超聲波提取六盤山區(qū)地榆中總黃酮的最佳工藝研究

(寧夏師范學(xué)院 寧夏 固原 756000)

超聲波提取六盤山區(qū)地榆中總黃酮的最佳工藝研究

張?zhí)仗锗u業(yè)彤陳香平顧榮麗

(寧夏師范學(xué)院寧夏固原756000)

以地榆總黃酮為目標(biāo)產(chǎn)物，設(shè)計正交試驗考查了溶劑體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時間、提取功率4個因素對地榆根中總黃酮提取率的影響,確立了地榆根中總黃酮較佳的超聲波提取條件為:乙醇體積分?jǐn)?shù)70 % ，料液比1:20，提取時間40min,提取功率為80%。提取物水沉后,離心過濾，過濾液用3倍的乙酸乙酯萃取3次, 純化后采用分光光度法測得地榆根中總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為96.79 % ,總黃酮提取率為干燥原料的6.95 %。

地榆;總黃酮;超聲波提取工藝

地榆(Garden Burnet Root)，是為雙子葉植物藥薔薇科(Rosaceae)植物地榆的根及根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味苦、酸，性微寒，有涼血止血清熱解毒生肌斂瘡的功能。在我國主要分布于東北、華北、西北、華東、中南及廣西等地區(qū)。研究發(fā)現(xiàn), 地榆根中富含鞣質(zhì)、皂苷和黃酮類化合物，主要有抗菌、抗突變、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、治療心血管疾病等作用。黃酮類物質(zhì)對冠心病、心絞痛、高血脂、心血管疾病有很好的療效[1，2]。具有很多重要的藥理作用,對許多人類疾病具有治療價值。它們擁有抑制酶的活性、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎癥、抗過敏、抗糖尿病并發(fā)癥等功能,且無毒無害, 對人類的腫瘤、衰老、心血管病等退變性疾病的治療和預(yù)防有重要意義, 它作為弱雌激素, 在治療婦女更年期綜合癥方面有很好的應(yīng)用前景[3]。故而對黃酮的提取工藝研究很重要。此研究采用的超聲波提取法操作簡單，節(jié)約時間且提取率較傳統(tǒng)工藝高。以地榆總黃酮為目標(biāo)產(chǎn)物, 考查了溶劑體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時間、提取功率4個因素對地榆根中總黃酮提取率的影響, 對地榆根中總黃酮的超聲波提取工藝進行了系統(tǒng)研究, 得到了地榆根中總黃酮較佳的超聲波提取工藝條件。

一、 材料與方法

(一)試驗材料

地榆購自固原中藥材市場，粉碎后，密封置陰暗處冷凍保存；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購自中檢所；其他試劑乙醇、乙酸乙酯、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH等藥品均購自國藥，都為分析純。

(二)儀器

燒杯、圓底燒瓶、三角瓶、電子天平、量筒、容量瓶、超聲波清洗器、紫外—可見光分光光度計、抽濾機。

(三)地榆根中總黃酮的定量方法

1．標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備: 稱取干燥的無水蘆丁9.00 mg , 作為黃酮標(biāo)準(zhǔn)對照品, 置于50 mL 容量瓶中, 加適量的95 % 乙醇, 置水溶液上微熱使之溶解, 放冷后用70 % 乙醇稀釋至刻度并搖勻, 即為0.18mg/mL 的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2．測定波長的確定：精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL,置于25mL 容量瓶中,加 70%乙醇 8mL,加 5%亞硝酸鈉溶液 1mL,搖勻,放置 6min 后加 10%硝酸鋁溶液 1mL, 搖勻, 放置 6min后再加入氫氧化鈉試液 10mL,加蒸餾水至刻度,搖勻。放置 15 min后,在 450～550nm波長范圍內(nèi)進行掃描。結(jié)果,對照品溶液于510nm處有較強吸收,選擇測定波長為510nm[4]。

3．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制: 精確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.00, 2.00 ,4.00 ,6.00 ,8.00m L 分別置于25ml容量瓶中,按上述方法顯色,于510 nm 處測定吸光度。用最小二乘法作線性回歸，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線: y =14.375x +0.0155, R = 0.9997。

