人凝血酶原復合物的小鼠急性毒性實驗研究

郭心怡，張寶獻，曹長雷，楊柳，王猛，滕世超

（1.華蘭生物工程重慶有限公司，重慶涪陵 408100；2.長江師范學院，重慶涪陵408100）

人凝血酶原復合物的小鼠急性毒性實驗研究

郭心怡1，張寶獻1，曹長雷2＊，楊柳1，王猛1，滕世超1

（1.華蘭生物工程重慶有限公司，重慶涪陵 408100；2.長江師范學院，重慶涪陵408100）

采用完全隨機法對小鼠分組，通過劑量摸索性實驗、預實驗和最大耐受劑量實驗對人凝血酶原復合物在小鼠體內的急性毒性進行了初步研究。結果表明：人凝血酶原復合物的最大濃度為16IU/mL，最大體積為0.5mL/20g鼠次；尾靜脈注射后，小鼠行為、活動、體重、死亡等指標以及攝食、飲水、大小便均未發生異常；人凝血酶原復合物對小鼠的最大耐受量為800IU/kg，人凝血酶原復合物注射顯示的臨床劑量安全無毒。

人凝血酶原復合物；最大耐受劑量；毒性

人凝血酶原復合物（Human prothrombin complex concentrate，PCC）是從人的混合血漿中分離提取的一種組分，屬于血漿蛋白制劑，主要成分有自身凝血酶原、凝血酶原轉化因子、抗乙型血友病因子和凝血酶原[1]。在臨床上，PCC主要用于治療乙型血友病、因維生素K缺乏或患肝病而引起的出血等癥狀[2]。近年來，隨著PCC分離技術的不斷發展和安全性的不斷提高，PCC使用量正在逐年增加。國內相關學術研究主要聚焦在PCC的分離純化、功能機制、臨床應用和安全性等方面[3-8]，PCC的毒性研究國內還尚未報道，為此，本文探究了PCC對小鼠機體的毒性效應，對PCC在小鼠體內的急性毒性進行了初步研究。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

遠交品系小白鼠（重慶市中藥研究院實驗動物研究所采購，華蘭生物工程重慶有限公司飼養），昆明種屬，個體2～3月齡、18～22g，雄（♂）、雌（♀）各半。生產許可證號：SCXK（渝）2012-0006，使用許可證號：SYXK（渝）2009-0001。

表1 人凝血酶原復合物小鼠劑量摸索性實驗情況

表2 人凝血酶原復合物小鼠臨床給藥后觀察結果

1.2 實驗樣品

華蘭生物工程重慶有限公司生產的人凝血酶原復合物（批號：201208001）和人凝血酶原復合物稀釋劑（批號：201206004）。

1.3 動物分組

采用隨機法進行分組，將雌雄隨機分開并對小鼠采用染色法編號，頭部位為1號、右前肢為2號、右肋部為3號、右后肢為4號、尾根為5號、左后肢為6號、左肋部為7號、左前肢為8號、背部為9號、不染色為10號、其余編號重復；最后將實驗動物以軟件法按體重降序標號，用Excel“RAND”函數隨機編號。

1.4 劑量選擇及劑量分組

1.4.1 劑量摸索性實驗

利用少量小鼠摸索，找出0%、100%估計致死量；測定半數致死量或濃度（LD50或LC50）；依據臨床指導用量找出PCC最大給藥量、靜脈注射最大給藥體積，取12只小鼠，禁食12h，不禁水。依據PCC常用給藥量、10倍最大給藥量和100倍最大給藥量劑量設計3組，每組4只。

1.4.2 預實驗

預實驗以最大靜脈注射給藥體積進行，給藥后連續觀察7天，全程記錄。

i值計算方式如下：

1.5 PCC最大耐受劑量實驗方法

取雌雄各半的小鼠20只，不禁水但禁食12h。性別分開并按設計的給藥濃度和體積，連續兩次給藥，每次間隔6h，記錄小鼠的各種行為與反應。重復觀察7天。

2 實驗結果

2.1 劑量摸索性實驗

取小白鼠12只，分別以設定的PCC臨床劑量對小白鼠進行尾靜脈注射，連續觀察7天，全程記錄小白鼠精神狀態和死亡情況。結果表明，藥物濃度在人凝血酶原復合物0%～100%的劑量范圍是200～2 000IU/kg，見表1。

