烏司他丁對(duì)大鼠哮喘模型氣道重塑的影響

翟雪潔 劉 婷 蘭小艷 裴復(fù)陽(yáng) 柳明坤

（1.大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧大連 116622；2.寧夏銀川賀蘭縣第一人民醫(yī)院，寧夏銀川 750000）

烏司他丁對(duì)大鼠哮喘模型氣道重塑的影響

翟雪潔1劉 婷1蘭小艷2裴復(fù)陽(yáng)1柳明坤1

（1.大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧大連 116622；2.寧夏銀川賀蘭縣第一人民醫(yī)院，寧夏銀川 750000）

目的 探討烏司他丁對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP9）和金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TMIP1）與哮喘氣道重塑的關(guān)系。方法選取40只大鼠，隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、地塞米松組和烏司他丁組，分別給予相應(yīng)藥物干預(yù)，觀察對(duì)比各組MMP-9和TMIP1的血漿含量。結(jié)果 與模型組相比，地塞米松組和烏司他丁組MMP-9和TIMP-1含量顯著下降（P＜0.05），且MMP-9/TIMP-1比值顯著升高（P＜0.05），且兩組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論 烏司他丁可以有效緩解哮喘大鼠分泌的MMP-9和TIMP-1，抑制哮喘大鼠氣道中的炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。

烏司他丁；MMP-9；TIMP-1

目前專(zhuān)家報(bào)道嚴(yán)重的哮喘和氣道重塑相關(guān)，且嚴(yán)重哮喘的各個(gè)階段都會(huì)有氣道重塑現(xiàn)象。在正常機(jī)體內(nèi)，基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）與金屬蛋白酶組織抑制因子-1（TIMP-1）維持在平衡狀態(tài)。由于哮喘會(huì)破壞兩者的平衡狀態(tài)，會(huì)造成氣道壁沉積大量的細(xì)胞外基質(zhì)從而氣道發(fā)生重塑。該研究在于研究烏司他丁對(duì)哮喘大鼠氣道重塑以及MMP-9和TIMP-1的療效。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性BALB/c大鼠40只，周齡：6～8周，體重：160～200 g，購(gòu)自大連醫(yī)科大醫(yī)學(xué)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（遼）-12-2016。

1.2 試劑和設(shè)備

卵蛋白（OVA，批號(hào)：041K6072，Sigma公司，美國(guó)）生產(chǎn)；注射用烏司他丁（廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司）；大鼠MMP-9和TIMP-1ELISA試劑盒，購(gòu)自山東金橋生物技術(shù)有限公司；高速冷凍離心機(jī)（PST-21）。

1.3 方法

40只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、地塞米松組和烏司他丁組，每組各10只，喂養(yǎng)方式相同。造模方法：第1、7、14天，除了對(duì)照組，其他三組大鼠腹腔注射濃度為0.01%OVA致敏液，共0.2 mL。第7天，給予2.5%卵蛋白溶液對(duì)大鼠進(jìn)行霧化吸入來(lái)激發(fā)哮喘，每次30 min，1次/天，霧化吸入持續(xù)7天，對(duì)照組注射等量的生理鹽水，注射部分以及霧化吸入方式與模型組相同。實(shí)驗(yàn)第2天地塞米松組正常組腹腔注射1 mg/kg/d，烏司他丁組腹腔注射100 kU/kg/d，對(duì)照組和模型組腹腔注射生理鹽水，每組大鼠連續(xù)給藥到第14天。檢測(cè)大鼠的MMP-9和TIMP-1含量，各組大鼠于最后一次次藥24 h內(nèi)麻醉，摘除眼球術(shù)取血，先抗凝然后再以3500 r/min離心10 min，采用ELISA法檢測(cè)血清中的MMP-9和TIMP-1水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS20.0軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)以x±s表示；計(jì)量資料應(yīng)用AVONA分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組大鼠MMP-9與TIMP-1含量對(duì)比 與對(duì)照組對(duì)比，其他三組MMP-9和TIMP-1顯著增加（P＜0.05）；與模型組對(duì)比，地塞米松組和烏司他丁組MMP-9和TIMP-1含量顯著下降（P＜0.05），且MMP-9/TIMP-1比值顯著升高（P＜0.05），且兩組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（見(jiàn)表1）。

