食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達變化及意義

高潔，李日著，朱名毅，蒙山，王居平,3

(1右江民族醫學院，廣西百色533000；2右江民族醫學院附屬醫院；3汕頭大學醫學院)

食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達變化及意義

高潔1，李日著2，朱名毅1，蒙山1，王居平1,3

(1右江民族醫學院，廣西百色533000；2右江民族醫學院附屬醫院；3汕頭大學醫學院)

目的觀察食管鱗癌組織腫瘤轉移相關基因2(MTA2)、突變型p53蛋白表達變化，并探討其臨床意義。方法采用免疫組織化學染色法檢測80例份食管鱗癌組織(觀察組)和30例份正常食管組織(對照組)中MTA2、突變型p53蛋白表達情況，分析食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達與食管鱗癌患者臨床病理參數的關系。結果觀察組MTA2陽性表達率為85.0%(68/80)，突變型p53陽性表達率為61.3%(49/80)，對照組MTA2、突變型p53蛋白均無陽性表達。食管鱗癌組織MTA2蛋白陽性表達與癌組織浸潤深度、遠處轉移、淋巴結轉移、腫瘤組織分化程度、TNM分期有關(P均<0.05)；突變型p53蛋白陽性表達與癌組織浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移有關(P均<0.05)。觀察組食管癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達均為陽性表達的有46例份，食管鱗癌組織中MTA2表達與突變型p53表達呈正相關(r=0.313,P<0.01)。結論食管鱗癌組織中MTA2、突變型p53蛋白陽性表達增多。檢測MTA2、突變型p53表達有助于判斷食管鱗癌浸潤和轉移能力。

食管鱗癌；腫瘤轉移相關基因 2蛋白；突變型p53蛋白；腫瘤浸潤；腫瘤轉移

腫瘤轉移相關基因 2(MTA2)在組織中的過度表達被證實與非小細胞肺癌[1]、胃癌[2]等有著密切聯系，且與腫瘤組織分化程度、TNM分期及淋巴結轉移等明顯相關。MTA2與突變型p53 結合后可以降低突變型p53 的乙酰化水平，與腫瘤的浸潤及轉移密切相關[3]。目前國內外對食管鱗癌中MTA2、突變型p53表達變化的研究報道較少。本研究觀察了食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達變化，分析食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白表達與食管鱗癌患者臨床病理參數的關系。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取右江民族醫學院附屬醫院2013～2016年手術切除的80例桂西地區食管鱗癌患者腫瘤組織存檔蠟塊(觀察組)。所有患者臨床病理資料完整，術前未進行任何針對腫瘤的特殊治療。按照美國癌癥聯合委員會食管癌 TNM 分期標準進行分期[4]：Ⅰ期 12 例，Ⅱ期30例，Ⅲ期26例，Ⅳ期12例；病理類型為潰瘍型15例， 髓質型28例，縮窄型12例，覃傘型25例；腫瘤組織分化程度為高分化20例，中分化32例，低分化28例；浸潤未超過肌層35例，浸潤到肌層或漿膜層45例；有淋巴結轉移者38例，無淋巴結轉移者42例；有遠處轉移者25例，無遠處轉移者55例。另取30例胃鏡檢查活檢標本中的正常食管黏膜組織標本作為對照組。所有標本由兩位有經驗的病理醫師診斷。

1.2 MTA2、突變型p53蛋白表達檢測 采用免疫組化法。將標本置于新鮮的二甲苯中脫蠟，用不同濃度的乙醇水化，放入裝有抗原修復液(pH值6.0的檸檬酸鹽緩沖液)的高壓鍋中進行抗原修復15 min，冷卻至室溫。將抗原修復后的切片用蒸餾水沖洗1 min，用油筆圈定玻片上的待測組織區域，PBS沖洗3 min×2次，除去PBS，在油筆圈定的區域內滴加內源性過氧化物阻斷劑，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3 min×3次，除去PBS溶液，MTA2 抗體(1∶500)/p53抗體覆蓋切片，以PBS代替一抗為陰性對照，放入4 ℃冰箱過夜。第二天用PBS沖洗2 min×3次，滴加相應二抗，室溫下孵育15 min；PBS沖洗2 min×2次，加入新鮮配制的DAB顯色液，室溫下孵育4 min；蘇木素復染細胞核30 s，自來水沖洗，PBS沖洗返藍，快速脫水，二甲苯透明，用中性環保樹膠和蓋玻片封片，晾干后在光學顯微鏡下觀察拍照。

MTA2、突變型p53陽性表達主要位于食管鱗癌細胞核中，以腫瘤細胞的細胞核中出現棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色，突變型p53少量在細胞質中表達。每張切片隨機觀察10個視野(×40)，采用雙評分法進行判定[5]。細胞染色程度評分標準：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞在觀察視野中所占比例評分標準：陽性細胞數小于5%為0分，5%～<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，大于75%為4分；二者乘積≤1為陰性，否則為陽性。

