猴頭菌多糖對Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤作用及其機制研究

周 輝 ，劉 暢 ，2，劉楊霖 ，2，張 琦 ，游玉宇 ，2，歐 慧 ，2，徐康平 ，肖 玲

（1.湖南省腫瘤醫院/中南大學湘雅醫學院附屬腫瘤醫院，湖南 長沙 410013；2.南華大學，湖南 衡陽 421001；3.中南大學藥學院，湖南 長沙410013；4.中南大學基礎醫學院組織學與胚胎學系,湖南 長沙 410013）

猴頭菌多糖對Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤作用及其機制研究

周 輝1，劉 暢1，2，劉楊霖1，2，張 琦1，游玉宇1，2，歐 慧1，2，徐康平3，肖 玲4*

（1.湖南省腫瘤醫院/中南大學湘雅醫學院附屬腫瘤醫院，湖南 長沙 410013；2.南華大學，湖南 衡陽 421001；3.中南大學藥學院，湖南 長沙410013；4.中南大學基礎醫學院組織學與胚胎學系,湖南 長沙 410013）

目的探討猴頭菌多糖 (HPS)對Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤抑制作用及其可能機制。方法選取小鼠50只均接種Lewis肺癌瘤株造模，隨機分為HPS高、中、低劑量組、環磷酰胺(CTX)組和模型對照組，每組10只，HPS不同劑量組分別給予 HPS 200 mg/（kg·d）、100 mg/（kg·d）、50 mg/（kg·d），連續給藥 10 d；CTX 組給予 CTX 40 mg/（kg·d），連續給藥 3 d；模型對照組每天給予生理鹽水0.1 mL/10 g。另選取10只健康小鼠作為正常對照組。10 d后對各組小鼠眼球取血，分離血清，ELISA法測定腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-2(IL-2)，分離瘤體，稱質量并計算抑瘤率。結果與模型對照組相比，CTX組和HPS高、中、低劑量組的瘤重均顯著降低(P＜0.05)，抑瘤率分別為73.52%、44.33%、29.65%和16.58%，各組間差異均有統計學意義(P＜0.05)。與正常對照組相比，模型對照組小鼠TNF-α顯著增高，IL-2顯著降低(P＜0.05)；與模型對照組相比，CTX組和HPS各劑量組的TNF-α均顯著降低，IL-2均顯著增高(P＜0.05)，HPS各劑量組變化幅度顯著小于CTX組(P＜0.05)，但HPS各劑量組間無統計學意義(P＞0.05)。結論HPS對小鼠Lewis肺癌具有劑量依賴性的抑瘤作用，其機制可能與改善血清TNF-α和IL-2水平，進而改善機體免疫功能有關。

猴頭菌多糖；Lewis肺癌；TNF-α；IL-2

猴頭菌是一種藥食兩用的真菌，猴頭菌多糖(hericium polysaccharide,HPS)是猴頭菌主要活性物質，報道顯示其具有抗腫瘤、抗菌、免疫調節、抗氧化、抗凝血、降血脂等功效[1-5]。本實驗建立Lewis肺癌小鼠模型，觀察不同劑量HPS對Lewis肺腫瘤的抑制作用，并觀察其腫瘤的發生、發展及轉移關系密切的血清細胞因子、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細胞介素-2(interleukin-2，IL-2)水平的影響，旨在探討HPS的抗腫瘤作用及其可能的作用機制。

1 實驗材料

1.1 實驗動物和細胞株

實驗小鼠由廣東省醫學動物實驗中心提供，共60只，均為 SPF 級，雌雄兼有，6～8 周齡，體質量（20.0±2.0）g；小鼠Lewis肺癌細胞株由中國科學院上海生命科學研究院提供。

1.2 主要儀器、試藥和試劑

HPS由黑龍江中醫藥大學生物化學教研室制備，質量分數72.25%，臨用前用生理鹽水配制并稀釋至實驗濃度；環磷酰胺 (cyclophosphamide,CTX)由江蘇恒瑞醫藥股份有限公司提供，規格0.2 g/支。小鼠TNF-α Elisa試劑盒、小鼠IL-2 Elisa試劑盒由博士德生物科技有限公司提供；DNM-9602酶標儀由北京普朗新技術有限公司提供。

