GC-MS法測定羅漢果中擬除蟲菊酯農藥殘留量

周先麗，王鵬程，李遠遠，程柳，羅琴，梁成欽，付明磊，*

（1.桂林醫學院廣西高校生藥學重點實驗室，廣西桂林541004；2.中國有色桂林礦產地質研究院有限公司，廣西桂林541004）

GC-MS法測定羅漢果中擬除蟲菊酯農藥殘留量

周先麗1，王鵬程1，李遠遠1，程柳2，羅琴1，梁成欽1，付明磊1，*

（1.桂林醫學院廣西高校生藥學重點實驗室，廣西桂林541004；2.中國有色桂林礦產地質研究院有限公司，廣西桂林541004）

建立氣質聯用（Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）測定羅漢果中6種擬除蟲菊酯類農藥的殘留量方法。樣品用石油醚-丙酮混合溶劑超聲提后過固相萃取小柱凈化，經HP-5MS色譜柱分離，以氣相色譜質譜法進行檢測，用外標法計算含量。結果表明：6種擬除蟲菊酯類農藥在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL范圍內呈現良好的線性關系，相關系數為 0.999 1～0.999 9，檢出限為 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg。樣品中 3 個加標水平的回收率為 83.5%～106.1%，相對標準偏差（RSD）為0.9%～6.5%。本試驗所建立的方法操作簡便，具有良好的回收率，精密度和靈敏度，符合檢測要求，可用于羅漢果中6種擬除蟲菊酯類農藥殘留的測定。

羅漢果；擬除蟲菊酯；氣相色譜-質譜法（GC-MS）

羅漢果[Siraitia Grosvenorii（Swing le）C.Jeffrey]屬葫蘆科羅漢果屬的植物，具有清肺止咳，抗菌消炎等功效，是廣西桂北地區特色藥材[1]。羅漢果除了藥用外，大部分用來生產甜苷，用于食品甜味劑，比如羅漢果糖，因為其含有甜味素，甜度高，深受糖尿病、肥胖者的喜歡[2-3]。由于羅漢果栽培時間較長，加上桂北地區氣候溫暖、濕潤，非常容易產生各種病蟲害，因此為了保證產量，不可避免要使用農藥[1，4]。擬除蟲菊酯類農藥是廣譜殺蟲劑，由于具有高效、低毒的特點，在農業生產中廣泛用于害蟲防治[5-7]。隨著人們生活水平的不斷提高，食品的安全問題日益被人們所重視，對農藥殘留限量的要求也將更嚴格。擬除蟲菊酯類農藥的殘留對人的健康危害極大，即使是低劑量的長期接觸也會引起慢性疾病，甚至還存在致癌風險[8-9]，所以摸索和建立靈敏度更高，抗干擾能力更強，定量更準確擬除蟲菊酯類農藥的檢測方法是非常必要的。目前檢測擬除蟲菊酯農藥殘留常用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC） 與氣相色譜法（Gas chromatography，GC），較少使用氣相色譜質譜聯用法（GC-MS）[10]。與GC 和HPLC相比，GC-MS靈敏度更高，抗干擾能力更強，定量更準確[11-12]。在此前工作中我們已利用HPLC-MS法和GC-MS法測定了羅漢果中氨基甲酸酯和有機氯農藥的殘留量[13-14]，而在本文中我們利用GC-MS法對羅漢果中6種擬除蟲菊酯的農藥殘留進行了檢測，以便為羅漢果的安全使用提供更系統的質量控制依據。

1 材料與方法

1.1 材料

羅漢果樣品分別采于廣西永福百壽、永福堡里、臨桂中庸、臨桂茶垌、龍勝飄里。

1.2 儀器與試劑

GCMS-QP2010氣質聯用儀：日本島津公司，配有自動進樣器（AOC-20i）；RE-5298A 旋轉蒸發器：上海亞榮生化儀器廠；DFY-400高速中藥粉碎機：溫嶺市林大科技有限公司；B2200S-7臺式超聲清洗機：必能信超聲有限公司。6種農藥標準品甲氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯：農業部環境保護科研監測所。

