黑果枸杞繼代培養激素種類及濃度的優化

趙明++景全全

摘 要：在初代培養的黑果枸杞基礎上，研究繼代培養中激素種類、濃度以及莖段長度的不同因素水平下的生長狀況，獲得最佳組合，為黑果枸杞工廠化育苗提供理論依據與參考。試驗結果表明到第30天時平均誘導芽長度以1/2MS+IAA0.05mg/L+2個芽組合最高，達到2.18cm；腋芽誘導率以1/2MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L+2個芽組合最高，達到100%；生根率以1/2MS+IAA0.05mg/L+2個芽組合最高，達到80%；平均生根根量以1/2MS+IAA0.1mg/L+3個芽組合最高，達到3.85條；3根最長根平均根長以1/2MS+IAA0.2mg/L+4個芽組合最高，達到7.84cm。結合試驗結果與經濟性原則1/2MS+IAA0.05mg/L+2個芽是最佳的繼代組合。

關鍵詞：黑果枸杞；繼代培養；生長情況

中圖分類號：S35 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171232010

前言

黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）為茄科（Solanaceae）枸杞屬多年生落葉灌木，分布于我國陜西北部黃土高原、寧夏、甘肅、青海、內蒙、新疆、西藏、中亞高加索和歐洲等地[1]，葉肉質、無柄簇生于短枝上，漿果球形，果實成熟后紫黑色，有甜味，種子褐色腎形，是一種極其重要的中藥材[2]。現代科學研究認為黑果枸杞可以興奮大腦神經、降低膽固醇、增強免疫功能、防治癌癥、抗衰老和美容、對人體生命健康非常有益。黑果枸杞提取物也可促進細胞免疫功能、增強淋巴細胞的增殖能力、促進腫瘤壞死因子的生成，對白細胞介素Ⅱ有雙向調解作用[3]。黑果枸杞多糖、黃酮和多酚具有抗氧化活性、對線粒體具有保護作用[4]。其果實中含有大量的紫紅色素，是非常珍稀的天然花色苷類色素資源。黑果枸杞是迄今為止發現的原花青素含量最高的天然野生植物，遠超藍莓等植物，而原花青素是最有效的天然水溶性自由基清除劑，其功能效果是維生素E的50倍、維生素C的20倍[5，6]。

黑果枸杞在鹽漬化和次生鹽漬化土壤上大量分布，常構成鹽爪爪（Kalidium foliatum）——黑果枸杞鹽生植物群落[7]。野生黑果枸杞適應性很強，能忍受38.5℃高溫，且在-25.6℃下無凍害[8]，為較耐旱樹種，土壤水合補償點為3.81%[9]，是一種典型的儲鹽植物，也是荒漠化地區特別是鹽堿化土地恢復植被的備選植物之一[10] 。黑果枸杞價格昂貴，市場需求量大，在巨大經濟利益驅使下，人們開始大量采集野生黑果枸杞，使得野生黑果枸杞的資源正遭受著巨大的開采壓力，導致黑果枸杞野生資源的分布區域正在迅速減小，植被退化嚴重[11]。黑果枸杞播種育苗容易造成性狀退化[12]，因此組織培養是保留優良種性，提高繁殖效率的一條重要途徑。但黑果枸杞繼代培養報道較少，所以本研究有重要的價值。本實驗在初代培養的基礎上，研究激素種類、濃度以及接種莖段長度3個因素在不同水平下黑果枸杞生長狀況，通過誘導芽長度、腋芽誘導率、生根率、平均生根數量、3根最長根平均根長等指標的測定獲得繼代培養最佳組合，為工廠化育苗提供一定的理論依據和參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

實驗于2015年10—12月進行，供試材料為黑果枸杞初代培養的試管苗，種源來自于甘肅民勤。選擇初代培養基中長勢健康良好、無玻璃化黑果枸杞莖段作為接種材料。

1.2 儀器設備

移液槍、錐形瓶、容量瓶、量筒、棉塞、玻璃棒、燒杯、超凈工作臺、電子天平、鑷子、剪刀、高壓滅菌鍋等。

1.3 供試藥劑

6-芐氨基嘌呤（6-BA）、吲哚-3-乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、鹽酸（HCl）、瓊脂、75%酒精、蔗糖、氫氧化鈉（NaOH）和蒸餾水等。

1.4 試驗設計

以MS培養基[13] 為基礎培養基，添加蔗糖15g/L、瓊脂4g/L，pH為5.8。將制作好的培養液加入到150mL三角瓶中，每瓶加入50mL，用棉塞塞緊瓶口，并置于滅菌鍋中，在1.05kg/cm2、121℃下高溫滅菌20min，讓其自然冷至室溫，第2天進行接種。每組接種10瓶，3個重復。將接種好的試管苗置與室溫條件進行培養。

試驗中用到的統計內容主要的計算方法為：

平均誘導芽長度=各個誘導芽長度之和/誘導芽個數；

腋芽誘導率=誘導出芽腋的個數/接種的腋芽總個數；

生根率=生根瓶數/接種瓶數；

平均生根數量=各瓶生根個數之和/生根瓶數；

3根最長根平均根長=各個生根瓶里最長3根根長之和/生根瓶數。

1.4.1 單因素試驗

根據馬和平等[14]已有研究，采用1/2MS培養基（與MS培養基相比大量元素含量減半，微量元素、有機成分與鐵鹽含量不變）。在培養基中僅以添加3種IAA、IBA、NAA激素為試驗因子，激素濃度為0.05mg/L。并結合楊寧等[15]研究結果，接種莖段長度為1.5～2cm左右。30d時測得芽生長長度、生根率、生根數量及3根最長根平均根長生長指標差異，從中選出最佳激素類型。

1.4.2 正交試驗

運用正交試驗，采用1/2MS培養基，在培養基中添加6-BA（0、0.5、1mg/L）、單因素試驗中最佳激素（0.05、0.1、0.2mg/L）及芽量（2、3、4個）為試驗因子，如表1。30d時測得芽生長長度、腋芽誘導率、生根率、生根數量及3根最長根平均根長生長指標差異，從中選出最佳組合。

1.5 數據分析

用Excel 2003和正交試驗II進行數據分析處理。

2 結果與分析

2.1 單因素試驗與分析