AtGHR1介導(dǎo)擬南芥對(duì)LPS先天免疫反應(yīng)的分子機(jī)制研究

鐵 英，楊成林，常 誠(chéng)，王耀輝，孫鴻舉

(1.內(nèi)蒙古和盛生態(tài)科技研究院有限責(zé)任公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010；2.呼和浩特啟秀中學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010000；3.內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010021)

植物依賴(lài)細(xì)胞質(zhì)膜模式識(shí)別受體(Pattern-recognition receptors，PRRs)來(lái)識(shí)別微生物表面的特異組分，即病原相關(guān)分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)[1]。這是植物先天免疫的核心機(jī)制。植物的模式識(shí)別受體和微生物表面的病原相關(guān)分子模式相互識(shí)別以后，會(huì)誘導(dǎo)植物細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子的瞬時(shí)升高，主要有細(xì)胞質(zhì)Ca和一氧化氮(NO)，進(jìn)一步誘導(dǎo)下游基因表達(dá)。

脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的保守成分，具有3個(gè)保守的結(jié)構(gòu)：脂A、核心寡糖和O-側(cè)鏈[2]。LPS是細(xì)菌黏附在植物表面的必需組分[3-5]。植物細(xì)胞對(duì)于LPS具有多層的先天免疫反應(yīng)，包括活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度([Ca2+]cyt)的瞬時(shí)升高[6-9]，以及下游胼胝質(zhì)在細(xì)胞壁的沉積和防御基因表達(dá)[10]。哺乳動(dòng)物細(xì)胞對(duì)LPS的識(shí)別依賴(lài)于細(xì)胞質(zhì)膜中的TLR4(Toll-Like Receptor4 )復(fù)合體[11]，該復(fù)合體由LPS結(jié)合蛋白(LPS-Binding Protein ，LBP)、糖基化磷脂酰肌醇錨定蛋白(CD14)、髓樣細(xì)胞分化蛋白2(Myeloid Differentiation Protein2，MD2)和TLR4蛋白組成。LBP首先與LPS結(jié)合，形成LPS-LBP復(fù)合體，然后與CD14互作，形成LPS-LBP-CD14復(fù)合體[12-14]。形成的三元復(fù)合體將LPS轉(zhuǎn)移到MD2，MD2是TLR4重要的輔助因子。最終激活TLR4并依次打開(kāi)下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。TLR4具有3個(gè)結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞的亮氨酸富集結(jié)構(gòu)域、跨膜域和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的激酶結(jié)構(gòu)域。大多數(shù)植物的防御反應(yīng)被100 ng/mL的LPS激活，而在動(dòng)物中是在pg到ng之間[15-16]，植物脂多糖受體對(duì)LPS的親和性與動(dòng)物相比存在差異。通過(guò)氨基酸比對(duì)，我們發(fā)現(xiàn)擬南芥的AtGHR1蛋白序列同動(dòng)物細(xì)胞的TLR4類(lèi)似。本研究主要探索了AtGHR1介導(dǎo)的擬南芥對(duì)LPS的先天免疫反應(yīng)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用的擬南芥野生型材料 (Columbia ecotype，Col-0)、大腸桿菌菌株DH5α、根癌農(nóng)桿菌菌株GV3101由內(nèi)蒙古大學(xué)祁智教授實(shí)驗(yàn)室保存；擬南芥缺失型突變體atghr1-1來(lái)源于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)鞏志忠老師；atghr1-2(salk_031493)購(gòu)自擬南芥生物資源中心(Arabidopsis Biological Resource Center)；Primer Star HS DNA Polymerase購(gòu)自TaKaRa；EasyTaq PCR Supermix DNA聚合酶和T4DNA連接酶購(gòu)自全式金公司；引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成；Pseudomonassyringaepv.tomatoDC3000購(gòu)自擬南芥生物資源中心(Arabidopsis Biological Resource Center)；表達(dá)載體pORE-R1、pORE-R3購(gòu)自擬南芥生物資源中心(Arabidopsis Biological Resource Center)；其他化學(xué)試劑購(gòu)自Sigma公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1AtGHR1編碼蛋白的亞細(xì)胞定位 以擬南芥野生型Col-0 cDNA為模板，擴(kuò)增AtGHR1基因的2 934 bp編碼序列，所用引物為5′-AAAGCGGCCGCTGGGGCAACTTCCATCACAG-3′和5′-CCCATCGAT TGCTGCTGCAATAGAAGAAAGATCTTCG-3′。以擬南芥野生型Col-0 基因組DNA為模板，擴(kuò)增AtGHR1的1 477 bp啟動(dòng)子序列，所用引物為5′-TTTCCGCGG CTAGTCAACGTAGTCAGCATGTGG-3′和5′-CCGAAC GTTTGCAGATAGAAAAAACATGGAG-3′。將上述擴(kuò)增產(chǎn)物克隆連入pEASY-T1(全式金)載體上，然后分別轉(zhuǎn)入E.coliDH5α中測(cè)序，測(cè)序正確后將AtGHR1啟動(dòng)子和AtGHR1基因克隆入雙元載體pORE R3并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中。將帶有AtGHR1基因的農(nóng)桿菌與帶有膜標(biāo)記蛋白 AtPIP2A∷mCherry 的農(nóng)桿菌共同注入生長(zhǎng)32 d的煙草(Nicotianabenthamiana)葉片中，用激光共聚焦顯微鏡(Zeiss LSM 510 )記錄熒光位置。

