TGF-β和ERα與Ib期-IIa期宮頸上皮癌臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系

孫雯 徐文茂 尹娟

TGF-β和ERα與Ib期-IIa期宮頸上皮癌臨床病理指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系

孫雯 徐文茂 尹娟

目的Ib-IIa級(jí)別的宮頸癌發(fā)病率約占全部宮頸癌患者的60%-70%，本研究旨在探討TGF-β和ERα與宮頸上皮癌臨床病理及預(yù)后的關(guān)系。方法應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)132例隨訪資料完整的宮頸癌標(biāo)本進(jìn)行TGF-β和ERα檢測(cè)，同時(shí)，以20例正常宮頸組織、20例慢性宮頸炎癥組織作為對(duì)照分析其表達(dá)與宮頸癌臨床指標(biāo)以及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果與正常宮頸組織以及慢性炎癥宮頸組織相比，TGF-β和ERα在宮頸癌組織中表達(dá)明顯上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表達(dá)與宮頸上皮癌的發(fā)生年齡、腫瘤直徑等一般臨床病理因素?zé)o相關(guān)（P＞0.05），而與患者的HPV感染史、腫瘤的病理類型、組織學(xué)分級(jí)、侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，TGF-β和ERα雙陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率、病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等明顯高于陰性表達(dá)者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表達(dá)在宮頸癌患者組織中明顯增高（P＜0.05）；Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影響宮頸癌預(yù)后的重要獨(dú)立因素，TGF-β和ERα表達(dá)雙陽(yáng)性的宮頸癌患者預(yù)后差。結(jié)論測(cè)定TGF-β和ERα的表達(dá)對(duì)臨床上Ib-IIa級(jí)別宮頸癌患者的診斷、預(yù)后以及指導(dǎo)治療有較大的幫助。

宮頸癌；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β；雌激素受體α；預(yù)后

作者單位：100054 北京，北京斯普林格醫(yī)學(xué)研究院分子醫(yī)學(xué)研究所

近幾年來(lái)，宮頸腺癌的發(fā)病率不斷提高，其中Ib-IIa級(jí)別的腫瘤比例也在不斷增加，約占其中的60%-70%[1]。而且由于腺癌對(duì)化療的敏感性較鱗癌略低，因此改善Ib-IIa級(jí)別的腫瘤療效對(duì)提高宮頸腺癌的生存率具有極高的意義。在宮頸腺癌預(yù)后的影響因素中，如淋巴轉(zhuǎn)移、旁侵犯等，對(duì)制定更好的宮頸腺癌治療方案具有積極的意義[2]。通過(guò)臨床觀察，我們發(fā)現(xiàn)一些宮頸腺癌患者具有同樣的臨床預(yù)后，但存在不同的臨床病理學(xué)指標(biāo)[3]。由于腫瘤進(jìn)程中存在著多種基因參與，在患者中也存在著許多個(gè)體差異。因此，通過(guò)臨床病理學(xué)診斷指標(biāo)預(yù)測(cè)腫瘤預(yù)后也存在著一定的局限性[4]。隨著分子醫(yī)學(xué)的不斷進(jìn)步，分子預(yù)后指標(biāo)將成為潛在的腫瘤預(yù)后生物學(xué)指標(biāo)。近期的研究認(rèn)為宮頸腺癌是一類激素依賴性的腫瘤，并且許多實(shí)驗(yàn)也明確了雌激素受體和宮頸腺癌之間的聯(lián)系。同樣，TGF-β也被認(rèn)為是子宮頸的人類乳頭瘤病毒16感染和上皮腫瘤的預(yù)后指標(biāo)[5,6]。Stoica等[7]發(fā)現(xiàn)，TGF-β能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞中ER的表達(dá)。但是，激素與宮頸腺癌的具體機(jī)制尚不清楚。目前，我們檢測(cè)了宮頸腺癌患者中TGF-β和ER蛋白的表達(dá)水平，并分析了臨床病理學(xué)指標(biāo)與腫瘤組織中TGF-β和ER的關(guān)系，明確了TGF-β和ER能夠作為一種潛在的臨床宮頸腺癌預(yù)后指標(biāo)。

