CRP干片在干化學儀器內放置時間對其測定值的影響

張君，程云章

上海理工大學，上海 200093

CRP干片在干化學儀器內放置時間對其測定值的影響

張君，程云章

上海理工大學，上海 200093

目的探討CRP干片在干化學儀器上存放時間過長對檢測結果的影響，為CRP干片的臨床使用提供必要的參考。方法選取高、低兩種濃度的質控品，每隔8 h對兩種濃度的質控品進行20個測試。判讀結果的精密度和準確度是否符合規定。結果CRP干片在機時間超過48 h對檢測結果影響較大，精密度和準確度均不合格。結論CRP干片裝載到機器上后，需在48 h內盡快使用。

CRP干片；在機穩定性；實驗室質控；精密度

近年來，Ortho公司的干化學技術由于其結果準確，抗干擾能力強，檢測速度快等優勢，受到越來越多臨床檢驗科室的青睞。但是干化學檢驗所需的試劑載體—干片，對儲存要求比較嚴格，需要冷凍或冷藏儲存。拆包后的干片也需要盡快使用，否則干片中的某些成分容易失效，影響檢驗結果的準確性。然而某些基層醫院測試量非常小，1個干片試劑包（50個測試）經常需要花很多天才能用完。

C-反應蛋白由肝臟合成，是一種急性反應蛋白。在急性期反應中，可以觀察到一些血漿蛋白的濃度升高，其中包括CRP。CRP濃度的測定有助于檢測和評估炎癥、組織損傷和感染。如果CRP濃度不準確，會對臨床醫生診斷疾病時造成誤導，因此確保CRP濃度測定的準確顯得尤為重要[1]。

為了分析CRP干片在全自動干生化分析儀Vitros 350上放置時間會對檢驗結果造成何種影響，該文對C-反應蛋白測定（CRP）干片進行了穩定性研究，旨在對干片的臨床使用提供一些參考。幫助基層醫院在購買CRP測定干片時選擇合適的規格和數量，以免造成不必要的浪費。

1 材料和方法

1.1 儀器

①Ortho公司生產的Vitros 350全自動干生化分析儀；②上海大龍 1 000 μL 加樣槍（YE4A342684）。

1.2 試劑

①C-反應蛋白測定（CRP）干片（批號371208962224）；②Ortho公司原廠的定標品Kit 7（批號1320498）；③Ortho公司原廠的質控品CRP PV 1（批號N5113）和CRP PV 2，（批號N5115）；④Ortho公司原廠的免疫洗液Immuno-Wash Fluid（批號 B4840）。

1.3 實驗步驟

①對Vitros 350干化學分析儀進行調試維護，保證設備運行正常，并使用Kit 7完成CRP的定標。②將液體CRP PV 1、PV 2分裝，標記，然后立即放入冰箱內保存備用。③同時從冰箱中取出10個同批次的CRP測定干片，復溫30 min后立即裝載到機器上。④立刻運行CRP PV 1和PV 2，各20次，依據廠家文件FRM23509，判斷標準差SD和變異系數CV%是否在限值內。如在限值內，則繼續下一步驟。如超限則終止實驗。⑤間隔8 h后，再次運行CRP PV 1&2，各20次，判讀標準同步驟4，同時依據Westgard多規則質控程序，判斷質控是否失效。計算步驟5中的均值與步驟4中的均值的偏倚（%），判斷是否超出室間質量評價標準規定的±25%的可接受范圍。⑥如果步驟5的數據未超限，則重復步驟5，如超限則終止實驗。

表1 批內精密度實驗結果及其對應的SD值和CV%值

2 實驗原理和結果

臨床試驗室通常采用室內質控和室間質評這兩種評價方法來判斷結果是否準確。室內質控是監測一個檢測系統，包括方法學、儀器、試劑、環境及操作過程等綜合因素作用下結果的穩定性。室間質評是檢測、控制實驗室測定的準確度。是實驗室結果在實驗室間的互認的基礎。該文即采用室內質控和室間質評兩種方法，研究CRP干片在干化學分析儀器內放置時間對其測定值的影響。

2.1 室內質控評價

室內質控最基本的評價方法是精密度判定。通常是對穩定的樣品作多次測定，求這些重復測定值的均值和標準差，以及變異系數CV。對某樣品作多次重復測定，均值就是這組測定值的平均水平。標準差是各重復測定值對于均值的離散程度。標準差大小反映了該測試的精密度水平。標準差越大，表明測定值位于均值附近的概率較小，即測定的精密度低。反之，標準差越小，表明測定值位于均值附近的概率較大，即測定的精密度高。精密度又可以分為批內精密度、批間精密度和天間精密度。見圖1。

2.1.1 批內精密度 批內精密度是指對同一標本用同一方法在相同條件下重復測定所得的各次結果間或各次結果與均值之間的符合程度。對批內精密度進行評價，一般是一批內重復測量20～30次。該次實驗則選取高低水平的兩種質控品：PV1和PV2，對兩種質控品各運行20個測試，記錄檢測結果，計算均值，SD和CV。根據均值和測試次數，在廠家的提供的指導文件FRM23509中找到對應的允許SD和允許CV[2]。將測試所得的SD值和CV值和廠家的允許值進行比較。如沒有超過允許值，則說明結果有效，并將所得的均值作為基準，用于質控判斷，見表 1、表 2。

