MicroRNA- 124在急性腦梗死患者血清中表達(dá)的研究

保玉蓮 朱榆紅 鮑天昊 李 勤

1)個(gè)舊市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，云南 個(gè)舊 661000 2)昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，云南 昆明 650101

·論著科研之窗·

MicroRNA- 124在急性腦梗死患者血清中表達(dá)的研究

保玉蓮1)朱榆紅2)△鮑天昊2)李 勤1)

1)個(gè)舊市人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，云南 個(gè)舊 661000 2)昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，云南 昆明 650101

目的探討microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達(dá)，并分析其與急性腦梗死相關(guān)臨床因素的關(guān)系。方法收集同時(shí)期住院的急性腦梗死患者及健康體檢者各30份血清標(biāo)本，測(cè)定microRNA- 124相對(duì)表達(dá)量，比較2組間microRNA- 124表達(dá)量的變化，同時(shí)進(jìn)行急性腦梗死患者相關(guān)臨床資料研究，探討microRNA- 124與急性腦梗死相關(guān)臨床因素的關(guān)系。結(jié)果與正常體檢者相比，microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達(dá)升高(P<0.05)，其表達(dá)量與梗死面積、發(fā)病時(shí)間有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、高血壓史、空腹靜脈全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往腦血管病史、MRA提示顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄等因素?zé)o明顯相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論microRNA- 124在急性腦梗死患者血清中的表達(dá)量較正常人升高，梗死面積越大，表達(dá)量越高，在發(fā)病24～72 h較發(fā)病72 h以后表達(dá)升高。

microRNA- 124；表達(dá)量；急性腦梗死；血清；臨床因素

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展與我國(guó)人口老年化的到來(lái)，腦血管病目前已成為我國(guó)人口致殘和死亡的首位原因，且發(fā)病率有逐年升高的趨勢(shì)。缺血性腦血管病(腦梗死)占腦血管病的60%～80%，其高致殘率、高病死率給社會(huì)和家庭帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。目前對(duì)腦梗死的診斷僅限于臨床表現(xiàn)及頭顱影像學(xué)檢查，尚無(wú)敏感的生化指標(biāo)能提示腦梗死的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后，使腦梗死在微觀世界里缺乏客觀有效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。2008年以來(lái)，多項(xiàng)[1- 3]研究均表明，血清、血漿及其他體液中存在著穩(wěn)定的microRNA，這就為microRNA作為某一疾病的生物學(xué)標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè)提供了可能。本文通過(guò)對(duì)急性腦梗死患者血清microRNA- 124表達(dá)量的測(cè)定，探討microRNA- 124在急性腦梗死患者體內(nèi)的變化及意義。

1 資料與方法

1．1一般資料

1．1．1 研究對(duì)象：選取個(gè)舊市人民神經(jīng)內(nèi)科及ICU 2013- 05—08住院的急性腦梗死(發(fā)病7 d內(nèi))患者30例，男17例，女13例，年齡42～84歲，平均64.73歲。全部病例均經(jīng)過(guò)病史及頭顱CT或MRI檢查確診，并排除短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)，同時(shí)排除免疫性、感染性及血液系統(tǒng)等疾病因素所致者。

1．1．2 對(duì)照組：選取同時(shí)期在個(gè)舊市人民醫(yī)院進(jìn)行健康體檢的正常人30例，男16例，女14例，年齡40～80歲，平均59.57歲。全部對(duì)照均通過(guò)詢(xún)問(wèn)病史、體格檢查及相關(guān)檢查排除新發(fā)腦梗死、高血壓、糖尿病、腫瘤及血液系統(tǒng)等疾病。2組間性別和年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1．2研究方法

1．2．1 血清標(biāo)本留取及保存：取觀察組及對(duì)照組晨起空腹靜脈血4～5 mL，靜置1 h后離心取上層血清，置于環(huán)氧乙烷消毒過(guò)的冷凍管中，標(biāo)記后于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．2 microRNA- 124表達(dá)量測(cè)定：按相關(guān)試劑盒操作步驟分別進(jìn)行miRNA提取、cDNA制備、實(shí)時(shí)熒光定量PCR。以U6 SnRNA作為內(nèi)參照(U6- F：CTCGCTTCGGCAGCACA，U6- R：AACGCTTCA- CGAATTTGCGT)。PCR儀自動(dòng)給出樣本擴(kuò)增曲線及溶解曲線、CT值，每份標(biāo)本重復(fù)PCR試驗(yàn)3次，取平均值。目的miRNA的Ct值減去U6的CT值作為△Ct值。目的miRNA的相對(duì)表達(dá)量采用相對(duì)于U6的2-△△Ct表示[4]。

