白芨繁殖技術研究

毛鑫　王鋒　楊傳桃

摘要：以名貴藥材白芨[Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f.]種子萌發的無菌苗作為外植體進行組織培養，建立了白芨快速繁殖技術體系。結果表明，白芨種子萌發率最高的培養基為MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；誘導愈傷組織的最佳培養基為MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；叢生芽增殖效果最明顯的培養基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L GA3對白芨幼苗的生根作用最為明顯，組培苗移栽以泥炭為基質時存活率和生長狀況最佳。

關鍵詞：白芨[Bletilla striata （Thunb.） Reichb.f.]；種子；無菌苗；增殖；快速繁殖

中圖分類號：S567.23+9.1+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2017）20-3898-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.20.026

Abstract： The sterile seedlings from seeds of Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f. were used as explants for tissue culture and establish a rapid propagation technology system. As the study shows，the best culture medium for the sprouting of the B. striata is as follows：MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；the best culture medium for the callus induction is as follows：MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；the culture medium of the multiple shoots which has the most obvious propagation effect is as follows：MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L GA3 has the most distinct rooting effects on the B. striata seeding，the peat soil transplating substrate of blettila organizational seedings is the best.

Key words： Bletilla striata （Thunb.） Reichb. f.； seed； sterile seedlings； proliferation； grapid production

白芨[Bletilla striata（Thunb.）Reichb.f.]又叫明白芨、紫蘭根、甘根、白給，為蘭科（Orchidaceae）白芨屬（Bletilla Reichb.f.）多年生草本植物[1，2]。白芨塊根為名貴藥材，具有收斂止血、消腫生肌的功效，民間用于治療外傷出血、燒傷燙傷、手足皸裂等[3]。白芨種子細小、種皮為單層細胞組成，胚不分化，無胚乳，在野生條件下很難萌發[4]。加上多年的過度采挖及環境的日益惡化，野生白芨的數量急劇減少。白芨目前已被列為國家珍稀瀕危保護植物[5]。目前市場上白芨人工栽培主要依靠分株繁殖[6]，這種繁殖方式不僅周期長，技術不成熟，而且由于缺乏優良品種，很難滿足白芨的市場需求[7-10]。因此，保護白芨資源、解決白芨繁殖困難的問題迫在眉睫。有關白芨的快速繁殖已有許多報道，袁寧等[11]發現，白芨組織培養受培養基影響較大，最適合萌發的培養基是MS基本培養基；張燕等[12]發現低濃度的6-BA、KT抑制白芨種子的萌發和生長；喻蘇琴等[13]利用白芨種子進行無菌播種，比較了培養條件對白芨種子萌發的效應。本試驗通過改變植物生長調節劑組合及其濃度配比，比較了植物生長調節劑對白芨種子萌發的影響，篩選叢生芽增殖培養和生根培養的最佳培養基，旨在為建立無性繁殖體系、實現白芨快速繁殖和工廠化生產提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料及處理

白芨種子及其無菌苗以及植物生長調節劑NAA、6-BA、2，4-D、GA3由生物資源保護與利用湖北省重點實驗室提供；選取白芨種子作為外植體，流水沖洗2 h后用濾紙吸干水分，在超凈工作臺上用75%乙醇浸泡30 s左右，然后用0.1%的升汞振蕩消毒3 min，去離子水清洗5次，再接種到培養基中。

1.2 基本培養條件

試驗里基本培養基均為MS培養基，加蔗糖25 mg/L、瓊脂6.5 mg/L、活性炭1 mg/L；培養室內的環境條件均為溫度25～28 ℃，光照度1 800 lx，光照時間10 h/d。

1.3 培養方法

1.3.1 種子萌發培養基篩選 在MS基本培養基里添加不同濃度的NAA（0.1、0.2、0.3、0.4 mg/L）和6-BA（1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mg/L）兩兩組合，有24個處理，另設一空白對照（CK1），共25個處理，處理編號1～25，每個處理接種10瓶，將準備好的白芨種子隨機選取10粒，用移液槍均勻地接種在含有不同植物生長調節劑組合的培養基上，培養條件為前述的基本培養條件。20 d后觀察培養結果，以篩選出白芨種子萌發的最佳培養基。

1.3.2 愈傷組織誘導培養基篩選 切取白芨種子萌發的無菌苗莖段（約0.5 cm）作為外植體，接種至MS培養基中，添加不同濃度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）和2，4-D（0.5、1.0、1.5、20 mg/L）兩兩組合，有16個處理，另設一空白對照（CK2），共17個處理，處理編號26～42，每個處理接種10個外植體，10次重復，置于培養室中培養，培養條件同上，30 d后計算其誘導率。endprint

