血清GP73及DCP水平用于乙肝病毒相關肝細胞癌診斷的研究

熊志遠 倪東京 何維新★

血清GP73及DCP水平用于乙肝病毒相關肝細胞癌診斷的研究

熊志遠 倪東京 何維新★

目的探討血清高爾基蛋白73（GP73）及脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）水平用于慢性乙型肝炎病毒（HBV）相關肝細胞癌（HCC）診斷的臨床價值。方法納入2014年8月至2016年4月就診的HBV相關HCC患者126例，同時設置肝硬化患者（n=96）及慢性乙型肝炎（CHB）患者（n=68）作為對照。患者就診時記錄一般情況及常規實驗室指標，檢測血清GP73、DCP及AFP水平。ROC曲線檢測GP73、DCP及AFP單獨或聯合用于HCC診斷的價值。結果血清GP73水平由高至低依次為HCC組、肝硬化組及CHB組；DCP水平由高至低依次為HCC組、肝硬化組及CHB組。HCC組中，臨床分期分別與血清AFP、GP73及DCP水平呈正相關，AFP與GP73及DCP呈正相關。GP73單獨診斷的AUC為0.790，DCP的AUC為0.752，AFP聯合GP73及DCP的AUC為0.869。結論血清GP73及DCP水平在HBV相關HCC中顯著升高且與臨床分期正相關，GP73、DCP及AFP聯合診斷HCC的臨床價值較高。

肝細胞癌 肝硬化 慢性乙型肝炎 甲胎蛋白 高爾基體蛋白73 脫-γ-羧基凝血酶原

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染引起的慢性乙型肝炎（CHB）在臨床上十分常見，未經有效治療的患者可進展為肝硬化及肝細胞癌（HCC），甚至導致病死[1]。本研究通過檢測HBV相關HCC患者外周血循環高爾基蛋白73（GP73）及脫-γ-羧基凝血酶原（DCP）水平，并與甲胎蛋白（AFP）進行對比，探討這兩項指標用于HCC診斷的臨床價值。

1 臨床資料

1.1 病例來源 納入2014年8月至2016年4月在本院感染科及腫瘤科就診的HBV相關HCC患者126例（HCC組），平均年齡（48.54±8.32）歲，性別比（男/女）為89/37；同時納入HBV相關肝硬化患者96例（肝硬化組）及CHB患者68例作為對照（CHB組）。CHB的診斷標準參考最新的《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》：HBsAg和（或）HBV DNA陽性＞6個月，且存在由HBV持續感染引起的慢性肝臟炎癥[2]。HBV相關肝硬化的診斷根據肝組織活檢、B超、CT、MRI、消化道內鏡（存在食管胃底靜脈曲張）等檢查結果，結合臨床表現確定[3]。HCC根據肝組織活檢或影像學檢查確定。排除標準：（1）妊娠婦女及兒童。（2）無HBV感染的HCC患者。（3）合并HCV、HIV感染者。飲酒史定義：酒精攝入量（男性）≥40g/d，女性≥20g/d，一般持續＞5年。

1.2 患者一般情況及臨床指標的檢測 患者就診時采集外周血2ml，分離外周血清，使用羅氏（型號：Cobas8000 C701）生化分析儀檢測谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總膽紅素（TBIL）等生化指標，試劑為儀器配套試劑。HBV DNA定量檢測使用TaqMan PCR方法檢測，儀器為ABI公司生產的ABI7500型PCR儀，試劑購自科華生物科技有限公司，檢測下限為50 IU/ml。

1.3 血清AFP、GP73及DCP的檢測 血清AFP的檢測使用化學發光法，儀器為美國雅培公司生產的化學發光分析儀（型號：Architec I2000），試劑為儀器配套試劑。血清GP73及DCP的檢測均使用酶聯免疫吸附測定（ELISA）方法，GP73的試劑盒（Human GP73 ELISA Kit）購自上海歌凡生物科技有限公司，DCP的試劑盒（Human DCP ELISA Kit）購自上海遠慕生物科技有限公司。GP73及DCP的檢測分別按試劑盒要求進行操作，所有樣本設置2個復孔，根據標準曲線計算樣本濃度，結果取平均值。

