高效液相色譜法檢測食品中常見非食用色素

□ 韓 晶 吉林省食品檢驗所

食品中的非食用色素可以采用極譜法、薄層層析、液相色譜等多種方法進行檢測，但是目前使用廣泛的是液相色譜法。本次研究中選取了4種食品中非食用色素作為研究目標，采用超聲波提取固相萃取柱凈化，通過高效液相色譜方法進行快速檢測，這種方法操作簡便，而且結果精密度較高，可以運用于市場上一些食品中的非食用色素的快速檢測。

1 實驗方法

1.1 儀器與試劑

本次實驗中，我們采用的高效液相色譜儀為1260TG-16WS，DAD檢測器，安捷倫；KQ-500DE型數控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；實驗中所使用的試劑有甲醇、乙酸銨，均為色譜純；去離子水。酸性紅1號（AR1），橙黃G（OY-G），酸性大紅（AR26），金黃粉（oII）等標準品。色譜柱型號為SymmetryRC，檢測的波長為500 nm，色譜柱的溫度為 40 ℃，流動相A為乙酸銨和四乙基溴化銨溶液，流動相B為甲醇采用梯度洗脫的方法。在 15 min 內由 80∶20 降至98∶2，流速為每分鐘0.3 mL，波長為500 nm。以保留時間結合吸收曲線定性讀取待測物吸收峰面積，利用回歸方程計算，并計算樣品中的色素含量。

1.2 樣品的預處理

稱取定量的樣品置于燒杯中，加入20 mL的提取液（乙醇V∶氨水V∶水V=7∶2∶1），利用超聲波，經過20 min進行提取，過濾之后向濾渣中加入20 mL的提取液，重復幾次，將濾液進行合并之后，濃縮至10 mL，調節pH等于6即可獲得樣品溶液，凈化。固相萃取柱按順序需要采用甲醇，酸化甲醇溶液進行預淋洗，將流速控制在5 mL/min，控制好柱內的液體高度要高于0.5 cm，然后加入樣品溶液之后，保持流速6 mL/min進行柱萃取。按照丙酮與正己烷以1∶1的比例加入5 mL的混合溶液，5 mL丙酮溶液和3 mL的甲醇溶液按順序進行萃取柱的洗滌，萃取柱之后用 5 mL的洗脫液（甲醇 500 mL 與NaOH 以及氨水各 1 mol/L 50 mL 配制兩種洗脫液）洗脫后，收集淋洗液，濃縮加水定容到2 mL，過濾后待測。

2 結果分析

2.1 色譜柱的選擇

在通過對比兩款不同長度的色譜柱對于非食品色素分離的影響中，發現兩種色譜柱都能實現分析物的分離，但是相比起來100 mm的色譜柱分析時間較長，因此選擇50 mm作為最終的色譜分析柱。

2.2 流速的選擇

在本次實驗中，分別設置流速為0.2、0.3、0.5、0.6 mL/min，并觀察不同的流速對色素分離的影響，結果發現在流速為0.2 mL/min時分析時間較長，同時所分析出來的峰值效果較差，流速超過0.5 mL/min時不能達到完全分離的狀態，因此將流速定為0.3 mL/min。出峰順序為酸性紅1號，酸性大紅，橙黃G，金黃粉。

2.3 樣品溶液的pH優化

在本次實驗中，我們針對一些含有非食用色素的食品進行分析，這些色素都含有磺酸基。我們發現溶液的pH是與其帶電情況相關的，為了能夠獲得較好的回收率，我們對溶液的pH值進行優化，通過實驗發現當溶液的pH為5～7時具有較好的回收率，因此將樣品的pH調至5～7進行實驗。

2.4 洗脫溶劑和洗脫體積的優化

在實驗中選擇了兩種洗脫溶劑，分別比較這兩種溶劑的洗脫效果。通過實驗發現利用氫氧化鈉-甲醇溶液和氨水-甲醇溶液這兩種洗脫溶劑時，前者能夠獲得較高的回收率，當洗脫體積為5 mL時，該條件下可以將色素完全洗脫，因此可以采用氫氧化鈉-甲醇溶液作為洗脫溶劑。

2.5 方法驗證

將4種色素按照不同的梯度濃度，分別為0.1、0.5、1、5、10、100 μg/mL進樣，通過色譜峰的面積對濃度作圖，獲得曲線圖，r＞0.999。方法檢出限以3倍信噪比進行計算，低于81 ng/mL。回收率RSD在0.6%～5%之間，達87%以上。用市場上購買到的梅干樣品做檢測，但是經過實驗分析發現上述樣品不含非食用色素，但檢測出胭脂紅和日落黃這兩種食用色素。

3 結語

利用高效液相色譜法能夠在短時間內實現對食品中非食用色素的定性和定量分析，這種方法靈敏度較高，而且結果準確可靠，能夠廣泛用于日常食品樣品中的色素檢測。