小鼠心肌梗死模型建立的簡化方法研究

史建偉

（南京中醫藥大學第一臨床醫學院，江蘇 南京 210000）

心肌梗死動物模型的建立能夠模擬心梗發生，有利于醫療界深入研究心肌梗死，提高心梗防治效果。為探討簡單易行、切實有效的小鼠心肌梗死模型建立對策，本研究小組開展了實驗研究。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究動物

本次研究動物源自某實驗動物中心養殖的昆明雄性小鼠，入選小鼠鼠齡11～12周，體重25～30 g，共選入35只。

1.2 器械和用品

本次研究所用醫療器械包括小動物呼吸機、心電圖機；工具有眼科專用剪、鑷，刀片、直/彎鉗、大頭針、縫合針、留置針、持針器及經皮冠狀動脈球囊成形術導絲；醫療用品包括消毒碘酒/酒精，2%戊巴比妥鈉溶液、醫用膠帶、動物手術臺等。

1.3 方法

①術前監護。以50 mg/kg的標準，經腹腔為小鼠注射2%戊巴比妥鈉溶液實施誘導麻醉，用藥后5～7 min后，實施夾趾反射試驗，若提示陽性結果則可繼續注射麻醉藥，以初始劑量的10%～20%為準；準備就緒后，擺放小鼠體位為右側臥位，將5-0尼龍線系在小鼠前上切牙并連接操作臺邊緣，確保鼠鼻與邊緣保持5～10 mm距離，同時，應用醫用膠帶將小鼠四肢、尾巴等部位進行妥善固定；借助刀片將手術部位毛發剔除，并使用碘酒、酒精進行全面消毒；啟動心電圖機，并妥善連接小鼠肢體與機器，實現導聯監測。②人工氣道建立。從雙前肢上方5 mm與頸部中心線垂直點開始，用剪刀順延向上剪開皮膚，切開大小為10 mm，將皮下組織進行鈍性分離，使氣管充分暴露；運用規格為24號的留置針實施氣管穿刺，嚴格把控入針深度，稍有落空感便應及時拔針，從穿刺孔將導絲插入氣管，并緩慢推送至口腔，打開小鼠口腔并注意觀察導絲進入情況，可利用工具將導絲牽引而出；導絲歸位后，借助導絲牽引，用規格為20號的留置針進行氣管插管，成功后，將導絲撤出，并妥善連接呼吸機，完成人工氣道建立，而后將切開關閉。呼吸機潮氣量應保持1 mL，每分鐘呼吸頻率保持120次。③左前降支結扎。維持小鼠呼吸暢通，探尋小鼠心臟跳動最為明顯（胸骨左側）處，沿此處上方最近肋骨與下一肋骨間隙，將皮膚切開，切口大小為1 mm，而后全面分離并配合右側胸部擠壓手法，充分暴露左心腔及心臟；以介于左心耳與肺動脈圓錐間的左冠狀靜脈為主干，在彎鉗的輔助下將心臟穩固，準備8/0縫線針，從左心耳根部下方2 mm處入針，進針深度以0.5 mm為宜，從心肌表層穿出；觀察小鼠心電圖走勢，待恢復平穩10 min后，實施左前降支結扎；術后，及時復位心臟，以大潮氣量使小鼠雙肺迅速充盈并維持胸腔負壓；使用7-0尼龍線縫合切口，持續應用呼吸機，待小鼠意識清醒后，將氣管插管拔除。④術后管理。術后，監測小鼠體溫變化，采取措施如60瓦燈照射維持其體溫（36℃～37℃），避免其體溫過低引發危險。若術中小鼠體溫下降亦可采用此方法，照射保暖時，燈泡距離小鼠應在25～30 cm之間。另外，觀察小鼠呼吸狀態，若出現呼吸抑制跡象可應用呼吸興奮劑或氧氣吸入法恢復正常呼吸。此外，術后，連續三天為小鼠肌注青霉素，1次/d，每次8萬U。術后十天，將縫線拆除。⑤左心室心肌HE染色。待心電圖等指標資料收集完畢后，殺死小鼠，暴露心臟，將大血管、心房、心臟外結締組織去除后提取心臟標本，實施心肌HE染色處理，并收集染色信息。

1.4 模型成功標準

以I、aVL導聯ST段弓背向上抬高并持續30min以上為小鼠心梗模型建立成功的標志。

2 結 果

2.1 小鼠存活情況

術后一天，33只小鼠存活，1只死于心臟破裂，1只因肺部損傷過重而死；術后兩周，共存活31只。

2.2 心電圖走勢

術后兩周，存活小鼠心電圖ST段恢復至基線水平，I、aVL導聯呈QS波型。

2.3 心肌HE染色結果分析

33只小鼠心肌HE染色后，顯微鏡下可明確看到心肌細胞大量壞死、纖維化。另2只小鼠進行TTC染色，可明確分辨胞漿/核及其組織結構，且均為粉紅色。

3 討 論

冠狀動脈前降支結扎術是心肌梗死動物模型建立較為常用的方法，且國內外諸多學者證實了該術式能夠促使心梗模型成功建立[1]。氣管插管是建立人工氣道的前提，也是冠狀動脈前降支結扎術的重要環節。氣管切開與經口插管是當前國內外氣管插管常用的兩種方法，其中，氣管切開會損傷氣道，呼吸系統并發癥發生風險較大，同時該項操作不可重復進行，在動物模型建立過程中并不推薦使用[2]。

部分國外學者提倡應用經口腔直接插管的方式，但是該項操作需要器械引導，否則極易誤插至食管內。值得一提的是，模型建立所選動物一般體型較小，氣管較細，因此誤插率更高[3]。同時，在反復插管過程中易造成不必要的損傷，引發死亡事件。因此，從某種角度而言，經口腔插管亦非氣管插管理想方案。在本次研究中，我們借助導絲經氣管逆行而上，大大降低了氣管插管對小鼠存活率的負面影響。同時，該項操作可重復操作，方便可行。另外，小鼠具有繁殖快、易于飼養、與人類心臟、血管等基因相關性強等優勢，被廣泛應用于國內外醫療界動物實驗研究中。但是，小鼠血管較細，因此我們在術中合理擺放體位并開胸暴露前降支。同時，在術中、術后應用60瓦燈進行照射保暖，提高了小鼠存活率。本研究結果數據表明，導絲簡化氣管插管聯合開胸式冠狀動脈左前降支結扎術，操作簡便，能夠提高小鼠心肌梗死模型建立成功率，借鑒價值極高。