1.4 統計學方法 采用SPSS 18.0 統計軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以n或%表示，組間比較采用χ2檢驗。正態分布數據的相關性分析使用Pearson相關法，非正態分布數據使用Spearman相關法。ROC曲線檢測指標的診斷效能，曲線下面積（AUC）≥0.700提示診斷價值較高。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者一般情況及臨床指標 見表1。

表1 患者一般情況及臨床指標（±s）

表1 患者一般情況及臨床指標（±s）

注：a：HCC組中48例（38.1%）患者血清HBV DNA載量低于檢測下限；b：肝硬化組中33例（34.4%）患者血清HBV DNA載量低于檢測下限

HCC組（n=126）肝硬化組（n=96）CHB組（n=68）t或χ2P值年齡（歲）48.54±8.3245.46±9.4034.54±8.6047.911＜0.001性別（男/女）89/3770/2648/200.1660.920 BMI（kg/m2）24.54±4.6223.09±3.8524.87±4.865.3540.069吸煙[n（%）]57（45.2%）54（56.3%）41（60.3%）4.8610.088飲酒[n（%）]71（56.3%）60（62.5%）40（58.8%）0.8530.653 ALT（U/L）98.79±67.62115.79±74.97 206.05±86.9527.352＜0.001 AST（U/L）88.11±66.81106.90±77.66 196.78±87.1433.982＜0.001 TBIL（μmol/L）66.63±3.3886.04±55.9161.23±37.614.1910.123 HBV DNA（log10IU/ml）3.16±0.99a3.91±1.29b4.42±1.5028.853＜0.001 AFP（μg/L）510.24±461.56 135.47±96.15 38.51±34.53114.508＜0.001 GP73（μg/L）230.79±119.97 113.62±79.53 32.41±21.6097.168＜0.001 DCP（μg/L）13.59±5.498.70±4.524.95±3.0992.655＜0.001

2.2 血清AFP、GP73、DCP與臨床指標的相關性分析 HCC組中，臨床分期分別與血清AFP（R=0.367，P＜0.001）、GP73（R=0.412，P＜0.001）及DCP（R=0.470，P＜0.001）水平呈顯著正相關，GP73與AFP（R=0.471，P＜0.001）、DCP（R=0.319，P＜0.001）呈顯著正相關，且DCP與AFP呈顯著正相關（R=0.285，P＜0.001）。肝硬化組及CHB組中，血清AFP、GP73、DCP與各項指標均無顯著相關性。

2.3 AFP、GP73及DCP用于HBV相關HCC的診斷價值 AFP單獨用于區別診斷肝硬化及HCC的AUC為0.770（95%CI：0.707～0.834，P＜0.001），cut-off值取為235.4 μg/L時，診斷敏感度為0.659，特異度為0.875。GP73單獨診斷的AUC為0.790（95%CI：0.732～8484，P＜0.001），Cut-off值取為140.8μg/L，診斷敏感度為0.754，特異度為0.687。DCP單獨診斷的AUC為0.752（95%CI：0.688～0.815，P＜0.001），Cutoff值取為10.3 μg/L時，診斷敏感度為0.730，特異度為0.656。AFP聯合GP73區別診斷肝硬化及HCC的AUC為0.841（95%CI：0.790～0.893，P＜0.001），AFP聯合DCP的ACU為0.839（95%CI：0.784～0.893，P＜0.001），AFP聯合GP73及DCP的AUC為0.869（95%CI：0.819～0.918，P＜0.001）。

3 討論

存在慢性HBV感染的患者一旦出現肝硬化，除非進行肝移植，5年內進展為HCC的概率可高達5%～20%[4]。而HCC患者出現顯著癥狀或確診時多已處于中晚期，缺少有效的治療措施，臨床預后較差。對HCC的早期準確診斷可以及時指導臨床采取針對性治療措施，患者的預后也可以得到顯著改善。AFP是目前應用最廣泛用于HCC診斷及預后的無創血清標志物，但其準確度仍受到多種因素影響，容易出現漏診。因此，尋找更為敏感及特異的無創血清學指標具有重要的臨床意義。