1.3.3 叢生芽增殖培養基篩選 將白芨的愈傷組織接種至MS培養基中，添加不同濃度的6-BA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）和NAA（0.10、0.15、0.20 mg/L）兩兩組合，有12個處理，另設一空白對照（CK3），共13個處理，處理編號43～55，每個處理接種3個外植體，10次重復，置于培養室中培養，記錄叢生芽的增殖情況，到60 d計算誘導率。

1.3.4 生根培養基篩選 剪取上述培養得到的單根芽，接種到MS培養基中，附加不同濃度的GA3（0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/L），共6個處理，處理編號56～61，置于培養室中培養，培養條件同上，培養25 d后觀察白芨叢生單根芽的生根狀況，篩選適合白芨叢生單根芽生根的最佳培養基。

1.4 煉苗移栽

選取生長旺盛、葉片多且根系發達的白芨組培生根苗，打開瓶蓋，放置在培養室中馴化3～5 d；然后小心取出生根苗，用流水洗凈根部的培養基，移栽至分別由蛭石、珍珠巖、泥炭組成的栽培基質中，在植物培養室中培養30 d，培養溫度25 ℃，光照度2 200 lx，光照時間15 h/d，觀察并記錄白芨組培生根苗在各栽培基質中的生長情況和存活率。

2 結果與分析

2.1 NAA和6-BA對白芨種子萌發的影響

植物生長調節劑NAA和6-BA對白芨種子萌發的影響情況見表1。從表1可知，不添加植物生長調節劑的處理其白芨種子萌發率很低，僅為7%；NAA與6-BA以一定濃度配比后，白芨種子才能取得較好的萌發效果；其中以NAA 0.3 mg/L+6-BA 1.6 mg/L組合的白芨種子萌發率最高，可達98%。

2.2 6-BA和2，4-D對白芨愈傷組織誘導的影響

植物生長調節劑6-BA和2，4-D對白芨種子萌發的無菌苗莖段愈傷組織誘導的影響情況見表2。從表2可知，添加不同濃度配比的6-BA和2，4-D培養基對白芨無菌苗莖段愈傷組織的誘導有不同的影響作用，其中6-BA濃度為1.0 mg/L、2，4-D濃度為1.5 mg/L時，誘導率最大，為67%，誘導效果相對最好。

2.3 NAA和6-BA對白芨愈傷組織叢生芽增殖的影響

植物生長調節劑NAA和6-BA對白芨愈傷組織叢生芽增殖的影響情況見表3。從表3可見，添加不同濃度配比的NAA和6-BA對白芨愈傷組織叢生芽增殖有不同的影響，其中6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA濃度為0.15 mg/L時，增殖效果最明顯，誘導率達96.7%。

2.4 GA3對白芨叢生單根芽生根的影響

植物生長調節劑GA3對白芨叢生單根芽生根的影響情況見表4。由表4可知，不添加任何植物生長調節劑時，白芨叢生單根芽長勢差，添加適當低濃度的GA3可以促進白芨叢生單根芽生根，其中0.5 mg/L GA3處理的生根效果最明顯，但GA3促進白芨生根的機制尚不清楚。關于GA3促進植物生根的情況也有報道，陳仕江等[14]發現適當濃度的GA3能促進金釵石斛（Dendrobium nobile Lindl.）的生根。劉世彪等[15]發現GA3可以提高火棘[Pyracantha fortuneana（Maxim.）Li]插條的生根率。

2.5 組培苗的移栽

用蛭石、珍珠巖、泥炭不同栽培基質種植白芨組培生根苗，比較各栽培基質對白芨組培生根苗存活和生長的影響，結果見表5。從表5可知，以泥炭作為基質移栽白芨組培生根苗的生長狀況最好，存活率最高，達到96.7%，其原因可能是泥炭中富含豐富的有機質、有助于白芨組培生根苗的生長所致。

3 小結

試驗選取從種子→無菌苗→愈傷組織→叢生芽誘導→單根芽誘導生根→煉苗移栽這一技術流程，建立了白芨快速繁殖體系，實現了白芨組織培養苗的快速大量繁殖。結果顯示，白芨種子萌發的最佳培養基為MS+1.6 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA；愈傷組織誘導的最佳培養基為MS+1.0 mg/L 6-BA+1.5 mg/L 2，4-D；叢生芽的增殖效果最明顯培養基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA；0.5 mg/L的GA3對促進白芨叢生單根芽生根的作用最明顯，白芨組培苗移栽的基質以泥炭最佳。

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