養陰行血方對視網膜光損傷保護作用的動物實驗研究

鄭 麗

（貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴州 貴陽 550001）

?基礎研究?

養陰行血方對視網膜光損傷保護作用的動物實驗研究

鄭 麗

（貴陽中醫學院第一附屬醫院，貴州 貴陽 550001）

目的觀察養陰行血方對大鼠視網膜光損傷的保護作用。方法 60只大鼠隨機分成三組，實驗周期均為1個月。結果 分別測試視網膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的含量，養陰行血方組的含量低于其他兩組。結論 養陰行血方對視網膜光損傷具有保護作用。

視網膜光損傷；養陰行血方；大鼠

研究認為只要光照時間足夠長，視網膜能被周圍的自然光及所有的光損傷。視網膜作為形成視覺、接受光能的關鍵部分，一旦光照強度及時間超過了它的承受范圍，就會對它造成光損傷。筆者通過動物實驗探索養陰行血方對視網膜光損傷的保護作用，現具體報到如下。

1 對象與方法

1.1 實驗動物

選取健康3月齡SD大鼠60只作為研究對象，將其根據隨機分組法分為A組為空白對照組、B組為模型對照組、C組為養陰行血方組，各20只。A組正常喂養，B、C組施行光照造模。

1.2 造模

參照Xie Z，Wu X，Gong Y[1]的方法進行造模，將B、C組放入光照箱，光照12 h，再進行暗適應12 h，循環光照2周后開始藥物喂養并繼續光照。大鼠可在光照箱內自由活動、飲水攝食。

1.3 實驗用藥與給藥途徑

實驗用藥：養陰行血方顆粒（白芍6 g、石斛10 g、茺蔚子6 g、決明子10 g、赤芍6 g、女貞子6 g）；給藥途徑：按成人與大鼠日劑量比例配成為2 mL的混懸液，一次性灌胃。A組：生理鹽水2 ml/d；B組：生理鹽水2 ml/d；C組：養陰行血方混濁液2 ml/d。

1.4 觀察指標與測試方法

連續循環光照2周造模后給藥，給藥并繼續循環光照2周后，取其視網膜進行免疫組化檢查。按照試劑盒的說明嚴格檢測視網膜標本中NF-kB、NOS、Caspase-3的表達。測試方法：各組取視網膜數量應相等。取出視網膜并在其中加入冰細胞裂解液，研磨約3 min至不見組織碎塊，冰浴10 min，4℃，15000 r/min，離心10 min，收集上清液-70℃凍存待用。各組取等量上清液根據各試劑盒對應的說明書進行仔細觀察并記錄。

2 結 果

各組通過多個獨立樣本非參數檢驗得知，三組中NF-kB、NOS、Caspase-3各不相同，且含量由少到多依次為A組、C組、B組。見表1。

表1 各組NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比較（±s）

表1 各組NF-kB、NOS、Caspase-3（RQ值）比較（±s）

組別 NF-KB NOS Capase-3空白對照組（A） 0.263±0.04 0.298±0.03 0.423±0.04模型組（B） 0.631±0.11 0.724±0.09 0.936±0.13養陰行血方組（C） 0.386±0.06 0.459±0.05 0.575±0.06

3 討 論

NF-kB：是一個多功能核轉錄因子，直接參與機體對炎癥和免疫反應的調控，并參與新生血管的形成，因此說明它具有廣泛的生物學活性。NF-kB在某些病理過程中起關鍵作用如炎癥性視網膜疾病、視網膜光損傷、視網膜新生血管形成等。NOS：L-精氨酸被NOS催化發生氧化反應生成L-胍氨酸和一氧化氮（NO）。其中NO可通過多種途徑（如依賴與非依賴 cGMP途徑）發揮其復雜的生理學功能。視網膜氧化損傷的重要原因之一是視網膜內一氧化氮合成酶（NOS）被過度光照后其活性持續異常升高；同時它的升高與感光細胞退行性變性的發生關系密切。Caspase-3：Caspase又叫同源半胱氨酸蛋白酶，它是哺乳動物細胞凋亡程序中一類關鍵的酶。它能在天冬氨酸殘基后特異性地裂解靶蛋白。其底物在它們瀑布式活化后被降解，同時一系列細胞骨架蛋白及細胞修復酶等也被裂解，最終導致細胞凋亡；然而Caspase級聯反應中最關鍵的、被稱為凋亡步兵的效應蛋白酶就是Caspase-3。RPE細胞光損傷后Caspase-3的表達能在使用重組人促紅細胞生成素后明顯減少；因此認為Caspase-3的表達被抑制可能是rhEPO抗光損傷誘導的RPE細胞凋亡作用機制之一。結果表明：視網膜光損傷后視網膜中NF-kB、NOS、Caspase-3表達增強，養陰行血方對視網膜的保護機制可能與抑制了視網膜中NF-kB、NOS、Caspase-3的表達密切相關。

[1]Xie Z,Wu X,Gong Y,et al.Intraperitoneal injection of Ginkgo biloba extract enhances antioxidation ability of retina and protects photoreceptors after light induced retinal damage in rats.Curr Eye Res.2007,32(5):471-479

[2]王以饒,等.強光對鯔魚視網膜的光化學損傷的初步研究[J].安徽農業科學,Journal ofAnhui Agri.Sci.2008,36(9):3682-3684,3693

[3]金 晶.NF-kb的研究進展[J].國際醫藥衛生導報,2000,10(12):64-65.

R285.5

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ISSN.2095-8242.2017.063.12294.01

劉欣悅