黑木耳多糖降血脂作用的小鼠實驗分析

劉榮，趙影，欒淑瑩，王振宇

（1.東北林業大學林學院，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱工業大學食品科學與工程學院，黑龍江哈爾濱150090）

黑木耳多糖降血脂作用的小鼠實驗分析

劉榮1，趙影1，欒淑瑩1，王振宇2，*

（1.東北林業大學林學院，黑龍江哈爾濱150040；2.哈爾濱工業大學食品科學與工程學院，黑龍江哈爾濱150090）

采用不同劑量的兩種黑木耳酸性多糖（Auricularia Polysaccharide，AP）對高脂模型小鼠進行灌胃，研究黑木耳多糖對高脂模型小鼠脂肪指數及相關酶類影響并初步探究黑木耳酸性多糖的降血脂作用。結果表明，兩種黑木耳多糖均可增加小鼠糞便中的膽酸鹽含量、卵磷脂膽固醇?；D移酶（lecithin-cholesterolacyltransferase，LCAT）含量（p<0.05）以及激素敏感性脂肪酶（hormone-sensitive triglayceride lipase，HSL）含量（p<0.05）；降低小鼠脂肪指數、HMG-CoA還原酶（Hydroxy methylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor，HMGR）含量以及胰島素（insulin，INS）活性；且堿提除蛋白多糖組（JC組）的效果優于堿提不除蛋白組（J組）。說明兩種黑木耳多糖可通過調節相關酶的活性，達到降血脂的效果，且JC組的效果更好。

黑木耳多糖；高血脂癥；降血脂

隨著現代生活水平的提高，人們的飲食結構和生活習慣也在發生改變，高血脂癥的發生率不斷增加[1]。高血脂的臨床主要表現為患者體內的血漿血脂含量明顯高于正常水平[2]，是一種對人體危害極大的心血管系統疾病。據統計，在我國15歲～69歲做過血脂檢查的人群中，高血脂癥者占40%[3]。因此，本病的防治日益受到醫學界的廣泛重視，研制有調節血脂作用的保健食品對人類健康有重要意義[4-5]。加速體內脂類分解代謝，減少其合成及沉積，可有效降低體內血脂水平。其中增加卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）、脂蛋白酯酶（Lipoprotein Esterase，LPL）以及高密度脂蛋白含量是一種有效的方法。

黑木耳多糖是一種重要的生物活性成分。許多研究顯示，黑木耳多糖具有降血壓、抗氧化、抗炎、降血糖、抗凝血、降血脂等生物活性[6-8]。本研究選用小鼠為實驗對象，通過兩種黑木耳多糖灌胃干預，研究兩種黑木耳多糖對高脂膳食小鼠卵磷脂膽固醇?；D移酶、HMG-CoA還原酶、激素敏感性脂肪酶、胰島素以及糞便中膽酸鹽含量的影響，旨在研究兩種黑木耳多糖對高血脂癥的預防作用并對兩種黑木耳多糖的降血脂效果進行比較。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明種雄性小鼠128只，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（黑）2013-004，體重（20±4）g。小鼠按清潔級動物飼養，自由進食，飲用潔凈水，保持實驗室環境衛生，溫度18℃～20℃，相對濕度50%～60%，分籠喂養，適應性喂養1周后開始實驗。

1.2 藥品、儀器及試劑

黑木耳多糖（AP，堿提不除蛋白簡寫為J，多糖含量為704.59 mg/g；堿提除蛋白多糖簡寫為JC，多糖含量為758.13 mg/g）：東北林業大學食品科學與工程學科提供；生理鹽水、卵磷脂膽固醇?；D移酶（LCAT）、HMG-CoA還原酶（HMGR）、激素敏感性脂肪酶（HSL）、胰島素（INS）試劑盒、硫酸溶液（取水65 mL，加濃硫酸50 mL，搖勻，即得濃度為8 mol/L的硫酸溶液）：南京建成生物工程所；膽酸標準品：中國藥品生物制品檢定所。

YP20001N電子天平：上海精天電子儀器廠；TDL-5臺式離心機：上?？婆d儀器；RT6000酶標儀：北京維欣儀奧科技；T6紫外可見分光光度計：北京普析通用。

1.3 測定指標及方法

1.3.1 動物分組及給藥設計

雄性小鼠128只（22±2）g，適應性喂養1周后，隨機分成8組，喂養飼料以及灌胃受試物的劑量如下：空白對照組（CN）：基礎飼料+生理鹽水；高脂對照組（HFD）：高脂飼料+生理鹽水；J低劑量組（J-1）：高脂飼料+受試物J溶液（25 mg/（kg·bw·d））；J中劑量組（J-2）：高脂飼料+受試物J溶液（50 mg/（kg·bw·d））；J高劑量組（J-3）：高脂飼料+受試物J溶液（100 mg/（kg·bw·d））；JC 低劑量組（JC-1）：高脂飼料+受試物 JC 溶液（25 mg/（kg·bw·d））；JC中劑量組（JC-2）：高脂飼料+受試物JC溶液（50 mg/（kg·bw·d））；JC高劑量組（JC-3）：高脂飼料+受試物JC溶液（100 mg/（kg·bw·d））。每日按0.1 mL/（10 g）·bw的劑量進行灌胃，自由攝食和飲水，每周測定體重，確定灌胃量。

