胃癌患者血清miR-21水平變化及意義

戴凌，蔣志慶，張廣鈺，甘信利

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西桂林 541001)

胃癌患者血清miR-21水平變化及意義

戴凌，蔣志慶，張廣鈺，甘信利

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西桂林 541001)

目的觀察胃癌患者血清miR-21的水平變化，并探討其意義。方法選取胃癌患者60例(觀察組)，同期與之年齡、性別相匹配的體檢中心健康人群60例作為對照組，測定兩組受試者血清miR-21水平，并分析血清miR-21水平與胃癌患者組織分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、年齡、性別的相關(guān)性。結(jié)果觀察組血清miR-21水平高于對照組(Plt;0.05)，預(yù)后良好者血清miR-21水平低于預(yù)后不良者(Plt;0.05)。血清miR-21水平與胃癌患者的組織分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P均﹤0.05);與患者的年齡、性別無關(guān)(P均gt;0.05)。結(jié)論胃癌患者血清miR-21水平升高，miR-21可能參與胃癌的發(fā)生發(fā)展。

胃癌；微小RNA-21；臨床病理特征

胃癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，其致死率在腫瘤引起的死亡中排名第三[1]。據(jù)最新研究報道，全球每年約有952 000例胃癌患者，且每年約有700 000例死于胃癌[2]。引起胃癌的原因有多種：宿主的易感性，幽門螺桿菌的感染，環(huán)境因素，特別是飲食模式和吸煙[3]。根除幽門螺桿菌對于減少胃癌的發(fā)生有很大作用，但大部分胃癌患者就診時已處于晚期。CA199和CEA是兩大常見的腫瘤標(biāo)志物，但診斷胃癌的特異性和敏感性較低。微小RNA(miRNAs)是小的單鏈RNA分子，其長度為18～25個核苷酸，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)基因表達。研究發(fā)現(xiàn)，miRNAs參與細(xì)胞的多種生物學(xué)過程，包括增殖、分化、凋亡、生長等[4]，且miRNAs在癌癥發(fā)生發(fā)展中起重要作用[5]。其中，miR-21與腫瘤進展關(guān)系密切，包括肝細(xì)胞肝癌、胃癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、喉癌[6]等。2015年1～12月，我們觀察了胃癌患者血清miR-21的水平變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇本院2015年1～12月診斷為原發(fā)性胃癌患者60例(觀察組)，男35例、女25例，年齡45～70歲，其中﹤60歲者20例，≥60歲者40例。組織病理類型的判斷標(biāo)準(zhǔn)均參照WHO胃癌的病理學(xué)分類組織分化程度：低分化19例，中分化20例，高分化21例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例；TNM分期：Ⅰ+Ⅱ期22例，Ⅲ+Ⅳ期38例。隨訪1年，失聯(lián)12例，獲隨訪48例，48例中預(yù)后良好(判斷標(biāo)準(zhǔn)：無死亡，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，無復(fù)發(fā))30例，預(yù)后不良18例(死亡6例，發(fā)生轉(zhuǎn)移10例，復(fù)發(fā)2例)。另選取同期與觀察組匹配的體檢中心查體健康人群60例作為對照組。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂者；嚴(yán)重肝腎功能不全、心功能不全、嚴(yán)重感染者；神志不清，無法配合者。所有受試者獲得知情同意，并已通過我院倫理委員會的批準(zhǔn)。兩組年齡、性別具有可比性。

1.2 胃癌患者血清miR-21水平檢測 抽取患者空腹靜脈血液樣本2 mL，3 500 r/min，離心15 min，分離血清，置于-70 ℃低溫冰箱保存。采用TRIzol法從血清內(nèi)提取總RNA，然后反轉(zhuǎn)錄成cDNA(PrimeScript RT Reagent Kit，Takara)。用qRT-PCR法測定血清總miR-21，用U6 miRNA作為對照。miR-21擴增引物：正向引物：5′-ACGTTGTGTAGCTTATCAGACTG-3′,反向引物:5′-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3′;U6 miRNA擴增引物：正向引物：5′-ATTGGAACGATACAGAGAAGATT-3′,反向引物：5′-GGAACGCTTCACGAATTTG-3′。使用公式2-ΔΔCt計算miR-21相對表達量。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清miR-21水平比較 觀察組與對照組血清miR-21水平分別為50.23±4.78、18.62±5.14，兩組比較，Plt;0.05。預(yù)后良好者與預(yù)后不良者血清miR-21水平分別為22.15±3.78、36.74±4.21，二者比較，P﹤0.05。

2.2 血清miR-21水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系 血清miR-21水平與胃癌患者組織分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)(P均﹤0.05)，與患者的年齡、性別無關(guān)(P均gt;0.05)。見表1。

表1 血清miR-21水平與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

胃癌是世界上第二大常見腫瘤，目前仍缺乏有效診斷的特異性標(biāo)志物。腫瘤的發(fā)生是一個復(fù)雜生物學(xué)過程，涉及到多種細(xì)胞因子、蛋白、生長分化因子的參與。近年來，關(guān)于miRNA與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系逐漸成為研究熱點，研究[7]發(fā)現(xiàn)，miRNA與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

miRNAs參與人類30%～60%基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)。由于一個miRNA可作用于上百個不同的基因，因此miRNA的功能失調(diào)，可導(dǎo)致正常細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化。國外文獻報道，超過一半的miRNAs基因位于腫瘤相關(guān)基因組區(qū)或脆性位點[8]。提示miRNAs在人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。miR-21的成熟形式亦稱作hsa-miR-21或miRNA21，由MIR21基因編碼而來。該基因位于染色體正義鏈17q23.2(55273409～55273480)，與蛋白編碼基因TMEM49重疊[9]。miR-21受到多種細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子或細(xì)胞信號調(diào)節(jié)，其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機制復(fù)雜。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組血清miR-21水平高于對照組，預(yù)后不良者血清miR-21水平高于預(yù)后良好者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義；血清miR-21水平與胃癌患者的組織分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期有關(guān)；組織分化程度越低、腫瘤直徑越大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期越高者血清miR-21水平越高，與國內(nèi)外研究報道一致。Chan等[10]研究認(rèn)為，miR-21在胃癌組織中表達升高，且與胃癌患者的預(yù)后、臨床病理相關(guān)參數(shù)有關(guān)，提示miR-21可作為胃癌診斷和預(yù)后的一項特異性分子標(biāo)志物。miR-21在胃癌中的可能作用機制：PTEN是繼p53之后重要的腫瘤抑制蛋白，而PTEN是miR-21的靶基因，miR-21升高可抑制PTEN表達，從而促進胃癌的發(fā)生[11]；miR-21基因的上游有STAT-3結(jié)合位點，STAT-3可促進miR-21表達，而STAT-3在腫瘤的病理生理過程中發(fā)揮重要作用，STAT-3激活Bcl-2、Bcl-X等抗凋亡基因，延遲細(xì)胞的生存周期[12]；幽門螺桿菌感染是胃癌重要病因之一，Chan等[10]研究發(fā)現(xiàn)，在幽門螺桿菌感染的胃組織中，miR-21表達升高。而Shiotani等[13]發(fā)現(xiàn)，對胃癌患者進行幽門螺桿菌根除治療后，miR-21水平明顯下降。提示miR-21與幽門螺桿菌有一定關(guān)聯(lián)。

綜上所述，胃癌患者血清miR-21水平升高，miR-21可能參與胃癌患者的病情進展。

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