本資料結果顯示，與肝硬化及CHB患者比較，HCC患者血清GP73及DCP水平存在顯著升高，且升高程度與高臨床分期相關。同時，GP73及DCP單獨或聯合AFP時可以較好的用于HCC的診斷。同時，本資料中還探討了GP73、DCP與AFP聯合用于診斷的效能，結果顯示如果三者聯合，較單項指標的診斷準確度更高。目前，對HCC的無創診斷研究熱點也逐漸從單一指標向多種聯合指標（數學模型）轉變，聯合多種指標有助于互相彌補單一指標的局限性，從而提高診斷準確度[5]。然而，由于HCC生物學特性復雜，尚無指標能夠完全準確的替代肝組織活檢作為診斷金標準。

綜上所述，本資料結果顯示，血清GP73及DCP可用于HBV相關HCC的診斷，且GP73、DCP及AFP聯合能夠進一步提高診斷效能。同時，本研究也存在一定的不足之處，如納入的總體樣本量較小，且由于臨床活檢標本收集的限制，未同時對HCC組織中GP73及DCP的表達情況進行觀察。在下步的深入研究中，還需要大樣本前瞻性的研究來進一步驗證GP73及DCP用于HCC患者早期篩查診斷及遠期預后的臨床價值，從而為臨床診斷及預后提供更多可靠方便的指標。

[1] Trepo C,Chan HL,Lok A．Hepatitis B virus infection．Lancet, 2014,384(9959):2053-2063．

[2] 中華醫學會肝病學分會,中華醫學會感染病學分會．慢性乙型肝炎防治指南(2015年更新版)．臨床肝膽病雜志,2015,31(12):1941-1960．

[3] 科技部十二五重大專項聯合課題組專家．乙型肝炎病毒相關肝硬化的臨床診斷、評估和抗病毒治療的綜合管理．臨床肝膽病雜志,2014,30(2):99-108．

[4] Eun JR,Lee HJ,Kim TN,et al．Risk assessment for the development of hepatocellular carcinoma: according to on-treatment viral response during long-term lamivudine therapy in hepatitis B virus-related liver disease．J Hepatol,2010,53(1):118-125．

[5] AlSalloom AA． An update of biochemical markers of hepatocellular carcinoma． Int J Health Sci (Qassim), 2016, 10(1):121-136．

ObjectiveTo investigate the clinical diagnostic value of serum Golgi protein-73 （GP73） and Des-γ-carboxy prothrombin（DCP） levels in patients with HBV-related HCC.MethodsA total of 126 patients with HBV-related HCC from August 2014 to April 2016 in our hospital were enrolled，and 96 cirrhosis （n=96） and chronic hepatitis B （CHB） （n=68） patients were enrolled as control. The general information and laboratory parameters were recorded，and the serum GP73，DCP and AFP levels were tested. The correlations between Persepsin and parameters were analyzed，and diagnostic efficiency of GP73 and DCP for HCC in patients infected with HBV was calculated by ROC curve.ResultsSerum GP73 levels were divided into HCC group, cirrhosis group and CHB group from high to low. The DCP levels were divided into HCC group, cirrhosis group and CHB group from high to low. In HCC group，the clinical stage was significantly positively correlated with AFP，GP73 and DCP.The AFP level was positively correlated with GP73 and DCP . AUC of GP73 used for the diagnosis of HCC was 0.790，the AUC of DCP was 0.752，and the AUC of GP73 combined with DCP was 0.869.ConclusionSerum GP73 and DCP levels are elevated in patient with HBV-related HCC，and they can be used to improve the diagnosis of HCC combined with AFP.

Hepatocellular carcinoma Cirrhosis Chronic hepatitis B α-fetoprotein Golgi protein-73 Des-γ-carboxy prothrombin

315040中國人民解放軍113醫院感染科

*通信作者