1.3 方法

1.3.1 氣相色譜-質譜分析條件

氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進樣口溫度為 250℃，He載氣（≥99.999%），載氣流量3 mL/min；分流進樣，分流比1∶1；柱升溫程序：初始溫度90℃，保持1 min，以30℃/min升至230℃，保持1 min，以2℃/min升至280℃；柱流速率為1.46 mL/min；進樣量2.0 μL。

質譜條件：接口溫度為280℃，EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，溶劑延遲時間12 min，傳輸線溫度280℃；選擇性離子檢測模式測定；定量方法為外標法；數據采集方式為全掃描模式，質量掃描范圍70 amu～400 amu，選擇離子強度大、不受干擾的離子為定量離子，各化合物定量離子及定性離子見表1。

表1 羅漢果中擬除蟲菊酯農藥殘留的保留時間和特征離子Table 1 The Retention Time and Characteristic Ions of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii

1.3.2 樣品提取

將羅漢果樣品用自來水沖洗，再用二次蒸餾水沖洗，置于烘箱中烘干（60℃）后，粉碎，過5號篩。精密稱取2.0 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加石油醚（60℃～90℃）-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液 30 mL，超聲處理15 min，過濾，藥渣再重復上述操作2次后，合并濾液。于45℃減壓濃縮至干，殘渣用少量正己烷反復操作3次，至干，殘渣再加適量正己烷溶解，待凈化。

1.3.3 樣品凈化

將混合小柱（由下至上依次為無水硫酸鈉2.0 g、弗羅里硅土4.0 g、氧化鋁1.0 g和無水硫酸鈉2.0 g）作為凈化柱，用石油醚-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液20 mL淋洗柱體后，將待凈化液轉移至凈化柱中，用石油醚-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液50 mL洗脫，收集洗脫液，于40℃～45℃減壓濃縮至干，以正己烷定容至10 mL溶解，待測。

2 結果與討論

2.1 GC-MS分析條件選擇

試驗對氣相色譜柱、柱流速率、進樣口溫度以及質譜接口溫度等因素進行比較，確定了最佳條件（1.3.1）。結果表明分離良好，各農藥的出峰順序如圖1、圖 2。

2.2 線性范圍與檢測限

分別精密量取混合對照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于10 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度并搖勻，作為混合對照品溶液，每個濃度平行3份，按“1.3.1”項下色譜條件分析，繪制標準曲線。得到線性方程，見表2。

由此可見6種擬除蟲菊酯農藥在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL之間線性關系良好，相關系數（r）為0.999 1～0.999 9。檢出限按信噪比3∶1計算，6種擬除蟲菊酯農藥檢出限為 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg。可見，6 種擬除蟲菊酯農藥均有較好的線性關系及較高的靈敏度。

圖1 6種擬除蟲菊酯農藥混合對照品色譜圖Fig.1 6 pyrethroid pesticide standard samples chromatogram

圖2 樣品加標色譜圖Fig.2 Chromatogram of sample after adding standard

表2 6種擬除蟲菊酯農藥回歸方程及檢出限（n=3）Table 2 Standard curves and detection limits of 6 pyrethroid pesticide

2.3 精密度與穩定性

精密量取混合對照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL共6個體積，至10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度并搖勻，作為對照品溶液，臨用現配。精確量取上述對照品溶液各1 mL，每個濃度平行3份，按“1.3.1”項下色譜條件分析，繪制標準曲線；準確吸取質量濃度為500 μg/L混合標準品溶液依“1.3.1”項下色譜條件進行分析，連續進樣6次，檢測儀器的精密度。在 0、2、4、6、8、10、12 h 時間段對濃度為 50 μg/mL 的混合對照品溶液進行測定，檢測穩定性。精密度試驗結果測得各種農藥的RSD為1.82%～3.55%，表明儀器精密度良好。穩定性試驗結果表明6種擬除蟲菊酯農藥在12個小時內穩定性良好，能滿足含量測定的要求。

