蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型滑膜組織中ICAM-1、NF-κB 表達(dá)的影響

陸小龍 ，曾 朋 ，向黎黎 ，熊 輝 ，齊新宇 ，郭玉星 ，周 彪

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

·方藥研究·

蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型滑膜組織中ICAM-1、NF-κB 表達(dá)的影響

陸小龍1，曾 朋1，向黎黎1，熊 輝2*，齊新宇2，郭玉星1，周 彪2

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208）

目的初步探討蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型的作用機(jī)制。方法選用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠 40只，分成蠲痹歷節(jié)清酊組、扶他林軟膏組、模型組、空白對(duì)照組，每組10只。對(duì)前三組采用踝關(guān)節(jié)腔注射尿酸鈉溶液造成急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，并予以相應(yīng)干預(yù)。觀察各組大鼠造模后一般狀態(tài)；用縛線法檢測(cè)大鼠踝關(guān)節(jié)腫脹度；光鏡下觀察踝關(guān)節(jié)滑膜的病理變化；采用免疫組化染色檢測(cè)滑膜組織中細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）和核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）含量。結(jié)果與模型組比較，扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組腫脹度降低（P＜0.05）；大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜光鏡觀察：空白對(duì)照組滑膜組織結(jié)構(gòu)整齊、層次分明。模型組滑膜組織結(jié)構(gòu)損壞、層次混亂，組織充血、水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增生，少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組與模型組比較改善明顯；大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織中，空白對(duì)照組與模型組ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組與模型組ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論蠲痹歷節(jié)清酊具有緩解腫脹、改善滑膜炎癥、抑制關(guān)節(jié)滑膜中ICAM-1、NF-κB表達(dá)的作用。

蠲痹歷節(jié)清酊；痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；ICAM-1；NF-κB

痛風(fēng)(Gout)是體內(nèi)嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致的代謝性疾病，病因是尿酸鹽在關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)周?chē)M織中沉積引起的急性炎癥反應(yīng)，其發(fā)生與體內(nèi)嘌呤代謝障礙和（或）尿酸排泄減少致血尿酸升高有關(guān)[1]，近年來(lái)國(guó)內(nèi)該病的發(fā)病率逐年升高[2]。本團(tuán)隊(duì)根據(jù)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病機(jī)及發(fā)病特點(diǎn)，在臨床應(yīng)用中藥蠲痹歷節(jié)清方治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎取得了滿意的臨床療效[3-4]。本課題通過(guò)改變劑型和作用途徑，將蠲痹歷節(jié)清方由水煎劑改成酊劑，為驗(yàn)證其療效及探討可能的作用機(jī)制，進(jìn)行了蠲痹利節(jié)清酊干預(yù)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)將其報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用SPF級(jí)健康雄性SD大鼠 40只，體質(zhì)量（194.50±19.21）g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心采購(gòu)，許可證號(hào)：SYXK(湘)2015-0004。實(shí)驗(yàn)通過(guò)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，在湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心飼養(yǎng)、造模，實(shí)驗(yàn)，隔2日清潔1次鼠籠。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

蠲痹歷節(jié)清方由蒼術(shù)、茵陳、黃柏、黃芩、當(dāng)歸、防己、澤瀉、土茯苓、白術(shù)、甘草等配伍組成，稱(chēng)取蠲痹歷節(jié)清方藥粉碎成粗粉，加75%乙醇900 mL浸漬，3 d后濾過(guò)，藥渣壓榨，濾液與榨出液合并，靜置24 h，濾過(guò)，合并濾液，補(bǔ)充75%乙醇至1 000 mL，攪勻，分裝，密封即得。蠲痹歷節(jié)清酊50 mL/瓶，生藥含量約0.064 g/mL,由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科制備。扶他林軟膏20 g/支，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

尿酸結(jié)晶體（aladdin industrial corporation，批號(hào)：21041220）；蘇木素（武漢德士生物工程有限公司，批號(hào)：20141124）；大鼠細(xì)胞間粘附分子1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)ELISA 試劑盒 [博燦生物科技（上海）有限公司，批號(hào)：20110224]；大鼠核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear transcription factor,NF-kB)ELISA試劑盒[博燦生物科技（上海）有限公司，批號(hào)：20110303]。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器

JY3002型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；LECIA DM LB2型雙目顯微鏡 （德國(guó)LECIA公司）；MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（北航公司）；Shandon325型石蠟切片機(jī)（英國(guó)Shandon公司）；DNP-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；MotisB5顯微攝像系統(tǒng)（麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)公司）。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組

SPF級(jí)SD大鼠，喂養(yǎng)3 d后按隨機(jī)原則分為4組，即空白對(duì)照組、模型組、扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組，每組10只。4組動(dòng)物在正常溫濕度（溫度24～28℃，相對(duì)濕度60%～75%）環(huán)境下，普通飼料喂養(yǎng)，自由飲水3 d，第4天開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2.2 動(dòng)物造模