1.2.2 擬南芥中AtGHR1 啟動(dòng)子的活性檢測(cè) 將AtGHR1啟動(dòng)子擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pEASY-T1(全式金)載體上，然后轉(zhuǎn)入E.coliDH5α中。將測(cè)序正確的AtGHR1啟動(dòng)子克隆入雙元載體pORE R1報(bào)告基因β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的上游并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌中。利用農(nóng)桿菌侵染擬南芥野生型Col-0花序，通過(guò)抗生素篩選T1陽(yáng)性苗并進(jìn)行繁種，繼續(xù)篩選尋找純合體陽(yáng)性苗。將純合體陽(yáng)性苗進(jìn)行GUS酶活染色，檢測(cè)AtGHR1 啟動(dòng)子的活性。

1.2.3 病原菌感病試驗(yàn) 將擬南芥野生型和突變體atghr1播種在含有1%蔗糖，0.4% Phytagel的1/2 MS基本培養(yǎng)基上，水平生長(zhǎng)21 d。在無(wú)菌條件下，用無(wú)菌水和濃度為5×105cfu/mL的Pst DC3000(guard cell hydrogen peroxide-resistant1)懸液淹沒(méi)幼苗3 min，然后倒掉懸液，并用滅菌的濾紙吸干剩余的懸液。用透氣醫(yī)用膠布封好培養(yǎng)皿，放到光照培養(yǎng)箱觀察表型。葉片內(nèi)細(xì)菌的擴(kuò)繁密度測(cè)定依照Chinchilla等[16]的研究方法。

1.2.4 活性氧的測(cè)量 將野生型Col-0與突變體atghr1-1、atghr1-2播種在含1%蔗糖的1/2 MS基本培養(yǎng)基上，水平生長(zhǎng)，21 d后分別取1片葉片浸沒(méi)于100 μL滅菌水中于24 ℃暗室過(guò)夜。在弱光條件下用100 μL發(fā)光液(0.2 mmol/L魯米諾和20 μg/mL辣根過(guò)氧化物酶的水溶液)置換100 μL無(wú)菌水，并靜置30 min以上[17]。將樣品置于化學(xué)熒光測(cè)試儀(Luminometer，Turner Biosystem，20/20)測(cè)10個(gè)計(jì)數(shù)為背景值(1個(gè)計(jì)數(shù)/10 s)，吸取100 μL 200 μg/mL LPS處理液快速加入樣品中并測(cè)量，LPS終濃度為100 μg/mL。

