內(nèi)部沸騰法提取猴頭菇多糖工藝初探

何靜

【摘要】為提高猴菇多糖得率，增加提取率，采用內(nèi)部沸騰法提取猴菇多糖。先用乙醇潤(rùn)濕物料，再加入熱水讓內(nèi)部乙醇沸騰，快速提取多糖。結(jié)果顯示：乙醇體積分?jǐn)?shù)為15%、提取溫度90℃時(shí)，提取過程在20min內(nèi)完成，猴菇多糖得率為9.24%，較傳統(tǒng)方法有所提高。

【關(guān)鍵詞】?jī)?nèi)部沸騰法；猴菇多糖；提取

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】2095-3089（2017）19-0283-02

猴頭菇（學(xué)名：Hericiumerinaceus），外形似猴子的頭，因而得名。孢子透明無色，表面光滑，呈球形或近似球形。猴頭菇是著名的藥食兩用菌種，其多糖是猴頭菇中重要的活性物質(zhì)，研究證明，猴頭菇多糖對(duì)小鼠血清有抗氧化能力[1]，能延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，緩解疲勞[2]，還具有抗衰老，護(hù)肝的作用，且毒副作用相對(duì)較小[3]。目前，猴頭菇多糖的提取方法有熱水浸提法[2-4]，超聲提取[5-6]，酶法提取[7-8]，但少見有內(nèi)部沸騰法提取，且對(duì)于內(nèi)部沸騰法提取的影響因素報(bào)道甚少。

內(nèi)部沸騰法在其它食用菌多糖的提取中使用較多，如陳曉光早在2011年就使用此法提取香菇多糖。此法是先用少量乙醇試液潤(rùn)濕香菇，再快速加入高溫的提取液，使內(nèi)部乙醇汽化，提高多糖提取率。本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)部沸騰法提取猴菇多糖，探討了不同外界條件對(duì)提取率的影響，為猴菇多糖的提取提供一定的技術(shù)依據(jù)。

一、材料與方法

（一）材料與試劑

猴頭菇于超市購(gòu)買，產(chǎn)地黑龍江；40℃烘干后粉碎至粉末狀。95%乙醇（AR）：無錫市亞太聯(lián)合化工有限公司；苯酚（AR）：無錫市亞太聯(lián)合化工有限公司，濃硫酸（AR）：永茂化工有限公司；葡萄糖（AR）：濟(jì)南鑫旺化工有限公司；TCA（AR）：永茂化工有限公司。

（二）儀器與設(shè)備

真空干燥箱，真空抽濾機(jī)；電熱恒溫水浴鍋；電爐；粉碎機(jī)；攪拌器。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1.猴頭菇總糖提取工藝

（1）內(nèi)部沸騰法：猴頭菇粉末→內(nèi)部沸騰法提取→抽濾→濃縮→脫色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→離心→干燥→粗浸膏。

（2）傳統(tǒng)法：猴頭菇粉末→熱水提取→抽濾→濃縮→脫色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→離心→干燥→粗浸膏。

2.內(nèi)部沸騰法提取猴頭菇多糖

選用提取溫度，乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取時(shí)間三個(gè)因素來探測(cè)外部條件對(duì)猴頭菇多糖得率的影響，其條件分別如下：

①猴頭菇10g，提取溫度90℃，提取時(shí)間20min，乙醇體積分?jǐn)?shù)為5%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)10%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)25%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)30%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)40%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇溶液20ml。

②猴頭菇10g，體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇溶液20ml，提取時(shí)間20min，提取溫度分別為70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、110℃。

③猴頭菇10g，乙醇體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇溶液20ml，提取溫度控制在90℃，提取時(shí)間控制在5min到40min之間，以每5min的速度遞增。

