青海昆侖雪菊對糖尿病大鼠血糖的影響及可能機制

張朝霞 陳湘宏 王 花 張 萍

(青海衛生職業技術學院，青海 西寧 810000)

青海昆侖雪菊對糖尿病大鼠血糖的影響及可能機制

張朝霞 陳湘宏1王 花 張 萍

(青海衛生職業技術學院，青海 西寧 810000)

目的研究青海昆侖雪菊對糖尿病(DM)大鼠血糖的影響，初步探討其降血糖作用機制。方法采用高脂飼料喂養加鏈脲佐菌素(STZ)注射的方法建立2型糖尿病(T2DM)模型大鼠，以血糖≥16.7 mmol/L界定造模是否成功，將造模成功的大鼠隨機分為DM組、二甲雙胍組、雪菊水提組、甲醇組及乙醇組，另設對照組。分別用二甲雙胍片溶液、青海昆侖雪菊水、甲醇、乙醇提取液對大鼠連續灌胃4 w，DM組、對照組用生理鹽水灌胃。每周大鼠尾尖測血糖，4 w后腹主動脈取血檢測血清谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胰島素(INS)及C肽(C-P)水平。結果青海昆侖雪菊能顯著降低T2DM模型大鼠血糖水平(P<0.01)，甲醇、乙醇提取液降糖效應優于水提液(P<0.05)；青海昆侖雪菊能明顯增加血清GSH、SOD、INS、CP水平(P<0.05)，降低MDA水平 (P<0.05)。結論青海昆侖雪菊對T2DM模型大鼠有較好的降血糖作用，其作用可能與雪菊中黃酮類成分改善胰島β細胞氧化應激損傷，增加血清INS水平有關。

青海昆侖雪菊；黃酮類；2型糖尿??；抗氧化

青海昆侖雪菊為青海的特色藥材，成分中含有多種黃酮類物質、氨基酸、芳香族化合物、有機酸、維生素、酶類等，具有超過一般花茶的藥理功效〔1〕?，F代科學研究證實黃酮類化合物在調節糖脂代謝、改善胰島素(INS)抵抗和預防高血糖及并發癥方面有較強的藥理活性〔2，3〕。本研究通過觀察青海昆侖雪菊不同提取物對2型糖尿病(T2DM)實驗大鼠血糖的影響，探討其降糖作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物及飼料 健康清潔級雄性Wistar大鼠90只，體重(180±20)g，由蘭州大學醫學實驗動物中心提供，生產許可證SCXK-(甘)2015-0002。高脂高糖飼料(豬油10%、蔗糖20%、膽固醇2.5%、膽酸鹽1%、普通飼料66.5%)。

1.2藥物與試劑 青海昆侖雪菊購自青海九康中藥飲片有限公司，經青海大學醫學院中藥教研室鑒定。將昆侖雪菊干燥花序粉碎，分別用水、甲醇、70%乙醇提取，重復回流提取2次，殘渣用水煮45 min，濾取水提取液與前2次提取液合并，減壓濃縮后分別將上述提取物配制成濃度為1 g/ml的溶液，避光低溫保存備用。鹽酸二甲雙胍片(北京中惠藥業有限公司，批號：20150910，國藥準字H19983069)，谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、INS、C肽(C-P)試劑盒均由上海卒瑞生物科技有限公司提供；鏈脲佐菌素(STZ)為Sigma公司產品(貨號S0130)。

1.3儀器設備 美國羅氏公司(Roche)血糖儀及血糖試紙，日本島津公司UV-1601紫外分光光度計；ST-360酶標儀；電子分析天平(上海精密科學儀器廠)；電動玻璃勻漿機(寧波新芝生物科技股份有限公司)；HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇市醫療儀器廠)；TDZ4-WS低速臺式離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)；自動雙重純水蒸餾器(上海徐行生化儀器廠)。

1.4動物分組與造模 模型組Wistar雄性大鼠75只，采用高脂飼料喂養聯合STZ腹腔注射方法建?！?，5〕。適應性喂養1 w后，給予高脂高糖飼料喂養4 w，禁食12 h，腹腔注射STZ 35 mg/kg(在4℃冰浴中用0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液按pH 4.4配制后立即注射)。1 w后大鼠尾尖取血測血糖，以隨機血糖連續兩次≥16.7 mmol/L作為T2DM模型大鼠。將造模成功的大鼠隨機分為糖尿病(DM)組，二甲雙胍組，雪菊水提組、甲醇組和乙醇組。另取同批次大鼠15只作為對照組，全程普通飼料喂養，腹腔注射同體積檸檬酸鈉緩沖液。給藥：二甲雙胍組用鹽酸二甲雙胍片配制成相應的溶液(0.2 g·kg-1·d-1) 灌胃；雪菊組分別用水、甲醇及乙醇提取液 (2 g·kg-1·d-1) 灌胃，正常對照組、DM組以同等容量生理鹽水灌胃，1次/ d，連續4 w。大鼠每周稱重，根據體重變化調整藥量。