1.2.5 細(xì)胞質(zhì)鈣離子的測(cè)量 利用花粉雜交產(chǎn)生細(xì)胞質(zhì)中穩(wěn)定表達(dá)水母發(fā)光蛋白的植株Col-0∷aequorin和atglr1-2∷aequorin，將2種植株單個(gè)葉片放入1.5 mL離心管中，加入100 μL測(cè)鈣緩沖液(1 mmol/L KCl，1 mmol/L CaCl2，5 mmol/L MES，pH值5.7)，保證植物葉片完全浸入溶液中。在黑暗條件下加入腔腸熒光素(500 μmol/L母液)，測(cè)試濃度為5 mmol/L(100 μL測(cè)鈣溶液中加入1 μL腔腸熒光素)，黑暗處理4 h以上[17]。放入化學(xué)熒光測(cè)試儀(Luminometer，Turner Biosystem，20/20)，每秒一個(gè)點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。首先測(cè)100個(gè)點(diǎn)的背景值，暫停，加入100 μL 200 μg/mL LPS處理液，LPS終濃度達(dá)到100 μg/mL，記錄結(jié)果。

1.2.6 植物保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)NO的檢測(cè) 用鑷子撕取野生型Col-0與突變體atghr1-1、atghr1-2的下表皮，用含 5 μmol/L DAF-FM DA (4-氨基，5-甲基氨基，2′，7′-二氯熒光素二乙酸酯)的對(duì)照緩沖液(1.0 mmol/L CaCl2，2.5 mmol/L MgCl2，pH值7.6)處理30 min。分別用無(wú)菌水或 100 μg/mL LPS處理，產(chǎn)生綠色熒光的保衛(wèi)細(xì)胞用尼康 Eclipse Ti 熒光倒置顯微鏡觀察。為定量DAF-FM DA 熒光，使用 Adobe Photoshop 7.0.1 (Adobe Systems，San Jose，CA，USA) 測(cè)量保衛(wèi)細(xì)胞照片的灰度值。

1.2.7 轉(zhuǎn)錄組分析 將Col-0 和atghr1-2播種于0.4% 凝膠的1/2MS 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)21 d后，用無(wú)菌水或 100 μg/mL LPS淹沒(méi)擬南芥Col-0 或atghr1-2 的幼苗，36 h 后提取葉子的 RNA。送北京博奧晶典生物技術(shù)有限公司做芯片試驗(yàn)，重復(fù)3次試驗(yàn)。轉(zhuǎn)錄組結(jié)果分析后分別從上調(diào)基因和下調(diào)基因中各選5個(gè)基因進(jìn)行定量PCR驗(yàn)證。用于檢測(cè)基因芯片結(jié)果上調(diào)基因和下調(diào)基因定量PCR引物序列見(jiàn)表1。

表1 定量 PCR引物序列Tab.1 Primers used for real time PCR

2 結(jié)果與分析

2.1 AtGHR1啟動(dòng)子的活性檢測(cè)

為了研究AtGHR1基因表達(dá)的組織特異性，筆者構(gòu)建了AtGHR1啟動(dòng)子和編碼β-葡萄糖苷酸酶報(bào)告基因(GUS)的融合DNA片段ProAtGHR1∷GUS，通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花序侵染法，整合到擬南芥基因組中，得到含有ProAtGHR1∷GUS的轉(zhuǎn)基因植物，在GUS底物X-Glu存在的條件下，進(jìn)一步通過(guò)組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)AtGHR1啟動(dòng)子活性主要集中在根尖和葉脈，在葉子保衛(wèi)細(xì)胞中有相對(duì)較弱的活性(圖1)。

