內部沸騰法提取猴頭菇多糖工藝初探

何靜

【摘要】為提高猴菇多糖得率，增加提取率，采用內部沸騰法提取猴菇多糖。先用乙醇潤濕物料，再加入熱水讓內部乙醇沸騰，快速提取多糖。結果顯示：乙醇體積分數為15%、提取溫度90℃時，提取過程在20min內完成，猴菇多糖得率為9.24%，較傳統方法有所提高。

【關鍵詞】內部沸騰法；猴菇多糖；提取

【中圖分類號】R284.2 【文獻標識碼】B 【文章編號】2095-3089（2017）19-0283-02

猴頭菇（學名：Hericiumerinaceus），外形似猴子的頭，因而得名。孢子透明無色，表面光滑，呈球形或近似球形。猴頭菇是著名的藥食兩用菌種，其多糖是猴頭菇中重要的活性物質，研究證明，猴頭菇多糖對小鼠血清有抗氧化能力[1]，能延長小鼠負重游泳時間，緩解疲勞[2]，還具有抗衰老，護肝的作用，且毒副作用相對較小[3]。目前，猴頭菇多糖的提取方法有熱水浸提法[2-4]，超聲提取[5-6]，酶法提取[7-8]，但少見有內部沸騰法提取，且對于內部沸騰法提取的影響因素報道甚少。

內部沸騰法在其它食用菌多糖的提取中使用較多，如陳曉光早在2011年就使用此法提取香菇多糖。此法是先用少量乙醇試液潤濕香菇，再快速加入高溫的提取液，使內部乙醇汽化，提高多糖提取率。本實驗采用內部沸騰法提取猴菇多糖，探討了不同外界條件對提取率的影響，為猴菇多糖的提取提供一定的技術依據。

一、材料與方法

（一）材料與試劑

猴頭菇于超市購買，產地黑龍江；40℃烘干后粉碎至粉末狀。95%乙醇（AR）：無錫市亞太聯合化工有限公司；苯酚（AR）：無錫市亞太聯合化工有限公司，濃硫酸（AR）：永茂化工有限公司；葡萄糖（AR）：濟南鑫旺化工有限公司；TCA（AR）：永茂化工有限公司。

（二）儀器與設備

真空干燥箱，真空抽濾機；電熱恒溫水浴鍋；電爐；粉碎機；攪拌器。

（三）實驗方法

1.猴頭菇總糖提取工藝

（1）內部沸騰法：猴頭菇粉末→內部沸騰法提取→抽濾→濃縮→脫色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→離心→干燥→粗浸膏。

（2）傳統法：猴頭菇粉末→熱水提取→抽濾→濃縮→脫色→TCA法去蛋白→乙醇醇沉→離心→干燥→粗浸膏。

2.內部沸騰法提取猴頭菇多糖

選用提取溫度，乙醇體積分數和提取時間三個因素來探測外部條件對猴頭菇多糖得率的影響，其條件分別如下：

①猴頭菇10g，提取溫度90℃，提取時間20min，乙醇體積分數為5%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數10%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數20%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數25%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數30%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數40%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數50%的乙醇溶液20ml、乙醇體積分數60%的乙醇溶液20ml。

②猴頭菇10g，體積分數20%的乙醇溶液20ml，提取時間20min，提取溫度分別為70℃、75℃、80℃、85℃、90℃、95℃、100℃、110℃。

③猴頭菇10g，乙醇體積分數20%的乙醇溶液20ml，提取溫度控制在90℃，提取時間控制在5min到40min之間，以每5min的速度遞增。

提取后的猴菇多糖再進行抽濾，收集濾液備用。

3.傳統方法提取猴頭菇多糖

10g猴頭菇粉末，加入200ml水，80℃加熱回流3h，抽濾，收集濾液備用。

4.提取液脫色

抽濾后的猴頭菇多糖提取液中加入2%的粒狀活性炭，60℃，水浴60min。

5.TCA法去蛋白

脫色后的粗多糖溶液中，加入0.15%的TCA溶液，振搖20min后，靜止30min。

6.醇沉

將去除蛋白后的提取液濃縮至猴頭菇多糖的1.3倍，加入95%乙醇使醇含量控制在75%，靜止、過夜、過濾、50℃真空干燥。取部分浸膏測定多糖含量。

（四）分析方法

1.猴頭菇總糖測定

總糖測定采用苯酚-硫酸法，精密稱取干燥至恒重的無水葡萄糖15.0mg于100ml容量瓶中，加水至刻度定容，溶解搖勻。分別取0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00ml，加水補至2.00ml，再加入1ml5%的苯酚溶液，濃硫酸5ml，搖勻、靜止、冷卻。30min后以蒸餾水為空白，490nm處測定吸光度，繪制標準曲線。得線性方程A=0.006C+0.035，R2=0.9996。

2.還原糖含量測定

選用比色法——3，5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量，無水葡萄糖102.00mg置于100ml容量瓶中，加水溶解稀釋至刻度。分別吸取上述溶液0.00、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45ml于不同試管中，分別加水至總體積為0.5ml，試管中依次加入0.5mlDNS溶液，搖勻，沸水加熱5min，流動水冷卻，每管分別加入4ml蒸餾水，搖勻，以空白管為參比溶液，540nm處測吸光度，得標準曲線方程為：A=0.0028X-0.0165，R2=0.0991。

3.猴菇多糖含量的計算

Y（%）=（C1-C2）×0.9×100

Y：猴菇多糖含量/%；C1：猴菇總糖含量/%；C2：猴菇中還原糖量/%；0.9：還原糖和多糖間換算系數。

二、實驗結果分析

（一）單因素對多糖提取率影響情況

1.乙醇體積分數對提取率的影響

隨著乙醇體積分數增大，猴頭菇多糖提取率出現先增加而后再降低的情況。溫度乙醇體積分數在15%達到最大值，多糖得率為9.24%。隨著乙醇體積分數的增加，多糖的溶解度降低，解析不充分，因此，若乙醇體積分數過高，多糖得率反而降低。而當乙醇體積分數小于15%時，滲入猴菇內部乙醇太少，沸騰不夠，提取效率不也不高。

2.提取溫度對猴頭菇多糖提取率影響

提取溫度控制在90℃時，多糖得率較高，為8.98%。按照1.3.2中②的方案，圖2中乙醇體積分數為20%，此時乙醇溶液的共沸點為87.1℃，只有當溫度高于此溫度時，猴頭菇內部乙醇才會產生沸騰，提取過程為對流擴散。低于此溫度時，多糖的提取過程則為分子擴散，在20min內，擴散不完全，提取率低。溫度高于90℃后，猴菇內部孔徑出現堵塞、坍塌、影響提取速率。

3.提取時間對猴菇多糖得率的影響

從圖3可以看出，采用內部沸騰法時，猴菇多糖得率在20min時達到最大值，為9.16%，之后基本趨于穩定。在20min內，猴頭菇多糖幾乎能全部提取出來，延長時間，對多得率沒有促進作用。

（二）內部沸騰法與傳統方法比較

從表1可以看出，內部沸騰法提取效果明顯優于傳統方法，時間僅為20min，多糖得率高于傳統方法4.37%。

三、結論

在本實驗中，猴頭菇多糖的最佳提取工藝參數依次為：乙醇體積分數15%；提取溫度為90℃；提取時間為20min。在上述條件下，猴頭菇多糖的得率為9.24%，比傳統的煎煮法高。由此可見，內部沸騰法適合于猴菇多糖的提取，且高效安全。

參考文獻

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