提取后的猴菇多糖再進(jìn)行抽濾，收集濾液備用。

3.傳統(tǒng)方法提取猴頭菇多糖

10g猴頭菇粉末，加入200ml水，80℃加熱回流3h，抽濾，收集濾液備用。

4.提取液脫色

抽濾后的猴頭菇多糖提取液中加入2%的粒狀活性炭，60℃，水浴60min。

5.TCA法去蛋白

脫色后的粗多糖溶液中，加入0.15%的TCA溶液，振搖20min后，靜止30min。

6.醇沉

將去除蛋白后的提取液濃縮至猴頭菇多糖的1.3倍，加入95%乙醇使醇含量控制在75%，靜止、過夜、過濾、50℃真空干燥。取部分浸膏測(cè)定多糖含量。

（四）分析方法

1.猴頭菇總糖測(cè)定

總糖測(cè)定采用苯酚-硫酸法，精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖15.0mg于100ml容量瓶中，加水至刻度定容，溶解搖勻。分別取0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml，加水補(bǔ)至2.00ml，再加入1ml5%的苯酚溶液，濃硫酸5ml，搖勻、靜止、冷卻。30min后以蒸餾水為空白，490nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得線性方程A=0.006C+0.035，R2=0.9996。

2.還原糖含量測(cè)定

選用比色法——3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖含量，無水葡萄糖102.00mg置于100ml容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度。分別吸取上述溶液0.00、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml于不同試管中，分別加水至總體積為0.5ml，試管中依次加入0.5mlDNS溶液，搖勻，沸水加熱5min，流動(dòng)水冷卻，每管分別加入4ml蒸餾水，搖勻，以空白管為參比溶液，540nm處測(cè)吸光度，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=0.0028X-0.0165，R2=0.0991。

3.猴菇多糖含量的計(jì)算

Y（%）=（C1-C2）×0.9×100

Y：猴菇多糖含量/%；C1：猴菇總糖含量/%；C2：猴菇中還原糖量/%；0.9：還原糖和多糖間換算系數(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

（一）單因素對(duì)多糖提取率影響情況

1.乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)提取率的影響

隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)增大，猴頭菇多糖提取率出現(xiàn)先增加而后再降低的情況。溫度乙醇體積分?jǐn)?shù)在15%達(dá)到最大值，多糖得率為9.24%。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，多糖的溶解度降低，解析不充分，因此，若乙醇體積分?jǐn)?shù)過高，多糖得率反而降低。而當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)小于15%時(shí)，滲入猴菇內(nèi)部乙醇太少，沸騰不夠，提取效率不也不高。

2.提取溫度對(duì)猴頭菇多糖提取率影響

提取溫度控制在90℃時(shí)，多糖得率較高，為8.98%。按照1.3.2中②的方案，圖2中乙醇體積分?jǐn)?shù)為20%，此時(shí)乙醇溶液的共沸點(diǎn)為87.1℃，只有當(dāng)溫度高于此溫度時(shí)，猴頭菇內(nèi)部乙醇才會(huì)產(chǎn)生沸騰，提取過程為對(duì)流擴(kuò)散。低于此溫度時(shí)，多糖的提取過程則為分子擴(kuò)散，在20min內(nèi)，擴(kuò)散不完全，提取率低。溫度高于90℃后，猴菇內(nèi)部孔徑出現(xiàn)堵塞、坍塌、影響提取速率。

3.提取時(shí)間對(duì)猴菇多糖得率的影響

從圖3可以看出，采用內(nèi)部沸騰法時(shí)，猴菇多糖得率在20min時(shí)達(dá)到最大值，為9.16%，之后基本趨于穩(wěn)定。在20min內(nèi)，猴頭菇多糖幾乎能全部提取出來，延長(zhǎng)時(shí)間，對(duì)多得率沒有促進(jìn)作用。

（二）內(nèi)部沸騰法與傳統(tǒng)方法比較

從表1可以看出，內(nèi)部沸騰法提取效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法，時(shí)間僅為20min，多糖得率高于傳統(tǒng)方法4.37%。

三、結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)中，猴頭菇多糖的最佳提取工藝參數(shù)依次為：乙醇體積分?jǐn)?shù)15%；提取溫度為90℃；提取時(shí)間為20min。在上述條件下，猴頭菇多糖的得率為9.24%，比傳統(tǒng)的煎煮法高。由此可見，內(nèi)部沸騰法適合于猴菇多糖的提取，且高效安全。

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