除空白對(duì)照組外，其他組動(dòng)物參照呂軍等[5]建立高尿酸血癥并急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型的方法進(jìn)行造模。按無(wú)菌操作方法，用4號(hào)注射針頭，用3%氧嗪酸鉀溶液1 mL/100 g行腹腔內(nèi)注射，2次/d，連續(xù)注射1周后開(kāi)始造模。將大鼠右小腿下段毛剔除后，常規(guī)消毒，用直徑0.25 mm注射針（5 mL注射器），取受試大鼠右后肢背側(cè)的踝關(guān)節(jié)正中與小腿之間的間隙，將5%尿酸鈉溶液50 μL注入關(guān)節(jié)腔。對(duì)照組大鼠同樣使用相同方法注射0.2 mL生理鹽水[6]。造模后大鼠關(guān)節(jié)紅腫，不欲行動(dòng)，步履蹣跚或者跛行，飲食飲水較空白對(duì)照組少，根據(jù)Coderre等[7]大鼠步態(tài)分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，大鼠出現(xiàn)跛行，受試下肢剛觸及地面甚至受試下肢離開(kāi)地面，三足著地行走為造模成功[1,8]。

2.3 動(dòng)物給藥劑量[9]及方法

根據(jù)人與動(dòng)物體表面積換算公式計(jì)算蠲痹歷節(jié)清酊組、扶他林軟膏組大鼠的給藥劑量。蠲痹歷節(jié)酊劑：規(guī)格50 mL/瓶，成人每次劑量為5 mL/d，每日給藥3次。根據(jù)人與動(dòng)物體表面積換算公式，大鼠按1.35 mL/kg每天使用蠲痹歷節(jié)清酊，即每天使用生藥量為0.087 g/kg。扶他林軟膏：成人每次劑量為4 cm膏體，每日給藥3次。根據(jù)人與動(dòng)物體表面積換算公式，扶他林軟膏組大鼠每次約使用0.7 cm。生理鹽水：模型組、空白對(duì)照組大鼠涂以等劑量醫(yī)用0.9%生理鹽水。

用分液器將蠲痹歷節(jié)清酊涂于蠲痹歷節(jié)清酊組大鼠右踝，使用棉簽將扶他林軟膏涂于扶他林軟膏組大鼠右踝，模型組、空白對(duì)照組大鼠涂以生理鹽水，用輸液貼覆蓋。每天3次，共干預(yù)3 d。

2.4 觀察指標(biāo)

2.4.1 一般狀態(tài) 觀察各組大鼠的食量、水量、大小便、體質(zhì)量、外觀、步態(tài)、精神狀態(tài)等的變化情況，做詳細(xì)記錄并進(jìn)行對(duì)比分析。

2.4.2 踝關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)定 第一次給藥前在各組大鼠右踝關(guān)節(jié)處用畫(huà)標(biāo)志線，以確定給藥后量取相同部位，棉線繞其一圈后直尺量長(zhǎng)度，作為給藥前右后肢踝關(guān)節(jié)周徑記為L(zhǎng)1，給藥3 d后再次量取關(guān)節(jié)的周徑記為L(zhǎng)2。以(L2-L1)/L1作為大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)腫脹度。

2.4.3 踝關(guān)節(jié)滑膜組織鏡下形態(tài)學(xué)檢查 大鼠處死后，以踝關(guān)節(jié)為中心上下0.5 cm處剪斷，取下受試關(guān)節(jié)和周?chē)浗M織，分別快速切取踝關(guān)節(jié)滑膜，放入40 g/L中性甲醛溶液中固定，乙二胺四乙酸100 g/L脫鈣，常規(guī)脫水、透明、包埋、切片和HE染色，顯微鏡下觀察局部病理組織學(xué)變化。

2.4.4 滑膜組織中ICAM-1、NF-κB蛋白表達(dá)水平測(cè)定 取滑膜組織浸入生理鹽水中，使用10 mg/0.5 mL的濃度比例；將組織勻漿器放到冰盒中；用組織勻漿器進(jìn)行勻漿，直至勻漿液體呈現(xiàn)均勻一致的懸濁液；將均勻一致的懸濁液倒入EP管中，將EP管用全自動(dòng)離心機(jī)進(jìn)行3 000 r/min的高速離心5 min，以分離勻漿液；用移液槍把上清液移至己經(jīng)標(biāo)記好的EP管內(nèi)，存儲(chǔ)于-80℃冰箱里備用。用ELISA法檢測(cè)ICAM-1、NF-κB，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料用“±s”表示。如果滿足正態(tài)性和方差齊性檢驗(yàn)，采用單因素方差分析的最小二乘法(LSD)法行多組均數(shù)間的兩兩比較，若不滿足方差齊性則采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 一般狀態(tài)比較

