原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病患者血清活性氧、轉錄因子κB及轉化生長因子β1水平變化及其臨床意義研究

白淑榮，沈 樂，陳 乾，楊 靜，耑 冰，王 艷，李 萍，楊 朝，郭東更，楊青蘭

原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病患者血清活性氧、轉錄因子κB及轉化生長因子β1水平變化及其臨床意義研究

白淑榮1，沈 樂1，陳 乾1，楊 靜1，耑 冰1，王 艷1，李 萍1，楊 朝1，郭東更2，楊青蘭1

目的觀察原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病(pSS-ILD)患者血清活性氧(ROS)、轉錄因子κB(NF-κB)及轉化生長因子β1(TGF-β1)水平變化，并探討其臨床意義。方法選取2015年7月—2017年6月寧夏回族自治區人民醫院呼吸科和風濕科收治的女性原發性干燥綜合征(pSS)患者94例，其中單純pSS患者46例作為pSS組，pSS-ILD患者48例作為pSS-ILD組；另選取同期體檢健康女性50例作為對照組。采用免疫印跡法檢測抗干燥綜合征A(SSA)抗體、抗干燥綜合征B(SSB)抗體、抗Robert52(Ro52)抗體，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平；血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS及TGF-β1水平的相關性分析采用Pearson相關性分析。結果pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率高于對照組(P<0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組(P<0.05)。Pearson相關性分析結果顯示，血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS(r=0.95)及TGF-β1(r=0.98)水平呈正相關(P<0.05)。結論pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明顯升高，且血清NF-κB水平與血清ROS、TGF-β1水平有關，推測ROS-NF-κB-TGF-β1信號通路可能與pSS-ILD的發生有關。

干燥綜合征；肺疾病，間質性；活性氧；轉錄因子κB；轉化生長因子β1

原發性干燥綜合征(primary Sjogren′s syndrome，pSS)是一種主要累及淚腺、唾液腺等外分泌腺體的常見慢性自身免疫系統疾病[1]，可單獨發病，也可累及肺臟，表現為間質性肺疾病(interstitial lung disease，ILD)。近年來，原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病(primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease，pSS-ILD)發病率不斷升高，目前其發病機制尚未完全明確，但肺纖維化是其致殘率和病死率升高的主要原因之一[2-3]。活性氧(reactive oxygen species，ROS)是機體重要的信號轉導分子，轉化生長因子β1(transforming growth factor beta 1，TGF-β1)是一種致纖維化效應因子，二者均在肺纖維化形成過程中發揮著重要作用。轉錄因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)是一種重要的轉錄因子，其可通過激活細胞因子級聯反應而生成促炎遞質，進而介導炎性反應。既往研究結果顯示，ROS、NF-κB、TGF-β1均參與肺纖維化形成過程[4-5]，但其與pSS-ILD是否有關目前尚未明確。本研究旨在觀察pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平變化，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年7月—2017年6月寧夏回族自治區人民醫院呼吸科和風濕科收治的女性pSS患者94例，均符合pSS診斷標準[6]，其中單純pSS患者46例(pSS組)、pSS-ILD患者48例(pSS-ILD組)，ILD的診斷參照2002年美國胸科學會/歐洲呼吸學會(ATS/ERS)制定的ILD診斷標準[7]。排除標準：(1)有肺結核病史者；(2)合并慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘、支氣管擴張、肺部腫瘤等呼吸系統疾病者；(3)合并慢性心、肝、腎功能不全者；(4)長期吸煙者。另選取同期體檢健康女性50例作為對照組。3組受試者年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者病程比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表1)，具有可比性。

1.2 免疫印跡法檢測自身抗體譜 pSS患者于入院次日、健康體檢者于體檢當天清晨采集空腹靜脈血3 ml，3 000 r/min離心15 min(離心半徑為10 cm)，分離血清置于-80 ℃冰箱中保存待測；采用深圳恒佳生物工程有限公司生產的ENA多肽抗體譜試劑盒檢測抗干燥綜合征A(SSA)抗體、抗干燥綜合征B(SSB)抗體及抗Robert52(Ro52)抗體，嚴格按照試劑盒說明書進行操作，檢測結束后將顯色條帶與標準條帶卡比照。