圖1 實驗室質控評估值示意圖

表2 廠家的SD和CV%合格值

依據廠家文件FRM23509的Guideline SD和CV%值，當干片在設備上存放時間在48 h內，PV 1和PV 2的批內精密度都合格，當在機存放時間達到56 h時，PV 2的SD值和CV%值都超限。

2.1.2 天間精密度 天間精密度是在不同時間重復檢測同一樣本所得的變異性。根據EP5-A2《定量測量方法的精密度性能評價》的要求，天間精密度的試驗需連續測試10 d或20 d，而對于短時運行，樣本可在實驗過程的任意時刻進行[3]。因此該次實驗每8 h做一組試驗，所得的結果作為評價天間精密度的基礎數據。

該文對天間精密度的評價標準采用Westgard多規則質控程序。Westgard多規則質控程序是利用5種不同的判斷規則來確定一個分析結果是在控還是失控的方法，它被廣泛地應用與臨床實驗室[4]。Westgard多規則質控程序大底如下。

13S：單一水平的質控測量數據超出了平均值±3 SD的控制限范圍，為失控。22S：連續2個質控測量結果在同側超過平均值±2 SD控制限，失控。R4S：一個質控水平的連續兩次質控數據，一個超過了mean+2SD，一個超過了mean-2 SD，為失控。41S：4次連續的質控結果超過了同一側的mean±1SD質控線，為失控。10x：連續10個質控結果都落在均值的一側，為失控。見表3、圖2、圖3。

表3 天間精密度實驗結果

表4 允許誤差結果(%)

圖2 westgard多規則質控流程圖

圖3 天間精密度實驗結果折線圖

根據Westgard多規則質控程序，當CRP干片在機存放48 h，PV2的結果大于2 SD，達到警戒值。當CRP干片在機存放時間達56 h后，PV1和PV2的結果均大于3S D，違反了13S規則。且PV1和PV2的連續7個質控數據呈逐漸上升的趨勢，違反了7T規則。因此試驗數據失控。

2.2 室間質控評價

對于室間質評，從1999年衛生部臨床檢驗中心已不再采用VIS和DI，而是采用類似美國臨床檢驗能力驗證計劃（CLIA’88）評價模式。即靶指±允許總誤差。

衛生部臨床檢驗中心室間質量評價標準規定C-反應蛋白（CRP）的可接受范圍是靶值±25%[5]。該實驗以首次（即CRP干片剛上機）測得的均值作為靶值，并以±25%以內作為可接受范圍，以此來判定CRP干片在機存放時間多久之后，室間質評失敗，結果不可控。

CRP干片在機時間達到84 h后，PV2的偏倚大于靶值+25%，超出臨床檢驗室間質量評價標準規定的可接受范圍。測定值的準確性已經得不到保證。見表4、圖4。

圖4 允許誤差折線圖

3 討論

CRP干片中的試劑成份特殊，它的在機穩定時間非常短，長時間放置會影響CRP的測定值，究竟CRP干片在干化學分析儀上放置時間會對CRP測定值造成何種影響，目前尚無相關報道[6-9]。針對這個問題，該試驗采用高，低兩種濃度的CRP質控品—PV1和PV2，對批內精密度，天間精密度和結果偏倚進行了驗證。結果顯示CRP干片在機放置48 h內，PV1和PV2的批內精密度變化都較小，在可接受范圍內。CRP干片在機放置時間達56 h，PV2的批內精密度超出標準。PV1和PV2的天間精密度在56 h均出現失控[10-11]。且根據Westgard規則，當CRP干片在機存放48 h的時候，PV2的質控值已經超過了2 SD，達到了預警線。CRP測定值隨在機時間增長呈正偏倚，在機56 h后PV1的偏倚超出可接受范圍[12-13]。

綜上所述，在測定C-反應蛋白（CRP）時，一定要保證CRP干片在機存放時間不超過48 h，這樣可確保測定結果的準確性。基層醫院應根據實際測試需求，在生化分析儀上放置合適數量的CRP干片以保證CRP干片在穩定期內用完，減少不必要的浪費，同時也保證結果的準確性與精密度。

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Effect of Placement Time of CRP Dry Plate in the Dry Chemical Instrument on the Measurement Value

ZHANG Jun,CHENG Yun-zhang
Shanghai University of Technology,Shanghai,200093 China

ObjectiveTo study the effect of placement time of CRP dry plate in the Dry chemical instrument on the measurement value and provide necessary reference for the clinical use of CRP dry plate.MethodsThe high concentration and low concentration of quality control articles were selected and they were given 20 tests every 8 h,and whether the precision and accuracy of results was determined.ResultsWhen the in-machine time of CRP dry plate was more than 48 h,the effect on the test results was bigger,and the precision and accuracy were not qualified.ConclusionThe CRP dry plate needs to be used within 48 h after fixing on the machine.

CRP dry plate;In-machine stability;Quality control in the laboratory;Precision

R446 [文獻標識碼]A [文章編號]1672-5654（2017）11（c）-0022-04

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.33.022

張君（1986-），男，上海人，在職碩士，研究方向：生物醫學工程。

2017-08-25）