1.5標本采集 大鼠每周尾尖采血測血糖，4 w后禁食不禁水，以0.3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，經腹主動脈采血，分離血清，嚴格按照試劑盒操作方法測定各組大鼠血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、INS和C肽(C-P)水平。

1.6統計學方法 數據采用SPSS18.0統計軟件進行單因素方差分析、t檢驗。

2 結 果

2.1兩組造模前后血糖水平 兩組造模前血糖水平無顯著差異(P>0.05)，造模后模型組血糖明顯高于對照組(P<0.01)。見表1。

2.2各組血糖水平比較 與對照組比較，DM組、二甲雙胍組、雪菊水提組、甲醇組、乙醇組血糖水平在第1～4周均顯著升高(P<0.01)；與DM組比，二甲雙胍組第1～4周、雪菊水提組、甲醇組、乙醇組第2～4周血糖水平均顯著降低(均P<0.01)；與二甲雙胍組比，雪菊水提組第1～4周、雪菊甲醇組、乙醇第1、2周血糖水平顯著升高(均P<0.05)；與雪菊水提組比，雪菊甲醇組，乙醇組第2～4周血糖水平顯著降低(P<0.01)。見表2。

2.3各組血清GSH、SOD及MDA水平比較 與對照組比較，DM組GSH水平、DM組、二甲雙胍組、雪菊水提組SOD水平均顯著降低，DM組、二甲雙胍組、雪菊水提組、甲醇組、乙醇組MDA水平均顯著升高(均P<0.01)；與DM組比較，雪菊甲醇組、乙醇組GSH水平、SOD水平，雪菊水提組SOD水平均顯著提高，雪菊水提組、甲醇組、乙醇組MDA水平均顯著降低(均P<0.05)；與二甲雙胍組比較，雪菊甲醇組、乙醇組GSH、SOD水平顯著升高，雪菊水提組、甲醇組、乙醇組MDA水平均顯著降低(均P<0.01)；雪菊甲醇、乙醇組血清GSH、SOD明顯高于水提組，而MDA明顯低于水提組(P<0.05)。見表2。

表1 兩組造模前后血糖水平

與對照組比較：1)P<0.01

表2 各組血糖、GSH、SOD及MDA水平比較

與對照組比較：1)P<0.01；與DM組比較：2)P<0.01，3)P<0.05；與二甲雙胍組比較：4)P<0.05,5)P<0.01；與雪菊水提組比較：6)P<0.01,7)P<0.05

2.4各組血清INS及C-P水平比較 見表3。與對照組比較，DM組、二甲雙胍組血清INS及C-P明顯降低(P<0.01)；與DM組及二甲雙胍組比雪菊各組血清INS及C-P顯著升高(P<0.05)；雪菊甲醇、乙醇組血清C-P水平顯著高于水提組(P<0.05)。

表3 各組血清INS及C-P水平比較

與對照組比較：1)P<0.01；與DM組比較：2)P<0.05；與二甲雙胍組比較：3)P<0.05；與雪菊水提組比較：4)P<0.05

3 討 論

造模大鼠血糖水平持續升高且血清INS及C-P水平低于正常，說明高脂高糖飲食聯合STZ誘導的伴有INS抵抗的大鼠T2DM模型是成功的，這種聯合造模方式與人類T2DM的發病機制相似〔6〕。雪菊性涼，有疏風清熱、解毒消腫等功效，能有效降血脂、軟化血管、去除體內垃圾。本研究發現，青海昆侖雪菊能降低T2DM大鼠血糖水平，降糖效果與二甲雙胍相當，其降血糖效應緩慢、溫和而持久，雪菊醇提液降糖效應優于水提液。有報道雪菊可分離純化得到12種黃酮類化合物，而黃酮類化合物在細胞抗氧化方面有較強活性〔7〕。STZ誘導的DM模型具有氧化應激的特點〔8〕，研究表明，INS抵抗、T2DM和氧化應激之間有著緊密的聯系〔9〕。GSH及SOD含量能間接地反映機體抗氧化損傷和清除氧自由基的能力〔10〕。MDA是脂質過氧化的產物之一，過度累積會引起細胞代謝障礙產生細胞毒作用。本實驗提示青海昆侖雪菊具有增強機體清除自由基的能力，具有保護細胞的結構和功能的作用，從而達到改善機體物質代謝紊亂的功效。雪菊降血糖機制可能與其保護胰島β細胞，修復受損功能β細胞，增加INS的合成分泌有關。這與文獻報道的T2DM血清INS水平與血糖控制狀況有很大的相關性一致〔11～13〕。

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R285.5

A

1005-9202(2017)23-5782-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.014

青海省衛計委計劃指導性課題(2014年)

1 青海大學醫學院

張朝霞(1973-)，女，副教授，碩士，主要從事糖尿病研究。

〔2017-07-26修回〕

(編輯 郭 菁/王一涵)