4.地榆根中總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定及計算: 將地榆藥材粉碎,精密稱取地榆粉末2g,加入一定量的乙醇溶液,超聲提取,提取液抽濾后，減壓回收成浸膏,加 20mL水溶解,全部移入分液漏斗中,用乙酸乙酯萃取至無色,合并乙酸乙酯相減壓蒸干,用 70%乙醇溶解并定容到 50mL容量瓶中,即得樣品溶液。精密吸取 2mL 樣品溶液置于 25mL 容量瓶中,顯色后,測定吸光度, 在標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出質(zhì)量濃度, 計算即可得出樣品的黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

5.提取工藝條件探究：采用正交試驗，確定以超聲功率，超聲時間，乙醇濃度，料液比4個因素進行試驗，以總黃酮得率為考察指標(biāo)，確定超聲波提取地榆中總黃酮的最佳工藝條件。

6.提取工藝的驗證：為進一步考察最佳工藝的穩(wěn)定性和合理性，按優(yōu)化的最佳工藝條件進行重復(fù)性試驗3次，分別測定地榆總黃酮的含量。

二、 結(jié)果與分析

(一)標(biāo)準(zhǔn)曲線

(二)正交試驗：由于各因素的相互影響，要全面考慮超聲提取法的工藝參數(shù)，實驗中確定以乙醇濃度，超聲時間，超聲功率，料液比四種因素進行試驗，結(jié)果見表1表2。

表1 正交實驗因素水平設(shè)計表

表2 正交實驗結(jié)果與分析

極差分析表明，影響地榆總黃酮提取率的主要因素為料液比，其次是乙醇濃度，超聲功率，超聲時間。同時正交實驗結(jié)果表明，提取地榆黃酮的最佳條件為料液比1:20，乙醇濃度70%，超聲功率80%,超聲時間40min。

三、小結(jié)

(1)用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 體系分光光度法[5]測定總黃酮含量時, 必須嚴(yán)格保證稀釋定容用乙醇的濃度、試劑加入時間、顯色時間等測試環(huán)節(jié)前后完全一致, 否則會出現(xiàn)很大誤差。

(2)這種方法對于組成簡單、雜質(zhì)較少的總黃酮提取物, 線性關(guān)系良好, 結(jié)果準(zhǔn)確。對于組成復(fù)雜的總黃酮提取物、結(jié)果稍偏高。

(3) 采用超聲波提取法，大大縮短了提取時間，提高了提取率，且提取溫度低，對遇熱不穩(wěn)定，易水解或氧化的藥材中有效成分具有保護作用，故適用于絕大多數(shù)中藥材成分的提取，且提取工藝運行成本低，綜合經(jīng)濟效益顯著，但不適合工業(yè)化生產(chǎn)，消耗高，對設(shè)備要求高，此方法適用于黃酮實驗室研究。

[1]吳開云, 黃雪芳, 彭宜憲. 冰片、虎杖、地榆抑菌作用的實驗研究〔J〕. 江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1996,36(2):53-55

[2]傅乃武,劉朝陽,劉福成等.地榆和虎杖裸質(zhì)抑制體內(nèi)亞硝胺生成對抗巴豆油對皮膚的炎癥反應(yīng)和抗氧化作用的研究〔J〕.中藥藥理與臨床.1994(2):13-16

[3]程東亮, 曹小平, 鄒佩秀, 等. 中藥地榆黃酮等成分的分離與鑒定[J]. 中草藥, l995 (11) : 570 一571

[4]朱萬靖,倪培德,江志煒.沙棘中黃酮類化合物最佳提取工藝研究[J].中國油脂,2001 , 26(1):35-37.

[5]周蘭香, 黃阿根.分光光度與HPLC 法測定荷葉總黃酮的研究[J].中草藥, 2002 , 33(1):35 -37 .

張?zhí)仗?1995-)，女，漢族，寧夏省固原市人，學(xué)生，本科，寧夏師范學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院化學(xué)教育專業(yè)，研究方向自然科學(xué)。