阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝在假性血小板減少中的應用與價值探究

王勵 黃瑞英

阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝在假性血小板減少中的應用與價值探究

王勵 黃瑞英

目的 分析假性血小板減少中阿米卡星及枸櫞酸鈉干粉抗凝的應用效果及臨床價值。方法 采集5例假性血小板減少患者的枸櫞酸鈉抗凝血標本（2管，分別為水劑和干粉枸櫞酸鈉抗凝）、EDTA-K2抗凝血標本（2管，其中1管在采血前加入阿米卡星），使用全自動血細胞分析儀在5 min內、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h進行血小板計數檢測。結果 加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標本中，有4例患者的血小板計數結果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA- K2抗凝血標本，時間延長，血小板計數逐漸升高，但仍舊存在凝集現象，未在正常范圍值內；枸櫞酸鈉干粉抗凝的血標本，4例血小板計數結果正常。結論 EDTA-K2抗凝血加入阿米卡星能夠解離血小板聚集，枸櫞酸鈉干粉抗凝血標本亦可作為處理EDTA依賴的假性血小板減少情況。

乙二胺四乙酸；阿米卡星；枸櫞酸鈉干粉；假性血小板減少

臨床上，全自動血細胞分析儀的廣泛使用，使血常規檢查更加迅速和準確。抗凝劑乙二胺四乙酸鹽（EDTA）是ICSH認定的適用于全自動血細胞分析儀檢測的抗凝劑。實際使用過程中，容易引起EDTA依賴性假性血小板減少癥[1]。假性血小板減少患者的血小板計數結果與實際值存在偏差，可導致誤診、誤治現象發生。因此，尋求有效手段對假性血小板減少進行處理十分重要。眾多學者在研究中發現，氨基糖苷類抗菌藥物可以阻止、解離EDTA依賴性假性血小板減少癥患者的血小板聚集現象。同時，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝也適用該類患者血小板計數。本試驗以我院2015年1月—2016年8月收治的假性血小板減少患者為對象，通過對加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標本的研究，分析了阿米卡星解離血小板聚集的效果。通過實驗，發現枸櫞酸鈉（干粉）可用于血小板計數方面，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2016年8月于我院就診的5例假性血小板減少患者進行研究，血小板計數減少，血小板直方圖異常，儀器提示有凝集，涂片鏡檢顯示血小板大量聚集，纖維蛋白原、凝血酶原時間、部分凝血活酶時間均在參考范圍內[2]，均無血小板減少的相關體征。男性2例，女性3例；年齡34～62歲。

1.2 儀器與試劑

Syemex XS-1000i全自動血液分析儀及配套試劑和質控品，質量控制在控。EDTA-K2抗凝真空采血管、109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝真空采血管，肝素真空采血管由江西長青醫療科技有限公司提供。瑞氏-吉姆薩染液，由珠海貝索生物技術有限公司提供。硫酸阿米卡星0.1 g/ml，由遂成藥業股份有限公司提供。

1.3 方法

12.8 mg/管枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的制備：109 mmol/L枸櫞酸鈉抗凝（1 ∶ 4）真空采血管烘干。

分別采集1管12.8 mg/管枸櫞酸鈉（干粉）抗凝血標本500 μl，1管 109 mmol/L枸櫞酸鈉（1 ∶ 9）抗凝血標本和 2管EDTA-K2抗凝血標本各2 ml。在采血前，1管EDTA-K2抗凝血標本加入阿米卡星，血濃度為6.5 mg/ml；另1管EDTA-K2抗凝血標本未加入阿米卡星，采用XS-1000i全自動血液分析儀在5 min內、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h進行血小板計數檢測；加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標本在5 min內、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h采用XS-1000i全自動血液分析儀測定血小板計數；各管血涂片鏡檢。在5 min內、15 min、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h，采用XS-1000i全自動血液分析儀對枸櫞酸鈉（水劑）抗凝血、枸櫞酸鈉（干粉）抗凝血進行血小板計數檢測，血細胞涂片，染色處理，并在顯微鏡下觀察。

1.4 判斷標準

血涂片進行瑞氏-吉姆薩染色，利用顯微鏡進行觀察，鏡下見血小板聚集，或/和有血小板衛星現象表明為血小板凝集。根據《全國臨床檢驗操作規程》[3]進行操作，以該結果作為本次研究的參考值。