1.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。組間比較采用χ2檢驗。相關性分析采用Spearman等級相關性檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

觀察組MTA2陽性表達率為85.0%(68/80)，突變型p53陽性表達率為61.3%(49/80)，對照組MTA2、突變型p53蛋白均無陽性表達。食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白陽性表達與癌患者臨床病理參數的關系見表1。食管鱗癌組織MTA2陽性表達與癌組織浸潤深度、遠處轉移、淋巴結轉移、腫瘤組織分化程度、TNM分期密切相關(P均<0.05)，與腫瘤病理類型、患者年齡無關(P均>0.05)。食管鱗癌組織突變型p53陽性表達與食管鱗癌組織浸潤深度、遠處轉移、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與患者年齡、腫瘤組織分化程度、病理類型、TNM分期無關(P均>0.05)。觀察組食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白均為陽性表達者46例份，食管鱗癌組織中MTA2表達與突變型p53表達呈正相關(r=0.313,P<0.01)。

表1 食管鱗癌組織MTA2、突變型p53蛋白陽性表達與患者臨床病理參數的關系(例)

3 討論

本研究結果顯示，MTA2蛋白在食管鱗癌組織中的陽性表達率為85%，而在正常食管黏膜組織中陰性表達，且MTA2的陽性表達多集中在血管周圍和腫瘤邊緣，這與MTA2在結直腸癌中的表達類似[6]。Zhang等[7]研究發現，MTA2蛋白參與組成具有核小體重塑活性的組蛋白去乙酰基酶(NuRD)的亞基。人MTA2基因位于染色體11q1213.1，主要在細胞核內表達。相關研究表明，MTA2可以通過影響核染色質的重塑來調控基因轉錄過程，并通過調節細胞凋亡、細胞骨架和雌激素通路等途徑促進腫瘤的浸潤和轉移[8]。有研究發現，在卵巢癌和非小細胞肺癌中，低分化組MTA2蛋白陽性表達率高于中高分化組，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，臨床分期Ⅲ/Ⅳ期組高于Ⅰ/Ⅱ期組[9]。Peneil等[9]通過檢測卵巢癌細胞株中MTA2的表達結果驗證了上述結論。由此證明MTA2蛋白表達與淋巴結轉移、組織分化程度及腫瘤的臨床分期密切相關。國外研究發現，MTA2表達與食管癌淋巴結轉移數目及淋巴結轉移率均呈正相關[10]。本研究結果也證明了MTA2陽性表達在低分化腫瘤、浸潤到達肌層/漿膜層、有遠處轉移及淋巴結轉移、Ⅳ期食管鱗癌組織中明顯增高，提示MTA2蛋白在食管鱗癌的浸潤、轉移中發揮著重要作用。

p53是與人類惡性腫瘤相關性最高的基因，約有一半以上的腫瘤帶有p53突變，其可分為野生型和突變型。突變型p53破壞正常細胞的代謝平衡，誘發正常細胞轉化為癌細胞，癌細胞持續的失衡增殖，加速組織癌變，喪失了野生型p53原有的抑癌功能[11]。本研究結果顯示突變型p53在食管鱗癌組織中陽性表達率為61.3%，在正常食管黏膜組織中為陽性表達，且食管鱗癌組織突變型p53陽性表達水平與食管鱗癌浸潤深度、遠處轉移、淋巴結轉移相關，與文獻[12]報道相類似。Luo等[13]研究發現，有MTA2成分的組蛋白去乙酰化酶1復合體(HDAC1)能夠抑制p53蛋白，通過使p53蛋白脫去乙酰基，從而抑制依賴突變型p53蛋白的基因轉錄激活，最終使細胞增長受抑制、誘導細胞凋亡。

本研究結果顯示，食管鱗癌組織MTA2表達與突變型p53表達呈正相關，說明二者在食管鱗癌發生、發展、轉移中存在一定的聯系。考慮到食管鱗癌組織MTA2蛋白陽性表達與癌組織浸潤深度、遠處轉移、淋巴結轉移、腫瘤組織分化程度、TNM分期有關，突變型p53蛋白陽性表達與癌組織浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移有關，我們認為檢測MTA2、突變型p53表達有助于判斷食管鱗癌浸潤和轉移能力。

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國際自然科學基金資助項目(81760513)；廣西高校中青年教師基礎能力提升項目(KY2016YB339，2017KY0520)；廣東省科技計劃項目(2014A020212288)；廣西高等學校重點實驗室科學研究開放課題(gxzdsysyy2015208)；右江民族醫學院2014年度校級科研項目[右醫科字(2014)2號]；百色市科學研究與技術開發計劃項目(百科計20141106)；右江民族醫學院校級科研項目(yy2016bsky02)。

王居平(E-mail: juping0128@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.40.016

R735.1

B

1002-266X(2017)40-0055-03

2017-07-04)