豬肉中3種β—受體激動劑殘留檢測新技術試驗方案

[摘 要] β-受體激動劑因較強的毒性及易被濫用等特點一直備受關注。目前的分析方法中液相色譜-質譜法特異性強、靈敏度高，是β-受體激動劑殘留檢測最主要的技術手段，但樣品處理程序較為復雜，費時費力。本文在已有方法的基礎上，簡化樣品前處理步驟，采用MCX柱固相萃取和超高壓液相色譜-串聯四級桿質譜技術建立豬肉中沙丁胺醇、萊克多巴胺、克倫特羅3種β-受體激動劑單個或混合物殘留量的定性確證和定量測定，縮短樣品前處理耗時，增加樣品前處理批次，減少試劑耗材成本，極大地提高了工作效率。

[關鍵詞] 豬肉；β-受體激動劑；回收率；重復性；準確度；靈敏度

[中圖分類號] TS251.7 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-7909（2017）25-64-2

1 試劑與儀器

1.1 試劑

沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅對照品，純度均大于98.0%；濃鹽酸，分析純；無水碳酸鈉，分析純；乙酸乙酯；甲醇，色譜純；乙腈，色譜純；0.1 mol/L鹽酸溶液，10%碳酸鈉溶液，5%氨水甲醇溶液，甲醇-0.1%甲酸溶液（5+95，V/V）；標準儲備液，0.1 mg/mL；混合標準工作液，20 ng/mL。

1.2 儀器和設備

超高效液相色譜儀-串聯質譜儀（ACQUITY UPLC-Xevo TQ-S美國Waters公司）；天平，感量0.01 g[BT2202S賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；分析天平，感量0.000 01 g[CP225D賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；渦旋混合器（VX-Ⅲ踏錦科技）；高速離心機（3-30K德國Sigma公司）；固相萃取裝置（美國Waters公司）；Oasis MCX固相萃取柱（60 mg/3cc）；氮吹儀（HSC-24A天津市恒奧科技發展有限公司）。

2 測定方法

2.1 公告方法

農業部1025-18-2008號公告方法中，陽性添加樣品經酶解后高氯酸、氫氧化鈉調節pH值，當取樣量為2 g時，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg。加標濃度為0.50、1.00、2.50 μg/kg時，豬肉中3種β-受體激動劑類藥物（克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇）的平均回收率為80%～115%。3種目標藥物的回收率見表1。

2.2 改進方法

取均質的供試料品（2.00±0.02） g，作為空白試料（陰性對照）；取均質的供試料品（2.00±0.02） g，添加混合標準工作液得到0.50、1.00、2.50 μg/kg的空白添加試樣（陽性對照）。

3 結果與分析

經試驗證明，本方法達到了以下目的。

3.1 重復性

將1.00 μg/kg的3種激動劑（克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇）標準溶液混合液重復進樣7次。試驗結果為保留時間的相對標準偏差為0.21%、0.18%、0.61%，峰面積的相對標準偏差為3.6%、2.4%、0.4%。

3.2 準確度

本方法中在0.50、1.00、2.50、3.75 μg/kg添加濃度，用空白添加標準校正，其回收率范圍達到85%～112%，與1025-18-2008號公告規定的回收率一致。回收率及相對標準偏差見表2。

3.3 靈敏度

本方法當取樣量為2 g時，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg，與1025-18-2008號公告的靈敏度一致。

此外，縮短至少16 h的樣品前處理時間。

4 結論

1025-18-2008號公告中樣品前處理步驟需在樣品中加入β-鹽酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，于37 ℃下避光水浴振蕩約16 h后，用高氯酸、NaOH調節pH值。本方法樣品前處理時省略酶解步驟，提取前向樣品中加碳酸鈉溶液，乙酸乙酯提取2次后經凈化濃縮等步驟完成前處理。當稱樣量為2 g時，沙丁胺醇、萊克多巴胺、克侖特羅在豬肉中的檢測限為0.25 μg/kg，定量限為0.50 μg/kg。加標濃度為0.50、1.00、2.50 μg/kg時，豬肉中3種β-受體激動劑類藥物的平均回收率為88.3%～105.1%，滿足國際上動物性食品中獸藥殘留檢測的要求。以上證明本方法簡便快速、靈敏度高、耗材成本低，對豬肉制品的監管和保障食品安全具有重要意義。

5 經濟效益與社會效益

1025號公告-18-2008方法中使用的β-鹽酸葡糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶市場價格為850元/mL，高氯酸為120元/L，叔丁基甲醚為44元/L，折算到每個樣品上的成本比本方法至少高30～60元，再加上其他試劑耗材成本及儀器設備使用維護成本，按照一年做100批次樣品計算，本方法可每年節省費用0.8萬～1.0萬元。同時，本方法可加大樣品前處理數量，縮短檢測時間，為加大對豬肉制品的監管力度和保障食品安全帶來了不可估量的社會效益。