表1 各組大鼠MMP-9與TIMP-1含量對(duì)比（x±s，例=10）

3 討論與結(jié)論

氣道重塑是支氣管哮喘的典型特征，氣道重塑與哮喘嚴(yán)重程度是正相關(guān)的，因此改善氣道重塑是治療效果的主要指標(biāo)[1]。有文獻(xiàn)報(bào)烏司他丁可以有效的保護(hù)肺部組織以及抗肺纖維化的療效，其可以有效提高毛細(xì)血管通透性，降低炎癥因子的滲出，以及調(diào)解機(jī)體免疫的效果[2]。眾所周知，機(jī)體內(nèi)MMPs的作用是主要的限速酶之一，在機(jī)體病變過(guò)程中發(fā)揮不可取代的作用，其中MMP-9與哮喘關(guān)系最緊密[3]。烏司他丁能夠有效降解纖維連接蛋白以及層黏連蛋白，可以破壞基質(zhì)。TIMP-l是一種特異性的抑制劑，可以抑制MMP-9因此使得氣管基質(zhì)蛋白可以不被破壞，二者協(xié)同作用，保護(hù)機(jī)體內(nèi)的正常基質(zhì)與維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，但是MMP-9和TIMP-1含量的改變以及比例失衡在氣道重塑改變有著重要的作用。

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，地塞米松和烏司他丁能夠顯著減少哮喘大鼠體內(nèi)的MMP-9和TIMP-1的水平，以及對(duì)MMP-9/TIMP-1平衡造成了破壞，與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)結(jié)論不一致。氣道重塑改變是哮喘一個(gè)復(fù)雜的病變過(guò)程，烏司他丁能夠有效改善MMP-9和TIMP-1的作用。

[1] 宋冬梅，牛英豪，于磊，等.烏司他丁通過(guò)Nrf2/HO-1抗氧化途徑在OVA誘導(dǎo)的支氣管哮喘小鼠中發(fā)揮治療作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2014，30（12）：1713-1720.

[2] 王劍，卿國(guó)忠，楊少陵.烏司他丁對(duì)急性肺損傷大鼠肺組織HO-1表達(dá)的影響 [J]. 當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（25）：10-12.

[3] 季明霞，斯小水，何建新，等.烏司他丁聯(lián)合持續(xù)血液凈化治療對(duì)急性呼吸窘迫綜合征患者肺血管內(nèi)皮通透性的影響研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18（06）：688-691.

Effects of Ulinastatin on Airway Remodeling in rats with Asthma

Zhai xuejie Liu Ting Lan xiaoyan Pei Fuyang Liu Mingkun
（1.Zhongshan Hospital Affiliated to Dalian University，Dalian，Liaoning 116622，China；2.The First People's Hospital of Helan County，Yinchuan County，Ningxia，Yinchuan 750000，China）

Objective To investigate the relationship between ulinastatin and matrix metalloproteinase-9 （MMP9）,tissue inhibitor of metalloproteinase-1 （TMIP1） and airway remodeling in asthma. Methods Forty rats were randomly divided into control group, model group, dexamethasone group and ulinastatin group, and the corresponding drug intervention was given respectively. The plasma levels of MMP-9 and TMIP1 in each group were compared.Results Compared with model group, the levels of MMP-9 and TIMP-1 in dexamethasone group and ulinastatin group were significantly decreased （P＜0.05）, and the ratio of MMP-9/TIMP-1 was significantly increased, there was no significant difference between the two groups （P＞0.05）. Conclusion Ulinastatin can effectively relieve the secretion of MMP-9 and TIMP-1 in asthmatic rats and inhibit the infiltration of inflammatory cells in airway of asthmatic rats.

ulinastatin；MMP-9；TIMP-1

翟雪潔，碩士，醫(yī)師，研究方向：哮喘和肺間質(zhì)纖維化。

劉婷，碩士，主任醫(yī)師、教授、碩士生導(dǎo)師，研究方向：呼吸內(nèi)科。