2 結(jié)果

2．1 2組間血清miRNA- 124相對(duì)表達(dá)量比較2組間miRNA- 124相對(duì)表達(dá)量有差異，觀察組大于對(duì)照組(P≤0.05)。見(jiàn)表1。

表1 血清miRNA- 124的相對(duì)表達(dá)量

2.2急性腦梗死患者血清miRNA- 124相對(duì)表達(dá)量與臨床因素相關(guān)性分析收集30例急性腦梗死患者的臨床資料進(jìn)行分析整理，包括性別、年齡、抽血時(shí)間(指從發(fā)病至抽血間隔時(shí)間)、梗死面積(腔隙性、多發(fā)性、大面積)、高血壓史、空腹靜脈全血葡萄糖水平(FPG)、低密度脂蛋白水平(LDL- C)、既往腦血管病史、MRA提示顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄(包括單支或多支)等因素，急性腦梗死患者血清中miRNA- 124相對(duì)表達(dá)量與梗死面積及發(fā)病時(shí)間有關(guān)，大面積腦梗死中表達(dá)量最高，多發(fā)性腦梗死中次之，腔隙性梗死中表達(dá)量最少。發(fā)病24～72 h內(nèi)表達(dá)較發(fā)病72 h以后要高。miRNA- 124表達(dá)量與性別、年齡、高血壓史、空腹血漿葡萄糖水平、低密度脂蛋白水平、既往腦血管病史、MRA提示顱內(nèi)動(dòng)脈狹窄等因素?zé)o明顯相關(guān)性。見(jiàn)表3。

3 討論

腦梗死是我國(guó)中老年人群的常見(jiàn)病、多發(fā)病，近年來(lái)呈逐漸上升和低齡化趨勢(shì)，農(nóng)村地區(qū)也日益突出。目前對(duì)腦梗死的診斷僅限于臨床表現(xiàn)及頭顱影像學(xué)檢查，尚無(wú)敏感的生化指標(biāo)能提示腦梗死的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后，使腦梗死在微觀世界里缺乏客觀有效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。MicroRNA (miRNA) 是一組由動(dòng)物、植物和病毒基因所編碼的長(zhǎng)19～25個(gè)核苷酸的小分子單鏈RNA，它們參與了機(jī)體的各種重要生理和病理活動(dòng)，人類(lèi)約有1/3基因編碼的mRNA受到miRNA的負(fù)調(diào)控[5]。miRNA不僅參與了細(xì)胞的分化、生長(zhǎng)、增值及凋亡過(guò)程[6]，而且還在一些疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用[7]。目前所涉及的miRNA與疾病相關(guān)性研究領(lǐng)域主要集中在腫瘤方面，而miRNA與腦血管病的相關(guān)性研究近年來(lái)才剛剛起步，主要探討的是與缺血性腦血管病的關(guān)系[8]。早已有研究表明，不同miRNA在腦組織中表達(dá)的豐度不同，而miRNA- 124為腦組織中表達(dá)最豐富的miRNA[9- 10]，2014年Zhu等[11]研究小組已對(duì)miRNA- 124與腦缺血/再灌注損傷進(jìn)行過(guò)相關(guān)報(bào)道，故本研究選取miRNA- 124為研究對(duì)象，可以更真實(shí)、更特異地反映miRNA的變化與腦梗死之間的關(guān)系。

本研究中對(duì)比30例急性腦梗死及30例健康體檢者血清中miRNA- 124的相對(duì)表達(dá)量，腦梗死組血清miRNA- 124的表達(dá)較正常組升高，梗死面積越大，血清miRNA- 124的表達(dá)越高。考慮原本正常存在于腦組織中高表達(dá)的miRNA- 124，在急性腦梗死發(fā)生后，腦細(xì)胞出現(xiàn)缺血、缺氧、水腫、壞死，miRNA- 124大量釋放入血，從而導(dǎo)致血清中miRNA- 124表達(dá)升高，這與林洋等[12]在對(duì)大鼠研究中的結(jié)果是一致的。同時(shí)亦可以解釋梗死面積越大，釋放入血的量越大，故血清中表達(dá)量越高。另外，Weng等[13]研究小組發(fā)現(xiàn)，miRNA- 124在腦缺血6 h后即開(kāi)始升高，一直持續(xù)到48 h以后。林洋等[12]亦通過(guò)研究顯示，在發(fā)生缺血性卒中后，大鼠血漿中miRNA- 124 a的表達(dá)在8 h后開(kāi)始顯著升高，24 h達(dá)到高峰，約為卒中前的18倍，隨后48 h又逐漸降低，而缺血腦組織區(qū)的miRNA- 124表達(dá)水平在卒中后24 h較對(duì)照組顯著降低，為對(duì)照組腦組織中含量的12%～20%。