1 材料和方法

1.1 病例收集 我們收集132例Ib期-IIa期宮頸腺癌患者的石蠟切片以及臨床病歷資料。患者年齡33歲-70歲，平均年齡43.6歲。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics,FIGO）2000標(biāo)準(zhǔn)，Ib期病例組包括52例患者，IIa期病例組包括80例病例。上述132例病例均為腺癌。78例患者的腫瘤直徑＞4 cm，27例＜4 cm。60例患者的宮頸浸潤(rùn)深度＞2/3，72例≤2/3。19例患者存在陰道復(fù)發(fā)，94例患者未見(jiàn)復(fù)發(fā)。70例患者存在淋巴轉(zhuǎn)移，62例患者未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有實(shí)驗(yàn)均得到患者同意，并通過(guò)倫理委員會(huì)驗(yàn)證。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 所有患者均接受適當(dāng)?shù)幕熀头暖煛?duì)患者從接受手術(shù)起進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間26個(gè)月-99個(gè)月，平均隨訪時(shí)間約61個(gè)月。20例正常宮頸標(biāo)本作為對(duì)照組。

1.3 試劑及抗體 TGF-β單克隆抗體、ER單克隆抗體、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。陽(yáng)性結(jié)果判斷：TGF-β和ER主要在細(xì)胞質(zhì)著色，呈棕色彌漫或顆粒狀。根據(jù)切片中陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例分為：TGF-β陽(yáng)性組、ER陽(yáng)性組、TGF-β與ER雙陽(yáng)性組、TGF-β與ER雙陰性組。結(jié)果判斷由兩名病理醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均以SPSS 7.0統(tǒng)計(jì)軟件包完成。兩組間率的比較用χ2檢驗(yàn)或精確概率法，等級(jí)資料用兩樣本比較的秩和檢驗(yàn)，轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)危險(xiǎn)因素用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 TGF-β、ERα在不同的宮頸上皮中表達(dá)不同 我們首先通過(guò)免疫組化染色觀察TGF-β以及ERα在三組中的表達(dá)陽(yáng)性情況，結(jié)果表明，TGF-β在正常宮頸、慢性炎癥宮頸以及宮頸癌中上皮細(xì)胞的表達(dá)陽(yáng)性率分別為35.00%、55.00%和71.21%，均有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。同時(shí)，ERα在正常宮頸、慢性炎癥宮頸以及宮頸癌上皮中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為35.00%、50.00%和68.18%，提示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，在慢性炎癥以及宮頸癌中，宮頸上皮細(xì)胞中的TGF-β與ERα的表達(dá)量均出現(xiàn)明顯增高，其中又以宮頸癌增高更為明顯，提示TGF-β、ERα與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展存在相關(guān)性，見(jiàn)表1。隨后，通過(guò)對(duì)免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TGF-β以及ERα在正常以及慢性炎癥的宮頸上皮細(xì)胞中表達(dá)量極低，而在宮頸上皮腫瘤中表達(dá)量則為強(qiáng)陽(yáng)性，見(jiàn)圖1、圖2。

2.2 TGF-β與ERα的表達(dá)量與臨床指標(biāo)存在相關(guān)性 隨后，我們又將TGF-β、ERα的蛋白質(zhì)表達(dá)情況與患者的HPV感染史、侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及復(fù)發(fā)情況之間的關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，上述臨床指標(biāo)均與兩種蛋白的表達(dá)量存在相關(guān)性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），見(jiàn)表2。但是，發(fā)病年齡以及腫瘤直徑則與兩種蛋白質(zhì)表達(dá)情況無(wú)明顯聯(lián)系。進(jìn)一步的分析我們還發(fā)現(xiàn)，隨著TGF-β、ERα的蛋白表達(dá)不斷上升，上述臨床指標(biāo)也出現(xiàn)了惡性程度提高的現(xiàn)象。隨后，我們還對(duì)TGF-β、ERα兩種蛋白質(zhì)的表達(dá)情況與患者生存期進(jìn)行了分析，從生存曲線中，我們發(fā)現(xiàn)，TGF-β與ERα雙陰性組的生存期顯著高于雙陽(yáng)性以及單陽(yáng)性組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），而TGF-β單陽(yáng)性組或ERα單陽(yáng)性組以及雙陽(yáng)性組之間則未見(jiàn)明顯差異，見(jiàn)圖3。同樣的，雙陰性組患者的生存率也顯著高于其他三組，但在其他三組之間則未見(jiàn)顯著性差異。Cox回歸分析也表明，ERα陽(yáng)性、TGF-β陽(yáng)性或者雙陽(yáng)性均能夠顯著性的增加死亡危險(xiǎn)，見(jiàn)表3。多變量分析同樣表面，HPV感染史以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著的增加死亡風(fēng)險(xiǎn)，具有HPV感染史的患者死亡率較陰性組提高了1.698倍（HR=1.698,95%CI: 1.089-2.648）。而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者其死亡率提高了1.650倍（HR=1.650,95%CI:1.070-2.544）。