2.2 AtGHR1的亞細(xì)胞定位

為了確定AtGHR1基因編碼蛋白在細(xì)胞內(nèi)的位置，構(gòu)建了AtGHR1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的AtGHR1和綠色熒光蛋白(GFP)編碼序列的融合DNA片段ProAtGHR1∷AtGHR1-GFP。進(jìn)一步在煙草葉片內(nèi)瞬時(shí)表達(dá)ProAtGHR1∷AtGHR1-GFP和編碼細(xì)胞質(zhì)膜標(biāo)記蛋白基因35S∷AtPIP2A-mCherry。在不同激發(fā)光照射的條件下，發(fā)現(xiàn)ProAtGHR1∷AtGHR1-GFP的綠色熒光和35S∷AtPIP2A-mCherry紅色熒光完全重合，表明AtGHR1蛋白位于細(xì)胞質(zhì)膜(圖2)。

2.3 AtGHR1參與脂多糖誘導(dǎo)防御反應(yīng)

為了研究AtGHR1基因是否參與植物對(duì)含有LPS病原菌的防御反應(yīng)，用含有和不含有Pst DC3000病原菌的水溶液短暫淹沒(méi)生長(zhǎng)在培養(yǎng)基上的擬南芥野生型Col-0和2個(gè)缺失AtGHR1基因的突變體，atghr1-1以及atghr1-2。不含有Pst DC3000病原菌的水溶液的短暫淹沒(méi)，對(duì)植物生長(zhǎng)沒(méi)有明顯作用(圖3)。但是，含有Pst DC3000病原菌的水溶液的短暫淹沒(méi)引起植物葉子黃化死亡。相對(duì)而言，atghr1突變體葉子黃化死亡程度更重。為了量化植物對(duì)病原菌Pst DC3000的感病程度(圖3)，對(duì)葉子內(nèi)病原菌密度進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，葉片注菌1 d以后，無(wú)論野生型還是突變體葉子內(nèi)菌密度含量都顯著高于0 d，但是野生型和突變體之間沒(méi)有顯著區(qū)別(圖3-B)。葉片注菌2 d以后，野生型還是突變體葉子內(nèi)菌密度含量相對(duì)0，1 d繼續(xù)顯著升高，同時(shí)突變體葉子內(nèi)菌密度顯著高于野生型(圖3)，說(shuō)明atghr1更感病，證明GHR1基因是植物防御Pst DC3000病原菌必需基因。

A.幼苗；B.葉片；C.葉脈；D.保衛(wèi)細(xì)胞；E.根。A.Young seedling;B.Leaf;C.Vein；D.Guard cell；E.Root.

A.綠色通道；B.紅色通道；C.明場(chǎng)；D.綠色通道和紅色通道的合并。 A.Green channel；B.Red channel；C.Light field；D.Co-localization of green and red channel.

A.分別用H2O或含有Pst DC3000病原菌水溶液淹沒(méi)植物3 min，倒掉溶液2 d以后的表型；B.對(duì)經(jīng)過(guò)病原菌侵染植物葉片中病原菌的密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，數(shù)據(jù)標(biāo)記不同字母表示t-檢驗(yàn)，P<0.01。圖4-6同。

A.The seedlings were floated with either H2O or H2O containing Pst DC3000 for 3 minutes，after the solution was discard，the seedling phenotype was displayed two-day later；B.Statistical analysis of the pathogen density,data with different letter indicatesP<0.01 witht-test.The same as Fig.4-6.

圖3擬南芥野生型Col-0和atghr1突變體對(duì)PstDC3000病原菌的反應(yīng)
Fig.3ArabidopsiswildtypeCol-0andatghr1mutantresponsetoPstDC3000

2.4 AtGHR1不參與LPS誘導(dǎo)H2O2和細(xì)胞質(zhì)中Ca2+濃度升高

已有研究表明，H2O2和細(xì)胞質(zhì)Ca參與了植物對(duì)LPS的感應(yīng)過(guò)程。為了探索AtGHR1基因是否介導(dǎo)LPS對(duì)植物細(xì)胞H2O2和細(xì)胞質(zhì)Ca的調(diào)節(jié)作用，首先將野生型Col-0 與突變體atghr1-1、atghr1-2播種在含1%蔗糖的1/2MS基本培養(yǎng)基上，21 d后分別取1片葉片，利用化學(xué)發(fā)光法對(duì)H2O2含量進(jìn)行測(cè)量。圖4結(jié)果表明，LPS處理誘導(dǎo)的H2O2含量，在野生型Col-0 與突變體atghr1-1、atghr1-2葉片之間沒(méi)有顯著區(qū)別，說(shuō)明AtGHR1不參與LPS誘導(dǎo)H2O2的產(chǎn)生。