表1 3組受試者一般資料比較

注：pSS=原發性干燥綜合征，pSS-ILD=原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病；a為F值；“-”表示無相關數據

1.3 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 pSS患者于入院次日、健康體檢者于體檢當天采集肘靜脈血5 ml，置于5 ml分離膠-促凝管中(操作過程中避免溶血)，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min(離心半徑為10 cm)，留取上層血清置于1.5 ml EP管中，每個EP管分裝血清200 μl，做好標記，采用ELISA試劑盒(上海酶聯生物科技有限公司生產)檢測血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，并嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統計學方法 應用SPSS 11.5統計軟件進行數據處理，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗；計數資料分析采用χ2檢驗；血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相關性分析采用Pearson相關性分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率 3組受試者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。其中pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表2)。

2.2 血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平 3組受試者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平，差異有統計學意義(P<0.05)；其中pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組，差異有統計學意義(P<0.05，見表3)。

2.3 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平的相關性分析 Pearson相關性分析結果顯示，血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相關(r值分別為0.95、0.98，P<0.05，見圖1～2)。

表2 3組受試者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率比較〔n(%)〕

Table2 Comparison of positive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody among the three groups

組別例數抗SSA抗體陽性抗SSB抗體陽性抗Ro52抗體陽性對照組503(6 0)2(4 0)1(2 0)pSS組4644(95 7)a29(63 0)a32(69 5)apSS?ILD組4846(95 8)a30(62 5)a34(70 8)aχ2值114 9346 1761 06P值<0 05<0 05<0 05

注：SSA=干燥綜合征A，SSB=干燥綜合征B，Ro52=Robert52；與對照組比較，aP<0.05

Table3 Comparison of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1among the three groups

組別例數ROSNF?κBTGF?β1對照組50447 01±68 3059 95±8 6862 21±11 90pSS組46712 31±92 11a310 10±29 81a196 34±23 80apSS?ILD組481073 10±75 80ab440 77±57 33ab248 83±24 59abF值773 001308 791054 36P值<0 05<0 05<0 05

注：ROS=活性氧，NF-κB=轉錄因子κB，TGF-β1=轉化生長因子β1；與對照組比較，aP<0.05；與pSS組比較，bP<0.05

注：NF-κB=轉錄因子κB，ROS=活性氧

圖1 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS水平關系的散點圖

Figure1 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum ROS level in patients with pSS-ILD

注：TGF-β1=轉化生長因子β1

圖2 血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清TGF-β1水平關系的散點圖

Figure2 Scatter plot for relationship between serum NF-κB level and serum TGF-β1level in patients with pSS-ILD

3 討論

pSS是一種自身免疫系統疾病，好發于絕經期之后或30～40歲女性，其發病率為0.3%～0.4%。pSS的典型臨床表現為口、眼干燥，并可累及腎臟、肺臟、神經系統及消化系統等，其中肺臟是最常累及的器官之一，臨床表現為ILD。pSS-ILD患者早期呼吸道癥狀不明顯，病情可進一步進展為肺纖維化，進而導致患者殘疾或死亡。

NF-κB是一個重要的轉錄因子，其可調節細胞因子、酶類、細胞黏附分子表達。NF-κB普遍存在于多種組織的多種細胞質中，其受到氧自由基、內毒素及紫外線等刺激后可激活，進而誘導細胞因子、生長因子(如TGF-β1)產生。KWOK等[12]研究結果顯示，pSS患者唇腺組織中NF-κB水平較高。既往有研究顯示，博來霉素誘導的肺纖維化小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1水平及P65水平升高，采用N-乙酰半胱氨酸治療后小鼠肺泡灌洗液中丙二醛、TGF-β1及P65水平均明顯降低，提示丙二醛可能通過激活NF-κB途徑而調節TGF-β1釋放，進而導致肺纖維化[13]。

TGF-β1是一種致纖維化效應因子，其在組織損傷早期及修復期均具有促肺纖維化作用[14]。在體和離體實驗發現，TGF-β1具有較強的促纖維化作用[5]。COTTIN等[15]、BEDARD等[16]研究結果顯示，采用環磷酰胺序貫治療的pSS-ILD患者血清及肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、TGF-β1、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)水平明顯降低，提示TNF-α、TGF-β1及MMP-9水平升高可能與pSS-ILD發病有關。