2 方法

2.1 造模及檢測

選取小鼠50只均接種Lewis肺癌瘤株造模，造模方法為：取傳代Leviw肺癌荷瘤小鼠的腫瘤細胞，以生理鹽水稀釋成瘤細胞濃度1×107/mL的細胞懸液，取0.2 mL接種于小鼠右側腋窩皮下，建立Leviw肺癌荷瘤小鼠模型。建模成功后將模型小鼠隨機分為HPS高、中、低劑量組，環磷酰胺(CTX)組和模型對照組，每組均為10只，HPS高、中、低劑量組分別給予 HPS 200 mg/（kg·d）、100 mg/（kg·d）、50 mg/（kg·d）， 連續給藥 10 d；CTX 組給予 CTX 40mg/（kg·d），連續給藥 3 d；模型對照組每天給予生理鹽水0.1 mL/10 g。另選取10只健康小鼠作為正常對照組。10 d后對各組小鼠眼球取血，分離血清，ELISA法測定TNF-α和IL-2，嚴格按照說明書方法操作。小鼠脫頸椎處死后，將瘤體分離出，稱質量并計算抑瘤率。抑瘤率為與模型對照組相比，各給藥組平均瘤重減輕的百分比。

2.2 統計學方法

3 結果

3.1 HPS對Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用

模型對照組、CTX組、HPS高、中、低劑量組的瘤重和抑瘤率如表1所示，與模型對照組相比，CTX組和HPS各劑量組的瘤質量均顯著降低，差異均有統計學意義(P＜0.05)。與CTX組相比，HPS各劑量組瘤重均大于CTX組，抑瘤率均小于CTX組，差異均有統計學意義(P＜0.05)。HPS各劑量組間相比，高劑量組瘤質量最小，抑瘤率最大，中劑量組次之，低劑量組瘤質量最大，抑瘤率最小，各組間差異均有統計學意義(P＜0.05)。

表1 不同組別對Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用比較

3.2 猴頭菌多糖對Lewis肺癌荷瘤小鼠TNF-α和IL-2的影響

各組小鼠TNF-α和IL-2水平如表2所示。與正常對照組相比，模型對照組的TNF-α顯著增高，IL-2顯著降低，差異均有統計學意義(P＜0.05)；與模型對照組相比，CTX組和HPS各劑量組的TNF-α均顯著降低，IL-2均顯著增高，差異均有統計學意義(P＜0.05)；與CTX組相比，HPS各劑量組TNF-α均高于CTX組，IL-2均低于CTX組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；但HPS各劑量組間相比，差異無統計學意義(P＞0.05)。

表2 不同組別對Lewis肺癌荷瘤小鼠TNF-α和IL-2的影響

4 討論

臨床上有云芝多糖（PSK）、水飛薊素膠囊和鴉膽子油乳等多種用于治療惡性腫瘤的清熱解毒類制劑。近年來，植物提取物抗腫瘤的研究日益深入：傳統中藥白花蛇舌草提取物抑制大腸癌耐藥裸鼠移植瘤[6]，樹舌多糖GF、香菇多糖等多種多糖已被證實具有直接抑制腫瘤細胞生成的作用，也可以間接通過對免疫功能調節等發揮抗腫瘤作用[7-8]。HPS的抗腫瘤作用目前已有研究報道。Kim等[9-10]的動物實驗研究顯示，HPS提取物具有抗腫瘤作用，并能抑制肺癌細胞的轉移。國內孫力等[11-12]也報道HPS可抑制S180荷瘤小鼠腫瘤生長。但HPS抗腫瘤機制目前尚無定論。聶繼盛等[13]報道HPS發揮抗腫瘤作用與增強NK細胞活性有關，夏松柏[12]報道HPS可提高血清 IFN-γ和IL-2水平，可能通過免疫調節作用發揮抗腫瘤作用。TNF-α是具有促腫瘤作用的細胞因子，IL-2是參與免疫調節的重要細胞因子之一，在抑制腫瘤生長等方面具有重要作用，二者相互作用可發揮一系列的免疫作用，均與惡性腫瘤的發生、發展密切相關，其表達水平可間接反映機體免疫功能狀態和腫瘤進展情況[14-15]。本實驗研究不同劑量的HPS對Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用及對TNF-α和IL-2水平的影響，并與CTX對比，以探討HPS的抗腫瘤作用及可能機制。