3 討論

過(guò)去的大量研究已經(jīng)表明，TGF-β在宮頸上皮惡性腫瘤中發(fā)揮著重要的作用。TGF-β在宮頸癌中能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，對(duì)腫瘤細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。與這種功能相對(duì)應(yīng)的，許多臨床研究也表明，TGF-β在宮頸癌中出現(xiàn)高表達(dá)的情況[8]。我們的研究表明，相較于正常組織，腫瘤組織中的TGF-β表達(dá)量明顯上升，與之前的研究結(jié)果相互印證，同時(shí)也再次說(shuō)明了雌激素分泌水平的改變是宮頸癌癌變的起始環(huán)節(jié)。

表1 不同組織中TGF-β與ERα的表達(dá)水平

圖1 TGF-β在不同組織中的表達(dá)水平

圖2 ERα在不同組織中的表達(dá)水平

表2 TGF-β與ERα表達(dá)水平與臨床腫瘤指標(biāo)的關(guān)系

表3 TGF-β與ERα與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系

圖3 TGF-β與ERα表達(dá)水平與宮頸癌預(yù)后的關(guān)系

同時(shí)，本研究還首次指出，TGF-β與ERα能夠作為宮頸上皮惡性腫瘤的獨(dú)立因素，并且對(duì)宮頸癌的生存期、侵襲深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等均表現(xiàn)出明確的相關(guān)性[9-11]。通過(guò)對(duì)這兩種蛋白質(zhì)表達(dá)量的檢測(cè)，能夠?qū)m頸上皮惡性腫瘤的預(yù)后做出一定的預(yù)測(cè)，并預(yù)判患者的復(fù)發(fā)情況。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常宮頸組織以及慢性炎癥宮頸組織相比，TGF-β和ERα在宮頸癌組織中表達(dá)明顯上升（P＜0.05）。TGF-β和ERα的表達(dá)與宮頸上皮癌的發(fā)生年齡、腫瘤直徑等一般臨床病理因素?zé)o相關(guān)（P＞0.05），而與患者的HPV感染史、腫瘤的病理類型、組織學(xué)分級(jí)、侵襲深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，TGF-β和ERα雙陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率、病理學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等明顯高于陰性表達(dá)者（P＜0.01）；TGF-β和ERα表達(dá)在宮頸癌患者組織中明顯增高（P＜0.05）；Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型多因素分析表明，TGF-β和ERα是影響宮頸癌預(yù)后的重要獨(dú)立因素，TGF-β和ERα表達(dá)雙陽(yáng)性的宮頸癌患者預(yù)后差。通過(guò)本研究證明，TGF-β以及ERα在宮頸癌患者中的表達(dá)量能夠成為一類可靠的宮頸癌預(yù)后的分子標(biāo)記物，同時(shí)，也可能成為宮頸癌復(fù)發(fā)的潛在治療靶點(diǎn)。

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Expression of TGF-β and ER protein in stage Ib-IIa cervical adenocarcinoma patients and its relationship with prognosis

Wen SUN,Wenmao XU,Juan YIN
Institute of Molecular Medicine,Springer Medical Research Institute,Beijing 100054,China

ObjectiveThe incidence of stage Ib-IIa accounts about 60% to 70% of all cervical adenocarcinoma patients.Our study aims to investigate the prognostic relationship of protein estrogen receptor alpha (ERα)and transforming growth factor beta (TGF-β) in cervical adenocarcinoma patients.MethodsWe used immunohistochemistry to detect ERα and TGF-β in carcinomas and incisal margins of 132 cases with cervical adenocarcinoma,20 cases with normal cervix,and 20 cases with chronic cervicitis.Uni- and multivariate analysis was applied to evaluate the prognostic significance of TGF-β and ERα in carcinomas.ResultsThe results indicated that the positive expression of TGF-β in carcinomas was 71.21%,significantly higher compared to that in thenormal cervix (35%)and chronic cervicitis (55%) (χ2=8.901,P=0.012).Similarly,the positive expression of ERα in the carcinomas was 68.18%,significantly higher compared to the normal cervix (35%) and chronic cervicitis (50%) (χ2=7.693,P=0.021).Both TGF-β and ERα in the carcinomas were associated with the vaginal recurrence,infection of HPV,depth of infiltration,and lymphatic metastasis (P＜0.05).The conjugation of TGF-β and ERα was an independent prognostic factor for cervical adenocarcinoma.Survival curve showed that the positive TGF-β1 and ERα indicated a short life time of patient with cervical adenocarcinoma.Conclusions The expression of TGF-β and ERα protein in the carcinomas had a significant prognostic value in a patient of stage Ib-IIa in cervical adenocarcinoma.

Cervical adenocarcinoma; TGF-β; ERα; Prognosis