1.3.2 糞便中膽酸鹽含量測定

每10天測定一次小鼠糞便中膽酸鹽含量，方法為紫外分光光度計法[9]。

1.3.3 LCAT、HMGR、HSL、INS 以及脂肪指數測定

按實驗要求喂養8周后，每組處死8只，最后一次灌胃的前一天晚上禁止小鼠進食，16 h后眼眶取血，血樣于4℃，3 000 r/min，離心15 min，分離血清后測定瘦素（LEP）含量。取適量的肝組織，以重量：體積=1∶9（mg/mL）加預冷的生理鹽水，放入組織勻漿器中研磨均勻，離心后取上清液轉，現制現用。測定LCAT、HMGCoA還原酶、HSL、胰島素及脂肪指數等各項指標值，測定方法按照試劑盒說明書測定。將剩下的小鼠接著按1.3.1方法喂養，喂至第12周，按1.3.3方法處理。

1.4 數據統計分析

用Excel軟件將數據處理后以±標準差表示，采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，p＜0.05或p＜0.01表示具有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 糞便中膽酸鹽的含量

糞便中膽酸鹽的含量見表1。

表1 糞便中膽酸鹽的含量Table 1 The content of cholate in faeces

至試驗結束時，顯示各組小鼠體毛色澤均無變化。表1顯示，縱向比較來看，JC組調節體內膽固醇效果要優于J組；橫向比較來看，隨著黑木耳多糖灌胃的時間越久，小鼠糞便中膽酸鹽含量排出越多，說明黑木耳多糖在調節體內膽固醇代謝含量方面效果顯著。

2.2 黑木耳多糖對小鼠脂肪指數的影響

黑木耳多糖對小鼠脂肪指數的影響見表2。

表2 黑木耳多糖對小鼠脂肪指數的影響Table 2 Effect of AP on fat of the mice

表2顯示，體內脂肪方面，縱向比較來看，第8周，灌胃組的平均值均低于HFD組，但差異不顯著；第12周，JC組和J-3組的脂肪指數顯著低于HFD組（p<0.05或p<0.01），且JC組在降低脂肪指數方面效果優于J組；橫向比較來看，第12周脂肪指數低于第8周，說明持續灌胃黑木耳多糖能有效控制小鼠脂肪的增加。

2.3 黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響

黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響見表3。

表3 黑木耳多糖對小鼠LCAT含量的影響Table 3 Effect of AP on LCAT in liver of the mice

表3顯示，對LCAT含量的影響方面，縱向比較來看，第8周時，J和JC組的中、高劑量組均極顯著高于HFD組（p<0.01），第12周時，各灌胃組均極顯著高于HFD組（p<0.01），且JC組的效果要優于J組。橫向比較來看，第12周LCAT含量比第8周有所升高，說明黑木耳多糖持續干預可顯著提高LCAT含量，從而達到降血脂效果。

2.4 黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響

黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響見表4。

表4 黑木耳多糖對小鼠HMGR含量的影響Table 4 Effect of AP on HMGR in liver of the mice

表4顯示，在HMGR方面，縱向比較來看，第8周時，除J-1組外，其余灌胃組的HMGR含量均顯著低于HFD組（p<0.01或p<0.05）；第12周時，各灌胃組HMGR含量均極顯著低于HFD組（p<0.01）。橫向比較來看，第8周時受試物已經起到顯著的降低HMGR的含量，至第12周持續用受試物干預，HMGR含量繼續降低，說明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果顯著，JC組效果優于J組。

2.5 黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響

黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響見表5。

表5 黑木耳多糖對小鼠HSL含量的影響Table 5 Effect of AP on HSLin liver of the mice

表5顯示，縱向比較來看，第8周和第12周時，各灌胃組HSL含量均極顯著高于HFD組（p<0.01），說明在第8周時黑木耳多糖已經起到了升高HSL含量的作用。橫向來看，第8周時各試驗組激素敏感性脂肪酶（HSL）含量增加最顯著，說明黑木耳多糖可以升高小鼠激素敏感性脂肪酶（HSL）含量；實驗至第12周時，激素敏感性脂肪酶（HSL）含量有所下降，說明在第8周時黑木耳多糖在調節體內HSL含量方面達到最優效果且JC組效果要優于J組。

