肝細胞癌中富半胱氨酸蛋白61和細胞增殖的關系

黃榮師 蔡 潔 范 蓉 岑妍慧 趙飛蘭 何國珍

(廣西中醫(yī)藥大學組織胚胎教研室，廣西 南寧 530200)

肝細胞癌中富半胱氨酸蛋白61和細胞增殖的關系

黃榮師 蔡 潔1范 蓉 岑妍慧 趙飛蘭 何國珍

(廣西中醫(yī)藥大學組織胚胎教研室，廣西 南寧 530200)

目的檢測肝細胞癌中富半胱氨酸蛋白(Cyr)61的表達，分析其與腫瘤細胞增殖的關系。方法61例經(jīng)病理醫(yī)師確診為肝細胞癌并進行手術治療的患者為觀察組，15例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性肝組織為對照組，均留取術后蠟塊組織，采用免疫組化SP法檢測兩組中Cyr61、增殖細胞核抗原(PCNA)和Ki67的表達。結果兩組中Cyr61的陽性率、PCNA和Ki67增殖指數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。觀察組中Cyr61的陽性率、PCNA和Ki67增殖指數(shù)均與腫瘤最大徑密切相關，觀察組中Cyr61陽性率與腫瘤轉移和血管侵犯密切相關。線性相關分析顯示觀察組中Cyr61和PCNA、Cyr61和Ki67的表達呈正相關。結論肝細胞癌中Cyr61高表達是促進腫瘤形成和進展的重要因素。

肝細胞癌；富半胱氨酸蛋白61；增殖細胞核抗原(PCNA)；Ki67

肝細胞癌是一種起源于肝細胞的惡性腫瘤，常見原因有病毒性感染及飲食因素〔1〕，是長期病變的結果。研究顯示肝細胞癌是高增殖性腫瘤，腫瘤細胞生長活躍，侵襲能力強〔2〕。富半胱氨酸蛋白(Cyr)61是由生長因子誘導產生的富半胱氨酸的即刻早期基因產物，具有促有絲分裂活性和趨化性，參與調節(jié)細胞的增殖、轉移和黏附作用〔3，4〕。本研究關注肝細胞癌術后組織中Cyr61、增殖細胞核抗原(PCNA)和Ki67的表達，分析其相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2012年1月至2015年12月廣西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院診斷為肝細胞癌，并行手術治療的住院患者61例作為觀察組，納入均符合世界衛(wèi)生組織的診斷標準，并經(jīng)病理醫(yī)師確診。排除術前化療或放療的患者，排除合并其他惡性腫瘤的患者。男36例，女25例，年齡42～81歲，平均56.5歲。15例距腫物邊緣>5 cm的非腫瘤性肝組織為對照組，其中男8例，女7例，年齡45～78歲，平均54.3歲。患者或家屬簽署知情同意書。兩組臨床資料無明顯差異，具有可比性。

1.2Cyr61、PCNA和Ki67表達的檢測 患者術后留取的組織均常規(guī)應用中性甲醛溶液固定12 h以上，由病理科醫(yī)生取材、固定、脫水、石蠟包埋后切片。Cyr61、PCNA和Ki67表達的檢測均應用免疫組化SP法，行二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。操作均由主管技師進行，設陽性對照，減少人為誤差。

1.3Cyr61、PCNA和Ki67結果的判斷 實驗結果均應用OlympusBX40光學顯微鏡進行觀察判斷，均由病理醫(yī)師完成判讀。以染成棕黃色或棕褐色為陽性反應細胞，Cyr61的陽性部位是細胞質，PCNA和Ki67的陽性部位是細胞核。選擇腫瘤細胞分布集中的區(qū)域(排除壞死區(qū)及間質較多的區(qū)域)進行觀察，共選擇3個400倍視野進行計數(shù)，取平均值作為最終判定結果，Cyr61的陽性率<5%為陰性，≥5%為陽性。PCNA和Ki67以<25%為陰性，≥25%為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、線性相關分析。