造模后，空白對(duì)照組大鼠體毛潤(rùn)澤，活動(dòng)自如，反應(yīng)靈敏，飲食及二便正常；其余造模各組大鼠體毛欠光澤，精神欠佳，懶動(dòng)，食量減少，大便稀溏，大鼠關(guān)節(jié)紅腫，不欲行動(dòng)，步履蹣跚或者跛行，飲食飲水較空白對(duì)照組少。

3.2 關(guān)節(jié)滑膜組織形態(tài)觀察

空白對(duì)照組：鏡下可見(jiàn)滑膜組織無(wú)病理改變，結(jié)構(gòu)整齊、層與層之間間隔分明，滑膜層細(xì)胞性?xún)?nèi)膜由1-3層細(xì)胞組成（圖1A）。模型組：鏡下可見(jiàn)滑膜組織病理改變，結(jié)構(gòu)損壞、層與層之間間隔混亂，滑膜組織的充血、水腫，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞的增生，少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1B）。扶他林軟膏組：鏡下可見(jiàn)滑膜組織病理改變，結(jié)構(gòu)損壞、層與層之間間隔混亂，滑膜組織的充血、水腫，偶爾少量炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)可見(jiàn)中量成纖維細(xì)胞的增生，少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1C）。蠲痹歷節(jié)清酊組：鏡下可見(jiàn)滑膜組織病理改變，結(jié)構(gòu)損壞、層與層之間間隔混亂，滑膜組織的充血、水腫，偶爾可見(jiàn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)可見(jiàn)中量成纖維細(xì)胞的增生，少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)（圖1D）。

圖1 大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜組織形態(tài)光鏡圖（HE，×200）

3.3 大鼠關(guān)節(jié)腫脹度及滑膜組織中ICAM-1、NF-κB表達(dá)檢測(cè)

造模后，與空白對(duì)照組比較，模型組腫脹度增高（P＜0.05）；與模型組比較，扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組腫脹度降低（P＜0.05）；蠲痹歷節(jié)清酊組與扶他林軟膏組腫脹度比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。 見(jiàn)表 1。

與空白對(duì)照組比較，模型組滑膜組織中ICAM-1、NF-κB 的表達(dá)升高（P＜0.05）；與模型組比較，扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組滑膜組織中ICAM-1、NF-κB 的表達(dá)降低（P＜0.05）。 見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度及滑膜組織中ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較 （±s，n=10）

表1 各組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度及滑膜組織中ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較 （±s，n=10）

注：與空白對(duì)照組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05。

組別空白對(duì)照組模型組扶他林軟膏組蠲痹歷節(jié)清酊組F值P值關(guān)節(jié)腫脹度0.02±0.01 0.23±0.03△0.14±0.01▲0.15±0.01▲23.67 0.01 ICAM-1/pg·mL-1 138.38±17.17 378.88±21.18△209.51±24.60▲181.85±25.35▲23.43 0.01 NF-κB/pg·mL-1 846.03±54.69 3065.60±146.35△1588.11±233.04▲1573.05±184.52▲11.51 0.00

4 討論

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的研究者多從炎癥因子方面著手，IL-1[10]、IL-6、IL-8[11]、PGE2[12]、ICAM-1[13]等因子成為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎常用研究指標(biāo)。隨著對(duì)炎癥發(fā)生機(jī)制研究的深入，ICAM受到廣泛關(guān)注，正常情況下ICAM-1表達(dá)較弱，在各種炎癥因子刺激下其表達(dá)較基線狀態(tài)明顯升高，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的趨化，并介導(dǎo)了中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，ICAM-1是急性炎癥發(fā)展過(guò)程中重要的一部分，與炎癥細(xì)胞的黏附、浸潤(rùn)過(guò)程關(guān)系密切[14]。NF-κB[15]是細(xì)胞內(nèi)一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，它在細(xì)胞因子誘導(dǎo)的基因表達(dá)中起關(guān)鍵性的調(diào)控作用，廣泛參與炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡等多種生理、病理過(guò)程的基因調(diào)控。正常情況下處于未活化狀態(tài)，NF-κB激活會(huì)引起本已發(fā)生的炎癥反應(yīng)持續(xù)增強(qiáng)，其原理與促進(jìn)炎性細(xì)胞過(guò)度分泌于炎癥部位有關(guān)。