2.4 加樣回收試驗

準確稱取同一樣品9份，分3水平加入濃度分別為 0.05、0.125、0.25μg/g 混合對照品溶液，按“1.3.2”項制備樣品，按“1.3.1”項下色譜方法測定分析，計算回收率。加樣回收試驗結果見表3。

6種擬除蟲菊酯農藥的加樣平均回收率為83.5%～106.1%，相對標準偏差為0.9%～6.5%。本測定方法的準確度和精密度能滿足測定的需要。

2.5 樣品分析

按“1.3”項處理羅漢果，每個產地樣品取2份，按“1.3.1”項下色譜方法每份測3次，測得5個產地羅漢果中除蟲菊酯類農藥殘留量見表4。

表3 樣品中3個加標水平下6種擬除蟲菊酯農藥加樣回收率（n=6）Table 3 Recoveries of six pyrethroid pesticides determined at three spiked levels（n=6）

表4 5個產地羅漢果樣品中擬除蟲菊酯類農藥殘留量檢測結果Table 4 Test results of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii from five places mg/kg

結果表明永福百壽、永福堡里、龍勝飄里、臨桂茶垌四個地區的羅漢果分別含氯氰菊酯為0.860、0.085、0.461、0.905 mg/kg。臨桂中庸羅漢果含氯菊酯0.109 mg/kg，其它均未檢出。

3 結論

與文獻[15]相比，該方法對6種擬除蟲菊酯農藥殘留的檢測的靈敏度更高，能滿足羅漢果中擬除蟲菊酯類農藥殘留檢測要求。為了測定桂林不同產地羅漢果的擬除蟲菊酯類農藥的殘留分布情況，我們利用所建立的羅漢果中6種擬除蟲菊酯類農藥的殘留GCMS分析方法，考察了永福百壽、永福堡里、龍勝飄里、臨桂茶垌和臨桂中庸5個產區的羅漢果擬除蟲菊酯類農藥的殘留情況。結果發現這5個產地的羅漢果都含有擬除蟲菊酯類農藥殘留，但主要為氯氰菊酯。該研究結果，對提高羅漢果品質，促進羅漢果的產業化發展具有一定價值。

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Determination of 6 Kinds of Pyrethroid Pesticides in Siraitia Grosvenorii by GC-MS

ZHOU Xian-li1，WANG Peng-cheng1，LI Yuan-yuan1，CHENG Liu2，LUO Qin1，LIANG Cheng-qin1，FU Ming-lei1，*
（1.Guangxi Key Laboratory of Pharmacognosy in University，Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China；2.China Nonferrous Metals（Guilin）Geology and Mining Co.，Ltd.，Guilin 541004，Guangxi，China）

The method for determination of six pyrethroid pesticides in Siraitia Grosvenorii by gas chromatography-mass spectrometry was established.The samples were extracted with organic solvent by ultrasound，and pyrethroid pesticides were cleaned-up by solid-phase extraction column，determined by GC-MS with HP-5MS chromatographic column.The contents were calculated by the external standard method.The results showed that the linear range was from 0.1 μg/mL to 1.0 μg/mL with correlation coefficients（r=0.999 1-0.999 9）.The limits of detection were 0.139 μg/kg-5.262 μg/kg，and the average recoveries ranged from 83.5%to 106.1%，with the relative standard deviations from 0.9%to 6.5%.The proposed method is effective，quick，sensitive and reproducible，and can be applied to determine pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii.

Siraitia Grosvenorii；pyrethroid；gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.029

廣西科學研究與技術開發計劃項目（桂科能1598025-18、桂科能14123006-21）

周先麗（1979—），女（漢），副教授，博士，主要從事天然藥物研究。

*通信作者：付明磊（1965—），男（漢），主管藥師，學士，主要從事天然藥物活性成分發現與開發。

2017-07-26