定氮法測定鹿心中的蛋白質含量

倪亞娜，秦儉

1.白城市食品藥品檢驗所，吉林白城 13700；2.吉林白城市食品化妝品稽查分局，吉林白城 137000

定氮法測定鹿心中的蛋白質含量

倪亞娜1，秦儉2

1.白城市食品藥品檢驗所，吉林白城 13700；2.吉林白城市食品化妝品稽查分局，吉林白城 137000

目的采用氮測定法測定鹿心的蛋白質含量。方法采用《中國藥典》2015年版四部通則0704氮測定法中第一法（常量法）或第三法（定氮儀法）測定。結果《中國藥典》2015年版四部通則0704氮測定法中第三法（定氮儀法）測定消解，與第一法含量無差別。結論鑒于各大藥廠存在無消解儀、自動蒸餾儀及滴定儀的現象，故仍采用第一法進行測定。

鹿心；定氮；消解；蒸餾

鹿心具有調節人體新陳代謝、促進改善各種生理機能、養心氣、安心臟、止汗化痰、抑制興奮、活血通竅、化瘀止痛、對心臟病、心肌缺血、心絞痛，心動過速、心動過緩、腦動脈硬化，有較好效果。同時鹿心具有增強心肌收縮力、減低心肌耗氧量，對失眠盜汗，內臟積水引起心跳、心慌等癥具有顯著效果。同時作為多家藥企生產的心腦康膠囊的主要原料。

1 儀器與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器 BSA 224S電熱套；凱氏燒瓶（500 mL）；冷凝管；錐形瓶（500 mL）；滴定管（25 mL）；量筒（50 mL，100 mL）；NKD6280電位法凱氏定氮儀

1.1.2 試劑 硫酸鉀（分析純）、硫酸銅（分析純）、硫酸（分析純）、硫酸銨（分析純）、磷酸二氫銨（分析純）、氫氧化鈉、鋅粒

1.2 消解條件考察

1.2.1 氮測定法 《中國藥典》2015年版四部通則0704第一法）[1]。

1.2.2 取樣量考察 以藥材中蛋白質為考察對象進行含量測定。分別取本品粉末0.10、0.25、0.50、1.00 g，精密稱定，照氮測定法[2]《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法)測定，根據硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，確定取樣量。見表2。

表1 已知含量9.98%（g/g）的鹿心不同取樣量消耗滴定液數量

根據上述滴定液消耗數量，控制滴定體積25 mL以下，確定取樣量0.25 g。

1.3 樣品中含量測定

分別精密稱取11個批次梅花鹿、馬鹿樣品，按含量測定的方法進行測定。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果

1.3.1 氮測定法 《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第三法。

1.3.2 取樣量考察 以藥材中蛋白質為考察對象進行含量測定。分別取本品粉末0.1、0.2、0.3、0.5 g（含氮量9.98%），精密稱定，照氮測定法(《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第三法測定，根據硫酸滴定液（0.05 mol/L）消耗量，確定取樣量。見表3。

表3 不同取樣量鹿心消耗滴定液數量

根據上述含量測定結果，控制滴定體積25 mL以下，確定取樣量0.25 g。

1.3.3 樣品中含量測定 分別精密稱取11個批次公鹿的樣品及7個批次母鹿樣品，按含量測定的方法進行測定。結果見表4。

表4 樣品含量測定結果

結果表明：氮測定法的第一法和第三法在測定結果比較中無差異。所以使用第一法和第三法都可以。

1.4 方法驗證

1.4.1 線性關系考察 精密稱取供試品粉末0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 g，照氮測定法(《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，以取樣量為橫坐標，消耗滴定液體積值為縱坐標，繪制標準曲線，結果表明供試品取樣量在0.1～1.0 g范圍內呈現良好線性關系?；貧w方程為Y=65.37X-0.099 3，r=0.999 9。見表5。

表5 線性關系考察結果(已知含量9.98%)

1.4.2 準確度 ①以磷酸二氫銨為基準物質的精密度考察。取已知含量的鹿心藥材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品計算，水分5.4%），共取6份，精密加入磷酸二氫銨（含氮量12.17%）試劑適量，平行6份，按以上“供試品溶液的制備”項制備并測定，分別計算回收率，結果表明平均回收率為95.2%，RSD為0.56%。見表6。

表6 回收率試驗結果

②以硫酸銨為基準物質的精密度考察。取已知含量的鹿心藥材粉末0.25 g（含氮量9.98%以干品計算，水分5.4%），共取6份，精密加入硫酸銨（含氮量21.21%）試劑適量，平行6份，按以上“供試品溶液的制備”項制備并測定，分別計算回收率，結果表明平均回收率為95.50%，RSD為0.01%。見表7。

表7 回收率試驗結果

結論表明：用磷酸二氫銨和硫酸銨兩種基準物考察回收率無差異，回收率在95.00%～105.00%之間，方法可行。

1.4.3 精密度 ①重現性試驗。取同一批號的樣品6份（含氮量9.98%），分別精密稱重，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法)測定，計算測定結果的RSD值為0.2%。結果證明此方法重現性良好。

②中間精密度。實驗室3名人員各做一個樣品（已知含氮量9.98%），用同一臺天平、相同試劑試藥、同一條件消解測定，測得蛋白質的含量分別為 9.97%、9.96%、9.96%，計算其相對標準偏差RSD為0.1%。

1.4.4 專屬性 取空白試劑，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，消耗滴定液體積值為0.20 mL。

1.4.5 耐用性 取同一批號的樣品6份（已知含氮量9.98%），分別精密稱重，照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法測定，采用不同廠家試劑、試藥進行試驗，計算測定結果，測定結果的RSD值為1.1%。結果證明此方法重現性良好。

1.4.6 穩定性試驗 取同一批號的樣品7份，分別精密稱重（已知含氮量9.98%），照氮測定法《中國藥典》（2015年版四部）通則0704第一法蒸餾后放置0、4、8、12、16、20、24 h測定，計算測定結果的RSD值為0.2%。結果證明此方法重現性良好。見表8。

表8 穩定性試驗結果

1.5 樣品中含量測定

分別精密稱取11個批次梅花鹿、馬鹿的樣品，按含量測定的方法進行測定。結果見表9。

2 結論

根據公鹿11批樣品的檢測結果，平均值為10.29%，將含量限度為“本品按干燥品計算，含總氮（N）不得少于8.0%”。方法可行。

表9 樣品含量測定結果

3 討論

鹿心為吉林省的地道藥材。目前心腦康膠囊、心腦康片、等中成藥中鹿心為主藥，具有良好的市場基礎。該項目目的就是建立鹿心藥材的質量標準，適用于醫院、企業生產、科研和經營中對鹿心的鑒定和質量檢驗。定氮法能有效的控制其蛋白質的含量，方法簡單易操作，方法依據為《中國藥典》2015年版，方法可行。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2015年版一部[M].中國醫藥科技出版社，2015.

[2]羅美蘭，丁志軍.凱氏定氮法測定土鱉蟲多肽片的總氮量，中國藥房[J].2013，24（25）：2365-2367.

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.30.110

R9

A

1672-5654（2017）10（c）-0110-03

倪亞娜（1977-），女，吉林白城人，本科，副主任藥師、研究方向：藥學。

2017-07-24）