2.2 預實驗

取小白鼠16只，隨機分成4組，實驗前禁食12h，不禁水。結果表明：藥物濃度在人凝血酶原復合物0%～100%的劑量范圍是400～1 600IU/kg，沒有檢測出Dmax和Dmin，因此，按照設計給藥濃度每組4只動物繼續，見表2。

2.3 最大耐受劑量實驗

根據上面系列預實驗得出人凝血酶原復合物0%～100%致死劑量為8～12IU，致死范圍較窄、藥物毒性反應較靈敏，但并不能得出10%～100%以及測LD50較理想的70%致死劑量，為此，再次進行了人凝血酶原復合物最大耐受劑量實驗，得出小鼠對于人凝血酶原復合物的最大耐受量為40IU/mL。

3 結論

按照試驗設計，觀察了20只小鼠的飲水、攝食、體重變化情況、行為活動以及死亡等指標進，沒有發現任何異常。根據人凝血酶原復合物最大耐受劑量實驗得出，小鼠的最大耐受量推算為800IU/kg，臨床劑量安全無毒。

[1]焦麗華,趙輝,余偉,等.人凝血酶原復合物致血栓形成機制及其評價方法[J].中國輸血雜志,2009,22(8):701-703.

[2]曹海軍,杜晞,葉生亮,等.凝血酶原復合物制備過程吸附條件的研究[J].中國輸血雜志,2012,25(7):655-659.

[3]焦麗華,代旭蘭,劉文芳.凝血酶原復合物的制備及其臨床應用進展[J].中國輸血雜志,2008,21(9):737-741.

[4]邱家山,徐琦,方為茂,等.人凝血酶原復合物分離純化工藝的研究進展[J].生物技術通報,2006(2):17-20.

[5]劉欣晏,王鳳山,仲立軍,等.采用兩步凝膠吸附法制備人凝血酶原復合物的工藝研究[J].中國生化藥物雜志,2008,29(1):26-29.

[6]周志忠,曹艷花,林妙,等.冷沉淀與凝血酶原復合物聯合在大出血中的應用[J].海南醫學院學報,2009,15(9):1073-1074.

[7]王兆鉞.凝血酶原復合物的臨床應用[J].血栓與止血學,2008,14(5):238-240.

[8]趙鎧,章以浩,李河民.醫學生物制品學[M].2版.北京:人民衛生出版社,2007.

Study of Acute Virulence Experimenton White Mouse of Human Prothrombin Complex Concentrate

Guo Xin-yi1,Zhang Bao-xian1,Cao Chang-lei2*,Yang Liu1,Wang Meng1,Teng Shi-chao1
(1.Hualan Biological Engineering Company Limited of Chongqing,Chongqing Fuling 408100;2.Yangtze Normal University,Chongqing Fuling 408100)

s:Acute virulence of human prothrombin complex concentrate in white mouse had been studied with absolute random sample from dosage groping experiment and beforehand experiment to maximum patience experiment during June to July in 2013.The result showed that the maximal consistence of human prothrombin complex concentrate was 16IU/mL,with the maximal volume 0.5mL/20g.After tail mainline twice one day,all white mouses had no abnormity on feeding、drinking、relieving the bowels、activity、weight、death et al.The maximum patience dosage of human prothrombin complex concentrate in white mouse was 800IU/kg,which displayed innocuity on clinic dosage.

Human prothrombin complex concentrate;Maximum patience dosage;Virulence

R973 文獻標志碼：A

2096-0387（2017）06-0072-03

教育部“春暉計劃”合作科研項目（Z2015129）；重慶市教委科研項目（KJ1712308）。

郭心怡（1981—），女，山東巨野人，本科，工程師，研究方向：藥物學、血液制品。

曹長雷（1981—），男，山東鄒城人，碩士，副教授，研究方向：動物生態學。