本研究結果顯示，pSS組、pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率高于對照組，但pSS組和pSS-ILD組患者抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體陽性率間無差異，提示抗SSA抗體、抗SSB抗體及抗Ro52抗體與ILD的發生及發展無關。本研究結果還顯示，pSS組和pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于對照組，pSS-ILD組患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平高于pSS組，且血清NF-κB水平與pSS-ILD患者血清ROS、TGF-β1水平呈正相關，提示血清ROS、NF-κB、TGF-β1水平可能參與pSS-ILD的發生。

綜上所述，pSS-ILD患者血清ROS、NF-κB及TGF-β1水平明顯升高，且血清NF-κB水平與血清ROS、TGF-β1水平有關，推測ROS-NF-κB-TGF-β1信號通路可能與pSS-ILD的發生有關，但其具體機制尚需進一步研究證實。

作者貢獻：白淑榮進行文章的構思與設計，研究的實施與可行性分析，撰寫論文，對文章整體負責，監督管理；沈樂、楊靜、耑冰、王艷、李萍、郭東更、楊青蘭進行數據收集、整理、分析；陳乾進行結果分析與解釋；楊朝負責文章的質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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ChangesandClinicalSignificanceofSerumLevelsROS，NF-κBandTGF-β1inPatientswithPrimarySjogren′sSyndromeAssociatedInterstitialLungDisease

BAIShu-rong1，SHENYue1，CHENQian1，YANGJing1，ZHUANBing1，WANGYan1，LIPing1，YANGZhao1，GUODong-geng2，YANGQing-lan1

1.DepartmentofRespiratoryMedicine，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China2.DepartmentofRheumatology，thePeople′sHospitalofNingxiaHuiAutonomousRegion，Yinchuan750001，China

BAIShu-rong,E-mail：jzuxueer@163.com

ObjectiveTo observe the changes of serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in patients with primary Sjogren′s syndrome associated interstitial lung disease(pSS-ILD)，to explore the clinical significance.MethodsFrom July 2015 to June 2017，a total of 94 female patients with primary Sjogren′s syndrome(pSS)were selected in the Departments of Respiratory Medicine and Rheumatology，the People′s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region，thereinto 46 patients with isolated pSS were served as A group，the other 48 patients with pSS-ILD were served as B group；meanwhile a total of 50 healthy women were selected as control group.Western blotting method was used to detect anti-SSA anti-body，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody，enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1；Pearson correlation analysis was used to analyze the correlations of serum NF-κB level with serum levels of ROS and TGF-β1in patients with pSS-ILD.ResultsPositive rates of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody and anti-Ro52 antibody in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group(P<0.05)，while no statistically significant differences of positive rate of anti-SSA antibody，anti-SSB antibody or anti-Ro52 antibody was found between A group and B group(P>0.05).Serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in A group and B group were statistically significantly higher than those in control group，meanwhile serum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1in B group were statistically significantly higher than those in A group(P<0.05).Pearson correlation analysis results showed that，serum NF-κB level was positively correlated with serum level of ROS(r=0.95)，of TGF-β1(r=0.98)in patients with pSS-ILD，respectively(P<0.05).ConclusionSerum levels of ROS，NF-κB and TGF-β1are significantly elevated in patients with pSS-ILD，and serum NF-κB level is correlated with serum level of ROS，of TGF-β1，respectively，it is presumed that ROS-NF-κB-TGF-β1signal pathway may correlated with the occurrence of pSS-ILD..

Sjogren′s syndrome；Lung diseases，interstitial；Reactive oxygen species；Nuclear factor-κB；Transforming growth factor beta 1

寧夏自然科學基金資助項目(NZ15184)

1.750001 寧夏銀川市，寧夏回族自治區人民醫院呼吸內科

2.750001 寧夏銀川市，寧夏回族自治區人民醫院風濕科

白淑榮，E-mail：jzuxueer@163.com

R 593.22 R 563.13

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2017.11.011

白淑榮，沈樂，陳乾，等.原發性干燥綜合征相關間質性肺疾病患者血清活性氧、轉錄因子κB及轉化生長因子β1水平變化及其臨床意義研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2017，25(11)：42-45.[www.syxnf.net]

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2017-09-23；

2017-11-16)

謝武英)