2 結果

2.1 EDTA-K2抗凝血的血小板計數結果

采血后，加有阿米卡星的EDTA-K2抗凝管在不同時間段內，血小板計數結果為：編號為1～4的患者血小板計數正常；編號為5的患者血小板計數逐漸升高，但仍舊存在凝集現象，未在正常范圍值內。未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板在各時間段內，血涂片鏡檢顯示血小板聚集，編號為1、2、4的患者隨時間延長，血小板計數逐漸減少。見表1、表2。

2.2 枸櫞酸鈉抗凝管的血小板計數結果

液體抗凝劑的抗凝劑與血液之比為1 ∶ 9，表3各血小板計數結果已乘以1.1進行換算。血涂片鏡檢均顯示血小板凝集。枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管在不同時間段內，血小板計數結果為：編號為1～4的患者血小板計數正常；編號為5的患者血小板計數逐漸減低，鏡下存在凝集現象，未在正常范圍值內。見表3、表4。

2.3 手工計數結果

經檢測顯示，編號為1的患者手工血小板計數為250×109/L，編號為2的患者手工血小板計數為229×109/L，編號為3的患者手工血小板計數為344×109/L，編號為4的患者手工血小板計數為217×109/L，編號為5的患者手工血小板計數為183×109/L。

2.4 血涂片分析

采血5分鐘內，EDTA-K2抗凝管涂片染色鏡檢，編號為1～5的患者血涂片顯示血小板聚集。編號為1、2和4的患者血小板聚集隨時間的延長而減少。

EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后，編號為1～4血小板計數正常，血涂片顯示正常；時間延長，編號為5的患者血小板聚集逐漸升高，血涂片顯示血小板仍有凝集現象。

枸櫞酸鈉（水劑）抗凝管的血涂片顯示有不同程度凝集，而且隨時間延長，凝集有嚴重現象。

枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的血涂片顯示，編號為1～4的患者血小板計數結果基本正常，血小板無聚集，編號為5的患者血小板計數結果逐漸降低，血涂片有凝集現象。

3 討論

假性血小板減少的原因較多，主要與抽血不當、EDTA-K2依賴性、冷凝集、藥物等因素密切相關，其中EDTA-K2依賴性十分常見。本實驗室中假性血小板減少癥的發生較為少見，與1969年國外學者第一次報道的結果相近，該報道指出[4]EDTA依賴性血小板減少癥的發生率為0.07%～2.00%。隨著血小板功能研究的深入，臨床總結EDTA依賴性假性血小板減少癥發生的因素主要如下：抗凝溫度和抗凝時間，時間延長，血小板聚集明顯，血小板計數減少。中藥、抗生素、奧氮平等藥物對EDTA依賴性假性血小板減少癥有一定影響。部分疾病治療后，血小板凝集現象也會消失，說明EDTA依賴性假性血小板減少癥與患者所患疾病的嚴重程度及是否接受治療有關。全自動血細胞分析儀的原理是依賴于細胞大小，血小板在體外發生聚集現象時，血細胞分析儀會將聚集的血小板誤認為是紅細胞或白細胞，因而對血小板計數結果產生影響，并出現漏診或誤診情況。

EDTA-K2依賴性的發生機制比較復雜，有研究[5]認為與血小板表面存在隱匿性抗原有關，存在EDTA時，血小板形態會發生變化，使其表面的隱匿性抗原的構象改變，與自身抗體結合，可激活花生四烯酸、磷脂酶A、二磷酸腺苷等活性物質?；钚晕镔|會促使血小板纖維蛋白受體活化，導致纖維蛋白和血小板聚集。亦有學者指出[6]：EDTA 抗凝血使血小板膜表面抗原的抗體增加，造成抗原抗體反應發生；由EDTA修飾的血小板膜表面抗原與血小板表面帶負電荷的磷脂抗體結合，即出現血小板凝集現象；血小板糖蛋白GPa與GPb有種單克隆抗體，與EDTA 抗凝劑相遇時會導致血小板出現凝集反應。臨床研究及實踐表明[7]，氨基糖苷類抗菌藥物可以抑制、解離血小板聚集，避免假性血小板減少癥的發生，而氨基糖苷類抗菌藥物中，阿米卡星的解離能力最為有效，高濃度阿米卡星對多種抗凝劑依賴性血小板聚集有著較強的抑制和解離功效。

