明顯差異。對此，在實際的奶牛布魯氏菌病血清學診斷過程中還應具體結合以發病地區的實際情況與自身條件來選取相對更加科學、合理的檢測方法。

[1] 王雙山，王真，馬延光，等.奶牛布魯氏菌病微量凝集試驗診斷方法的建立[J].中國畜牧獸醫，2013，40（5）：206-210.

[2] 張鵬，弓瑞娟.淺談奶牛布魯氏菌病的診斷及防治[J].中國畜禽種業，2014，10（10）：104-105.