表2 急性腦梗死患者血清中miRNA- 124的相對(duì)表達(dá)與各臨床因素之間的關(guān)系

注：*F=5.534，P=0.005；**F=12.402，P=0.000

本文中亦有部分結(jié)果與上述研究相似。本研究提示，患者血清miRNA- 124的表達(dá)與發(fā)病時(shí)間有一定相關(guān)性。發(fā)病時(shí)間24～48 h及48～72 h 2組患者較發(fā)病>72 h患者的表達(dá)量升高，即發(fā)病24～72 h較發(fā)病72 h以后表達(dá)升高，這與上述在鼠類(lèi)研究中所得結(jié)論，缺血24～48 h血漿中miRNA- 124表達(dá)升高相一致。因臨床上患者對(duì)疾病認(rèn)識(shí)不夠，大部分患者不能在發(fā)病后及時(shí)入院，大多數(shù)病例均在發(fā)病1 d以上獲得血清標(biāo)本，故本研究中對(duì)于發(fā)病6 h、8 h等短期檢測(cè)不多。

若能探清急性腦梗死患者血清中miRNA表達(dá)譜的動(dòng)態(tài)變化，與發(fā)病類(lèi)型、發(fā)病時(shí)間及病變面積、其他臨床因素的相關(guān)性，就有可能為急性腦梗死設(shè)定特異性的血清生物學(xué)標(biāo)記物，從而提高腦梗死的診斷、分型、預(yù)后判斷的可靠性，為進(jìn)一步研究腦梗死后miRNA在腦細(xì)胞的一系列病理生理變化中的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)，并有可能為腦梗死的預(yù)防和治療提供新的作用靶點(diǎn)，為腦梗死的防治提供可靠依據(jù)。

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AstudyofmicroRNA- 124expressioninbloodserumofacutecerebralinfarctionpatients

BAOYulian*，ZHUYuhong，BAOTianhao，LIQin

*DepartmentofNeurology，theGejiuPeople’sHospital，Gejiu661000，China

ObjectiveTo investigate microRNA- 124 expression in the serum of acute cerebral infarction patient，and analyze the relationship between the expression and associated clinical factors．MethodsCollect 30 serum specimen of acute cerebral infarction patients and healthy check- up at the same time in the hospital．Detect microRNA- 124 relative expression in serum．Compare the microRNA- 124 expression variation between the two groups，and analyze clinical data of acute cerebral infarction patients．Investigate the relationship between microRNA- 124 and the clinical factors related to acute cerebral infarction．ResultsCompared with the regular check- up，the acute cerebral infarction patients serum microRNA- 124 expression upregulate(P<0.05)．The expression is associated with infarction area and onset time(P<0.05)．Meanwhile，there are no obvious correlation between serum microRNA- 124 expression and other factors in acute cerebral infarction patients，such as gender，age，history of high blood pressure，fasting venous blood glucose (FPG)，low density lipoprotein levels (LDL- C)，cerebrovascular disease history，MRA hint of intracranial artery stenosis (P>0.05)．ConclusionThe serum microRNA- 124 expression in acute cerebral infarction patients is higher than healthy people．The greater infarction area，the higher expression．There is a higher expression in the 24- 72 hours than after 72 hours onset．

MicroRNA- 124；Expression；Acute cerebral infarction；Serum；Clinical factor

10.3969/j.issn.1673- 5110.2017.20.004

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81060102)；云南省科技計(jì)劃項(xiàng)目[編號(hào)：2017FE467(-152)]

△通信作者：朱榆紅，女，教授，醫(yī)學(xué)博士，博士生導(dǎo)師。研究方向：腦血管疾病。Email：yuhong_lilin@yahoo．com．cn

R743.33

A

1673- 5110(2017)20- 0016- 04

(收稿2017- 06- 13)

王喜梅