結果表明HPS可顯著抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤瘤體生長，改善血清TNF-α和IL-2水平，提示HPS具有抗腫瘤作用，其機制可能與糾正調節細胞因子水平以改善機體免疫功能有關。同時，研究中也發現HPS對小鼠Lewis肺腫瘤的抑制作用呈現明顯的劑量依賴性，隨著劑量增大，腫瘤抑制作用隨之增強，但其對細胞因子的改善程度未見明顯差異。這與夏松柏[12]以S180荷瘤小鼠模型研究得出的HPS中劑量抗腫瘤作用優于高、低劑量的結果不同，可能與實驗采用的腫瘤模型不同以及HPS來源不同等因素有關，仍有待進一步深入研究。

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Study of the Inhibition and Its Possible Mechanisms of Hericium Polysaccharides on Mice with Lewis Lung Cancer

ZHOU Hui1,LIU Chang1,2， LIU Yanglin1,2,ZHANG Qi1,YOU Yuyu1,2,OU Hui1,2,XU Kangping3， XIAO Ling4*
（1.Hunan Cancer Hospital/the Affiliated Cancer Hospital of Xiangya School of Medicine,Central South University,Changsha,Hunan 410013,China;2.University of South China,Hengyang,Hunan 421001,China;3.School of Pharmacy,Central South University,Changsha,Hunan 410013,China;4.Department of Histology and Embryology,School of Basic Medical Science,Central South University,Changsha,Hunan 410013,China）

ObjectiveTo study the inhibition and its possible mechanisms of Hericium polysaccharides (HPS)on mice with Lewis lung cancer.Methods50 mice were chosen to establish Lewis lung cancer mice models,and were divided randomly intofive groups:HPS high-dose group,HPS middle-dose group,HPS low-dose group,cyclophosphamide(CTX)group and model control group,10 mice in each group.The mouse in former three groups were given HPS 200 mg/kg,100 mg/kg and 50 mg/kg daily for 10 days,respectively,while those in CTX group were given CTX 40 mg/kg daily for 3 days,and those in modelcontrolgroup were given physiologicalsaline 0.1mg/10g daily for10 days.Another 10 healthy mice were chosen as the normal control group.The blood from eyeball of mice were collected,and the blood serum were separated,and tumor necrosis factor-α (TNF-α)and interleukin-2 (IL-2)were detected by ELISA.The tumor inhabitation rates were calculated.ResultsCompared with model control group,the tumor weights in CTX group and HPS high-dose,middle-dose and low-dose group all significantly decreased(P＜0.05)with tumor inhabitation rates 73.52%,44.33%,29.65%and 16.58%,which had statistical significance between each group(P＜0.05).The level of TNF-α was higher and the level of IL-2 in model control group was lower than those in normal control group (P＜0.05).Compared with model control group,the level of TNF-α significantly increased and the level of IL-2 significantly decreased in CTX group and HPS groups (P＜0.05).The change trends of CTX group were more obvious than those in HPS groups (P＜0.05),while there was no significant differences among HPS different dose groups(P＞0.05).ConclusionHPS has dose-dependent inhibitory effect on mice with Lewis lung cancer,which may be associated with improvement of serum TNF-α and IL-2 level,thus improving immune function.

Hericium polysaccharide;Lewis lung cancer;TNF-α;IL-2

R285.5；R734.2

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2017.12.006

本文引用：周 輝，劉 暢，劉楊霖，張 琦，游玉宇，歐 慧，徐康平，肖 玲.猴頭菌多糖對Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤作用及其機制研究[J].湖南中醫藥大學學報，2017，37（12）：1320-1322.

2017-02-23

2017年度湖南省中醫藥科研計劃項目(201768)；湖南省財政廳項目[湘財社指（2016）129號]；湖南省自然科學基金項目(2015JJ6058)。

周 輝，男，博士，主任醫師，研究方向:腫瘤分子生物學。

*肖 玲，女，博士后,副教授，碩士研究生導師，E-mail:xiaolingcsu@csu.edu.cn。

（本文編輯 李 杰）