本課題組在研究中醫(yī)藥治療痛風(fēng)方面，做了許多的臨床研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[1-4，16]，旨在能夠研究出一種臨床療效確切，使用方法便利的藥物。本課題在蠲痹歷節(jié)清方的基礎(chǔ)上，改變劑型和作用途徑，由水煎劑轉(zhuǎn)變成酊劑，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證其療效及作用機(jī)制，為蠲痹歷節(jié)清方的藥物開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本文結(jié)果表明，關(guān)節(jié)腫脹度測(cè)定實(shí)驗(yàn)中,扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組關(guān)節(jié)腫脹度與模型組比較降低（P＜0.05）；扶他林軟膏組與蠲痹歷節(jié)清酊組關(guān)節(jié)腫脹度比較，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明扶他林軟膏與蠲痹歷節(jié)清酊均具有一定的消腫作用，其作用效果相當(dāng)。通過(guò)光鏡觀察大鼠踝關(guān)節(jié)滑膜切片，空白對(duì)照組滑膜組織結(jié)構(gòu)整齊、層次分明。模型組滑膜組織結(jié)構(gòu)損壞、層次混亂，組織充血、水腫，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、成纖維細(xì)胞增生，少量巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組與模型組比較，少量炎性細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，中量成纖維細(xì)胞增生，提示扶他林軟膏與蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)滑膜增生性病變的影響相當(dāng)。在大鼠滑膜組織ICAM-1、NF-κB的測(cè)定中，空白對(duì)照組與模型組ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示 ICAM-1、NF-κB的表達(dá)可能是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎炎癥反應(yīng)誘因。扶他林軟膏組、蠲痹歷節(jié)清酊組與模型組ICAM-1、NF-κB表達(dá)比較降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示扶他林軟膏、蠲痹歷節(jié)清酊具有抑制大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型中ICAM-1、NF-κB表達(dá)的作用。扶他林軟膏組與蠲痹歷節(jié)清酊組ICAM-1、NF-κB 表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示扶他林軟膏與蠲痹歷節(jié)清酊在抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型ICAM-1、NF-κB表達(dá)中效果相當(dāng)。綜上所述，蠲痹歷節(jié)清酊具有緩解急性腫脹、改善滑膜組織炎癥反應(yīng)、抑制痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)滑膜中ICAM-1、NF-κB的表達(dá)，從而減輕痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)局部的炎癥癥狀的作用。

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Effects of Juanbi Lijieqing Tincture on ICAM-1,NF-κB Expression of Synovial Tissue in Model Rats with Acute Gouty Arthritis

LU Xiaolong1,ZENG Peng1,XIANG Lili1,XIONG Hui2*,QI Xinyu2,GUO Yuxing1,ZHOU Biao2
(1.The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha,Hunan 410005,China;2.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410208,China)

ObjectiveTo explore the effect mechanism of Juanbi Lijieqing tincture on the model rats with acute gouty arthritis.MethodsThe 40 SPF level healthy male SD rats were divided into Juanbi Lijieqing tincture group,Futaling ointment group,model group,blank control group,10 rats in each group.The former three groups were established acute gouty arthritis model,and intervened by Futalin ointment and Juanbi Lijieqing tincture.Rats were observed after modeled in general condition,then compared.The ankle swelling of rats after drug intervention was detected by the line method;the ankle synovial pathological changes were observed under light microscope;the ankle joint synovial tissue intercellular adhesion molecule 1(ICAM-1),and nuclear-transcription factor-κB (NF-κB)in rats were determined by immunohistochemical staining method.ResultsThe swelling degree of Futalin ointment group and Juanbi Lijieqing tincture group,compared with the control group(P＜0.05).The synovial tissue structure in the blank group was neat and clear under the light microscope,while the synovial tissue structure in model group was disorder,synovial hyperemia,edema,and a large number of infiltration of inflammatory cells and proliferation of fibroblast,a small amount macrophage infiltration were also obseved in the model group;Futalin ointment group and Juanbi Lijieqing tincture group showed obvious improvement,compared with the model group.The expression of ICAM-1 and NF-κB between the blank control group,Futalin ointment group and Juanbi Lijieqing tincture group with the model group were significantly different (P＜0.05).ConclusionJuanbi Lijieqing tincture shows the effects of relieving swelling,improving synovial inflammation,inhibiting the expression of ICAM-1 and NF-kB in the synovial membrane of the joint.

Juanbi Lijieqing tincture;gouty arthritis;ICAM-1;NF-κB

R285.5；R684.3

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.12.001

本文引用：陸小龍，曾 朋，向黎黎，熊 輝，齊新宇，郭玉星，周 彪.蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型滑膜組織中ICAM-1、NF-κB表達(dá)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（12）：1299-1302.

2017-04-26

國(guó)家自然科學(xué)基金（81574005）；湖南省自然科學(xué)基金（2015JJ6083）；湖南省教育廳科研項(xiàng)目（13C680）。

陸小龍，男，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：骨病、筋傷的中醫(yī)藥防治研究。

*熊 輝，男，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail：xh_hn@sina.com。

（本文編輯 楊 瑛）