中速、變速和高速離心方法對制備洗滌紅細胞質量的效果對比

黃艷華

(韶關市中心血站成分科，廣東 韶關 512026)

中速、變速和高速離心方法對制備洗滌紅細胞質量的效果對比

黃艷華

(韶關市中心血站成分科，廣東 韶關 512026)

目的觀察不同離心方法對制備洗滌紅細胞質量的影響。方法選取經無償獻血收集的懸浮紅細胞36袋(ALT>40 U·L-1)，隨機分為中速、變速、高速3組，每組12袋。采用人工三聯袋生理鹽水洗滌法，分別以不同離心速度制備洗滌紅細胞，制備完畢后檢測其紅細胞回收率、白細胞清除率、血漿蛋白清除率及血紅蛋白含量、上清蛋白質含量和溶血率。結果3組洗滌紅細胞的紅細胞回收率、血漿蛋白清除率、上清蛋白質含量比較差異無統計學意義(均P>0.05)；中速組洗滌紅細胞的白細胞清除率、血紅蛋白含量及溶血率指標明顯優于變速組與高速組(P<0.05)。結論在滿足洗滌紅細胞制備標準的情況下，采用中速離心方法制備的洗滌紅細胞質量較高。

離心方法； 洗滌紅細胞； 白細胞清除率； 效果對比

洗滌紅細胞是指健康全血去除全部血漿與90%白細胞及血小板，是外科常用的成分輸血制品，臨床常用于自身免疫性疾病、高鉀血癥及對血漿蛋白過敏的患者[1]。近年來隨著血液制備技術的不斷提高，洗滌紅細胞在臨床上應用越來越廣泛，受到了臨床醫生的高度認可。2001年版的洗滌紅細胞制備國標[2]為紅細胞回收率≥70%，白細胞清除率≥80%，血漿蛋白清除率≥98%；隨著臨床上對洗滌紅細胞的要求越來越高，舊版的3種要求已不合時宜，2012年7月1日開始實施的新版《全血及成分血質量要求》[3]中對于洗滌紅細胞制備的要求為血紅蛋白含量≥36 g、上清蛋白質含量<1.0 g、溶血率<紅細胞總量的0.8%和無菌生長。在制備過程中，離心速度為影響洗滌紅細胞質量的關鍵因素，本研究對采用3種不同離心速度制備的洗滌紅細胞進行檢測分析，旨在為制定科學、有效的制備方法提供客觀依據。

1 材料與方法

1.1 制備材料

韶關市中心血站2016年11月至2017年3月經無償獻血收集的外觀正常、血袋無破損，2～6 ℃保存期在3～4 d 的懸浮紅細胞36袋，均為2 U·袋-1，ALT>40 U·L-1；500 mL生理鹽水和500 mL 生理鹽水洗滌聯袋(上海輸血技術有限公司)。

1.2 制備設備

無菌接合機(型號：902880/compodak，廠家：德國費森尤斯公司)，SIGMA8K大容量低溫機(河南兄弟儀器設備有限公司)，高效熱合機(型號：SE330，廠家：Centron Technologies公司)，血細胞計數儀(日本Sysmex Kx-21)，邁瑞BS-420全自動生化分析儀(測定氰化高鐵血紅蛋白吸光度值)，752型可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)，血漿游離血紅蛋白試劑盒(瑞爾達生物科技有限公司)，培養基(南京便診生物科技有限公司)。

1.3 制備方法

將懸浮紅細胞隨機分為中速、變速和高速3組，每組12袋。將1袋500 mL生理鹽水與懸浮紅細胞使用無菌接管機分別與洗滌聯袋接合，灌入150 mL生理鹽水后混勻離心一次，分出上清液和白膜，擠出上層清液和白膜，重復上述操作進行第2、3次離心，最后加入生理鹽水配成70%體積比的紅細胞懸液，即為洗滌紅細胞懸液。中速組第一次離心速度為3500 r·min-1，溫度4 ℃，持續12 min；第2、3次離心時間為10 min。變速組第一次離心速度為3000 r·min-1，溫度4 ℃，時間12 min；第2、3次離心速度為3800 r·min-1，溫度4 ℃，時間10 min。高速組第一次離心速度為4000 r·min-1，溫度4 ℃，持續10 min；第2、3次離心時間6 min。