為了檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)Ca2+濃度，將編碼水母發(fā)光蛋白aequorin的基因?qū)霐M南芥野生型和atglr1-2突變體中，形成Col-0∷aequorin和atglr1-2∷aequorin轉(zhuǎn)基因植物。水母發(fā)光蛋白在底物腔腸熒光素存在的情況下，和Ca2+結(jié)合以后發(fā)出470 nm的熒光，熒光強(qiáng)度和Ca2+濃度呈正相關(guān)，從而可以通過(guò)檢測(cè)水母發(fā)光蛋白的熒光強(qiáng)度間接檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)的Ca2+濃度。圖5檢測(cè)結(jié)果表明，LPS處理導(dǎo)致植株Col-0∷aequorin和atglr1-2∷aequorin細(xì)胞質(zhì)中Ca2+濃度顯著升高，但是在Col-0∷aequorin和atglr1-2∷aequorin之間沒(méi)有顯著區(qū)別，說(shuō)明AtGHR1不參與LPS誘導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)Ca2+升高的過(guò)程。

圖4 LPS誘導(dǎo)野生型Col-0 與突變體ghr1葉片產(chǎn)生的H2O2Fig.4 LPS induced H2O2 production in leaf of Arabidopsis Col-0 and mutant ghr1

圖5 LPS處理 Col-0∷aequorin(Col-0∷AEQ)和atglr1-2∷aequorin(atghr1-2∷AEQ)葉子的鈣信號(hào)值Fig.5 The LPS induced[Ca2+]cyt rise in Col-0∷aequorin(Col-0∷AEQ) and atghr1-2∷aequorin (atghr1-2∷AEQ)

2.5 AtGHR1參與LPS誘導(dǎo)NO的產(chǎn)生

已有研究表明，LPS可以誘導(dǎo)擬南芥保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生。利用NO特異的熒光探針DAF-FM 對(duì)擬南芥野生型和atghr1突變體保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)的NO進(jìn)行檢測(cè)。相對(duì)于H2O處理，在LPS處理?xiàng)l件下，擬南芥野生型Col-0保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生大量綠色熒光。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在LPS處理?xiàng)l件下，變體atghr1-1和atghr1-2保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的NO顯著低于野生型擬南芥Col-0，說(shuō)明AtGHR1參與LPS誘導(dǎo)保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生(圖6)。

A.LPS處理以后，擬南芥野生型Col-0和突變體atghr1-2保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)NO熒光圖；B.NO熒光強(qiáng)度的相對(duì)定量。A.The NO fluorescent image in the guard cells of Arabidopsis Col-0 and mutant atghr1-2；B.Relative quantitation of the NO fluorescent density.

圖7 LPS處理野生型Col-0與突變體atghr1-2芯片轉(zhuǎn)率組分析上調(diào)與下調(diào)基因數(shù)目結(jié)果Fig.7 LPS-induced transcriptional response in Col-0 and atglr1-2 of up-regulated gene and down-regulated genenumbers

2.6 AtGHR1參與LPS誘導(dǎo)的擬南芥基因轉(zhuǎn)錄應(yīng)答

用H2O 和 100 μg/mL LPS處理生長(zhǎng)在培養(yǎng)皿中的擬南芥Col-0 和 突變體atghr1-2幼苗，36 h 后提取葉子的 RNA，送公司做基于芯片的轉(zhuǎn)錄組分析試驗(yàn)。圖7結(jié)果表明，用LPS處理Col-0導(dǎo)致547個(gè)基因上調(diào)，701個(gè)基因下調(diào)。其中由AtGHR1介導(dǎo)的上調(diào)基因145個(gè)，下調(diào)基因211個(gè)。從上調(diào)基因和下調(diào)基因中各選5個(gè)基因進(jìn)行定量PCR驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)定量PCR結(jié)果與芯片結(jié)果在變化趨勢(shì)上相符(圖8)。