2 結 果

2.1兩組中Cyr61陽性率、PCNA和Ki67標記的增殖指數(shù)的比較 兩組Cyr61陽性率、PCNA和Ki67標記的增殖指數(shù)差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組中Cyr61陽性率、PCNA和Ki67標記的增殖指數(shù)陽性表達的比較〔n(%)〕

2.2觀察組中Cyr61陽性率、 PCNA和Ki67增殖指數(shù)在不同臨床特征中的比較 觀察組中Cyr61陽性率、 PCNA和Ki67增殖指數(shù)均與腫瘤的最大徑密切相關(P<0.01),Cyr61的陽性率與腫瘤的轉移和血管侵犯密切相關(P<0.05)。見表2。

表2 觀察組中Cyr61陽性率、 PCNA和Ki67增殖指數(shù)陽性在不同臨床特征中的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中Cyr61陽性率、PCNA和Ki67增殖指數(shù)的相關性 Cyr61陽性率和PCNA增殖指數(shù)(r=0.42，P=0.043)、Ki67增殖指數(shù)呈正相關(r=0.45，P=0.040)。

3 討 論

肝細胞癌的主要臨床風險因素是乙型肝炎和肝硬化等，長期慢性肝病使腫瘤相關的蛋白出現(xiàn)改變，促進正常細胞的腫瘤化〔5，6〕。Cyr61是富含半胱氨酸的分泌性肝素連接蛋白，廣泛存在于人類的胎盤、心、腦、胰腺等組織中，在胚胎發(fā)育性組織中Cyr61的含量較高，而在正常成人的肝組織中含量極低〔7，8〕。Cyr61分泌后與細胞基質和細胞膜相連接，能介導細胞間、細胞與細胞外基質之間的相互作用〔9〕。研究顯示Cyr61可以介導細胞黏附作用，同時促進成纖維細胞的趨化作用〔10，11〕。也有觀點認為Cyr61可以通過整合素家族與成纖維細胞作用后誘導基質金屬蛋白酶(MMP)-1、MMP-3和纖溶酶原激活物抑制物(PAI)-1的表達，引起細胞外基質的重構〔12〕。PCNA是一種具有調節(jié)DNA合成和引起細胞增殖的周期蛋白，其表達可有效地評價細胞的增殖狀態(tài)〔13〕。Ki67為臨床常用的標記增殖指數(shù)的蛋白，在細胞周期的G1、S、G2和M期中表達明顯〔14〕。PCNA和Ki67的表達部位均為細胞核，二者的功能與細胞的有絲分裂密切相關。由于腫瘤細胞的重要特征是細胞增殖周期的調控失常引起的細胞失控性增生，因此二者可以作為細胞增殖活性的特異性標志物〔15〕。

本實驗結果提示Cyr61、PCNA和Ki67高表達可以促進腫瘤細胞的增生，使腫瘤細胞增殖活躍，細胞數(shù)量明顯增加，腫瘤的體積增大，腫瘤生長快，體積增大明顯，侵襲能力明顯增強。本文結果提示Cyr61高表達時可以促進腫瘤的遷移，也能促進腫瘤細胞對脈管的破壞，并繼發(fā)腫瘤轉移灶的形成。作為高增殖狀態(tài)的肝細胞癌，Cyr61的表達有明顯促進腫瘤細胞增殖的作用。Cyr61在促進腫瘤進程中可能作用途徑較多，本研究中只是關注Cyr61對增殖的調控作用〔16〕。也有研究顯示Cyr61可以調節(jié)細胞間黏附作用、血管生成的作用等，因此Cyr61的作用特征更加復雜，其途徑和通路較多〔17，18〕，后續(xù)研究關注Cyr61的調控機制及干預可能有重要價值〔19〕。

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R73

A

1005-9202(2017)23-5862-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.23.052

1 廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院眼科

蔡 潔(1979-)，女，博士，副主任醫(yī)師，主要從事眼科疾病研究。

黃榮師(1977-)，男，碩士，講師，主要從事肝癌靶向治療研究。

〔2016-07-25修回〕

(編輯 苑云杰)