1.4 檢測指標

制備完畢后嚴格按照《血站技術操作規程(2015版)》(國家衛生計生委.國衛醫發〔2015〕95號)采樣并檢測每袋懸混液白細胞總數、紅細胞總數及血漿白蛋白含量，計算紅細胞回收率、白細胞清除率、血漿蛋白清除率；采用血細胞計數儀檢測血紅蛋白含量、生化分析儀檢測上層清蛋白質含量及溶血率。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 3組洗滌紅細胞紅細胞回收率、白細胞清除率及血漿蛋白清除率比較

3組洗滌紅細胞的紅細胞回收率、血漿蛋白清除率比較差異無統計學意義(均P>0.05)，中速組洗滌紅細胞的白細胞清除率明顯高于變速組和高速組(P<0.05)，見表1。

組別n紅細胞回收率白細胞清除率血漿蛋白清除率中速組1282．43±2．6692．46±1．6899．23±0．46變速組1281．79±2．5887．52±1．44?98．75±0．39高速組1282．56±2．7987．39±1．57?98．94±0．51

*P<0.05與中速組比較。

2.2 3組洗滌紅細胞血紅蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率比較

3組洗滌紅細胞的上清蛋白含量比較差異無統計學意義(P>0.05)，中速組血紅蛋白含量及溶血率指標明顯優于其他2組(P<0.05)，見表2。

組別n血紅蛋白含量m/g上清蛋白含量m/g溶血率/%中速組1271．63±6．380．72±0．260．43±0．11變速組1261．51±3．94?0．68±0．330．64±0．17?高速組1262．49±4．35?0．71±0．290．62±0．09?

*P<0.05與中速組比較。

3 討論

洗滌紅細胞的質量要求從原來的針對紅細胞回收率、白細胞及血漿蛋白清除率的要求轉變為針對血液制品本身上來，2012版《全血及成分血質量要求》[3]的標準實用性更強，但同時也對制備過程提出了更加嚴格的要求。血站常用的洗滌紅細胞方法為全自動機洗和手工洗，由于全自動機洗成本較高，目前尚未廣泛應用[4]，本血站多采用手工洗的方式，離心速度在制備過程中對洗滌紅細胞質量起著重要影響。本研究結果顯示，中速組在白細胞清除率、血紅蛋白含量及溶血率指標明顯優于其他2組，證實了白細胞的清除效果與離心條件有關[5]。由于粒細胞與成熟度低的紅細胞比重較為接近，中速離心條件下，粒細胞可以懸浮在白膜下易于分離。變速條件下，雖然第一次離心可以達到清除白細胞的效果，但由于第2、3次采用的是低速離心，以致白細胞不能夠很好地懸浮在白膜下，而是置于紅細胞上層液中，影響清除與紅細胞的回收。高速離心方式雖然可以達到白細胞懸浮在白膜下，但由于離心速度過快，易導致白細胞呈片狀黏附在血袋壁上，影響去除效果。也有報道[6]指出，離心2次紅細胞回收率高于離心3次，但其白細胞清除率存在達標率低的缺點，所以，國內主流報道仍傾向于離心3次[7]。

綜上所述，在滿足洗滌紅細胞質量標準的情況下，采用中速離心3次的制備方法獲得的洗滌紅細胞質量較優。

[1] 劉妹，鄧小軍，王丹.不同離心方法對制備洗滌紅細胞質量的影響[J].臨床輸血與檢驗，2016，18(1)：56-58.

[2] 中華人民共和國衛生部.GB18469-2001全血及成分血質量要求[S].北京：中國標準出版社，2001.

[3] 中華人民共和國衛生部、中國國家標準化管理委員會.GB18469-2012全血及成分血質量要求[S].北京：中國標準出版社，2012.

[4] 徐亮.不同方法制備洗滌紅細胞檢測指標比較思路構建[J].中國民康醫學，2016，28(12)：30-31,32.

[5] 紀云鵬，朱紅芹，蔡莉.對洗滌紅細胞質量控制項目刪除白細胞清除率的探討[J].中國輸血雜志，2014，27(10)：1044-1045.

[6] 周俊，吳濤，姜瑞民，等.懸浮紅細胞制備洗滌紅細胞不同方式的比較分析[J].中國輸血雜志，2013，26(9)：887-888.

[7] 莊運芳.紅細胞保存液混懸洗滌紅細胞的制備及質量控制[J].現代醫院，2016，16(8)：1183-1185.

2017-05-09

R457

A

1009-8194(2017)09-0017-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.09.008

(責任編輯：鐘榮梅)