表1 EDTA-K2抗凝管加入阿米卡星后的血小板計數結果（×109/L）

表2 未加入阿米卡星EDTA-K2抗凝管的血小板計數結果（×109/L）

表3 枸櫞酸鈉（水劑）抗凝管的血小板計數結果（×109/L）

表4 枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管的血小板計數結果（×109/L）

本次研究中，加入阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標本中，有4例患者的血小板計數結果正常；1例加或未加阿米卡星的EDTA-K2抗凝血標本，時間延長，血小板計數逐漸升高，但仍舊存在凝集現象，未在正常范圍值內；枸櫞酸鈉干粉抗凝的血標本，4例血小板計數結果正常。有研究報道提出[8]，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管抗凝濃度為12.8 mg/L，采血量在200～800 μl時，在一定程度上可以糾正EDTA-K2依賴性假性血小板減少癥。枸櫞酸鈉（干粉）治療有效而枸櫞酸鈉（水劑）治療無效可能是干粉濃度較高，而血小板激活程度隨著枸櫞酸鈉濃度升高而增加。

臨床上，當血小板計數減少與臨床不相符時，建議采取如下措施解決問題：血涂片顯示血小板聚集時，在排除采血不當因素后，加入血濃度為6.5 mg/ml的阿米卡星進行檢測，仔細觀察血涂片變化狀況，血小板聚集消失，對該結果進行上報；血小板仍有聚集，使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管抽血，進行檢測，同時涂片染色觀察血小板分布，血小板計數結果會更加準確。此外，一部分標本在使用阿米卡星、枸櫞酸鈉后未能解決的，如本試驗中，編號為5的患者，解決如下：可以讓其在機旁采血，立即上機進行檢測；含有EDTA-K2成分的全自動血液分析儀的配套稀釋液，可用0.9%生理鹽水代替配套的稀釋液，按照一定比例稀釋后，盡快上機操作；手工計數不能解決的，可對血涂片中的血小板數量進行估算，并在報告中注明。

總之，阿米卡星能夠有效解離血小板聚集，在假性血小板減少中，阿米卡星的解離作用最佳，不僅可以減少重復抽血造成的成本浪費，還能進一步減少患者遭受的痛苦。使用枸櫞酸鈉（干粉）抗凝管也有一定效果，但血涂片顯示血小板聚集時，需要重新進行抽血。因此，假性血小板減少中，兩者的應用價值較高。

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Amikacin and Sodium Citrate Powder of Anticoagulant Tube in the Application of Pseudo Thrombocytopenia and Value

WANG Li HUANG Ruiying Clinical Laboratory Department, Guiping Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guiping Guangxi 537200, China

Objective To analyze the application effect and clinical value of the anticoagulant of sodium amitacin and sodium citrate in pseudo thrombocytopenia. Methods 5 patients with pseudo thrombocytopenia and sodium citrate anticoagulant blood specimens were collected (2 tubes,water and dry sodium citrate anticoagulation, respectively), EDTA-K2anticoagulant blood specimens (2 tubes, before blood collection, one of which joined amikacin). The automatic blood cell analyzer was used in 5 min, 15 min, 0.5 h, 1 h, 2 h, 3 h to detect the platelet count. Results The platelet count was normal in 4 patients in the EDTA-K2anticoagulant specimens. 1 case of EDTA-K2anticoagulant specimens with or without amikacin, time extended and platelet count gradually increased, but there was still agglutination, which was not in normal range. Blood samples of sodium citrate dry powder, 4 cases of platelet count were normal.Conclusion EDTA - K2anticoagulant join amikacin solution from the platelet aggregation, sodium citrate powder as dealing with EDTA anticoagulant blood specimens can be rely on pseudo thrombocytopenia.

ethylenediamine tetraacetic acid; amikacin; sodium citrate powder; pseudo thrombocytopenia

R558

A

1674-9316（2017）27-0124-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2017.27.067

廣西省桂平市中醫醫院檢驗科，廣西 桂平 537200