2.6 黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響

黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響見表6。

表6 黑木耳多糖對小鼠INS含量的影響Table 6 Effect of AP on INS of the mice

表6顯示，對血清中胰島素（INS）含量的影響方面，縱向比較來看，第8周時，各組胰島素含量均在CN組和HFD組之間；第12周時，各灌胃組的INS含量均極顯著低于HFD組（p<0.01）且JC組效果優于J組。橫向來看，第8周與第12周胰島素含量相差不大，說明黑木耳多糖在調節胰島素含量上8周時已達到較優效果。

3 結論

體內膽固醇降解的主要途徑是通過膽管系統將膽汁酸排出體外[10]，因此可以通過測定游離膽酸鹽的含量間接得出膽固醇減少的量，進而表明降血脂的作用效果[11]。實驗表明，兩種黑木耳多糖均能有效的增加小鼠糞便中膽酸鹽的含量、促進體內膽固醇的降解，達到降血脂效果，且JC組效果優于J組。

LCAT是血漿脂蛋白中催化游離膽固醇酯化的關鍵酶，在高密度脂蛋白代謝和膽固醇逆轉運中起著重要作用[12-13]。高脂膳食誘導小鼠時，LCAT含量顯著降低，實驗結果表明，在用黑木耳多糖持續干預后，LCAT含量大大增加，這與蘇徳奇[14]和李孟婕[15]等研究結果一致。說明黑木耳多糖可增加LCAT的含量且JC組效果優于J組。

HMGR是脂代謝中的關鍵限速酶，要想減少內源性膽固醇，那么就應該降低HMGR的活性[16]，阻斷膽固醇的生物合成，使血液中總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇含量下降[17]。在實驗周期內，灌胃組小鼠HMGR的含量持續降低，說明黑木耳多糖在降低HMGR的含量方面效果顯著，JC組效果優于J組。

HSL是可以加快脂肪中的甘油三酯水解的速度，它可以水解很多脂質，對于降低體脂含量具有重要影響[18]。實驗結果表明，黑木耳多糖可顯著增加小鼠HSL含量，在第8周時達到最優效果且JC組效果優于J組。

胰島素是一種激素，它可以增強脂肪細胞對血液中脂肪酸的攝取和合成脂肪的能力，同時，又能抑制體內脂肪的分解，促進極低密度脂蛋白（Very lowdensity lipoproteins，VLDL）、低密度脂蛋白（Lowdensity lipoproteins，LDL）的合成[19]。實驗結果表明，黑木耳多糖有效的降低了高脂膳食小鼠體內胰島素含量，在第8周時達到最優效果且JC組效果優于J組。

綜上，黑木耳降脂多糖可增加LCAT的含量，促進組織、細胞內膽固醇的清除，維持細胞內膽固醇的穩態，同時抑制了HMG-CoA還原酶的合成，減少了膽固醇的內源性合成，因而降低了血清膽固醇水平。黑木耳降脂多糖還可通過增強HSL酶活性加速脂肪分解，降低血液胰島素水平抑制脂肪的合成，從而降低甘油三酯水平，達到降血脂的效果，同時JC組的降血脂效果要優于J組。

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The Blood Lipids-lowering Effects of Auricularia Polysaccharide on the Hyperlipidemia Mice

LIU Rong1，ZHAO Ying1，LUAN Shu-ying1，WANG Zhen-yu2，*
（1.School of Forestry，Northeast Forestry University，Harbin 150040，Heilongjiang，China；2.School of Food Science and Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin 150090，Heilongjiang，China）

To explore the lipid-lowering effect of polysaccharides from Auricularia auricula in hyperlipidemia mice，two kinds of polysaccharides from Auricularia was extracted at different doses，intragastrically given to hyperlipidemic model mice to explore their effects on fat index and related enzymes.Text results showed that two kinds of AP both could increase the content of cholate in faeces，the content of lecithin cholesterol acyltrans ferase（LCAT）and the content of hormone sensitive lipase（HSL）in the mice，the effect was significant（p<0.05）.They could decreased the fat index，the content of HMGR and the activity of Insulin（INS）obviously，too.the effect was significant（p<0.05）.Group JC was better than group J.The result showed that two kinds of AP could significantly reduce blood lipid levels by agenting the activity of related enzymes，the effect of JC group was better.

Auricularia polysaccharide；hyperlipidemia；blood lipids reduction

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.034

黑龍江省林業科學院2014年度科學試驗研究實施計劃（GA13B202）

劉榮（1971—），女（漢），副研究員，博士，研究方向：功能食品。

*通信作者

2017-03-10