圖8 LPS調(diào)節(jié)擬南芥野生型和突變體atghr1-2基因表達(dá)的定量PCR分析

3 結(jié)論與討論

在動(dòng)物細(xì)胞中，位于細(xì)胞質(zhì)膜的TLR4蛋白可以識(shí)別細(xì)菌性病原菌上的LPS，而位于細(xì)胞質(zhì)膜的TLR5蛋白可以識(shí)別細(xì)菌性病原菌上的鞭毛蛋白[18]。在擬南芥中，識(shí)別細(xì)菌編碼蛋白的受體是FLS2，其氨基酸序列同動(dòng)物細(xì)胞的TLR5相似[19]。本研究利用動(dòng)物細(xì)胞識(shí)別LPS的TLR4蛋白的氨基酸序列，搜索擬南芥基因組，鑒定到AtGHR1和TLR4的序列最相似。進(jìn)一步通過(guò)基因缺失突變體和細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)證明，擬南芥AtGHR1參與植物對(duì)細(xì)菌性病原菌的感應(yīng)。

以前的研究發(fā)現(xiàn)，AtGHR1在ABA誘導(dǎo)氣孔關(guān)閉信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中位于H2O2的下游[20]。與此一致，本研究發(fā)現(xiàn)，AtGHR1不參與LPS對(duì)植物H2O2和細(xì)胞質(zhì)Ca2+的調(diào)節(jié)作用。但是，缺失AtGHR1基因的突變體部分喪失LPS對(duì)NO的誘導(dǎo)作用，這一方面說(shuō)明，LPS調(diào)節(jié)NO合成存在不依賴(lài)AtGHR1的途徑，另一方面說(shuō)明，細(xì)菌LPS對(duì)植物細(xì)胞H2O2、Ca2+和NO信號(hào)分子的調(diào)節(jié)機(jī)理是完全不同的。以前的研究發(fā)現(xiàn)，在擬南芥保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)AtGHR1參與H2O2激發(fā)SLAC1陽(yáng)離子通道和細(xì)胞外Ca2+跨膜內(nèi)流[20]。在本研究中，筆者以擬南芥整個(gè)葉子為材料發(fā)現(xiàn)AtGHR1不參與LPS對(duì)細(xì)胞質(zhì)Ca2+的調(diào)節(jié)，這個(gè)區(qū)別可能是因?yàn)檠芯康木唧w細(xì)胞和具體的處理不同而導(dǎo)致。

AtGHR1基因的缺失并沒(méi)有完全阻斷LPS對(duì)保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)NO濃度和葉子基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用，這說(shuō)明LPS在植物葉子中的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑不完全依賴(lài)AtGHR1。在動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑依賴(lài)TLR4受體復(fù)合體，包括CD14和MD2蛋白[15]。筆者利用動(dòng)物細(xì)胞CD14蛋白氨基酸序列搜索擬南芥基因組，發(fā)現(xiàn)CD14同擬南芥At4g22130高度同源，這個(gè)基因編碼蛋白為Strubbelig-receptor family 8，但是這個(gè)基因的功能還沒(méi)有任何報(bào)道，可能會(huì)和AtGHR1形成復(fù)合體參與對(duì)LPS的感應(yīng)過(guò)程。同時(shí)，筆者在擬南芥基因組中沒(méi)有找到同動(dòng)物MD2蛋白氨基酸序列相似的同源物。這些初步的分析表明，植物細(xì)胞中有可能存在LPS受體復(fù)合體，但是這個(gè)受體復(fù)合體的組成和動(dòng)物細(xì)胞中的TLR4、CD14、MD2復(fù)合體是不同的。

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