七重PCR檢測技術在羊肉產品中若干動物源性成分檢測中的應用

□ 孫 虹 沈陽食品檢驗所

羊肉作為當前肉類市場中消費較高的產品之一，其本身的脂肪和膽固醇較少，且含有豐富的蛋白質、鈣、鉀、VB1。但是，近年來屢屢出現將其他肉類摻到羊肉產品中進行銷售的情況，這種行為不僅給消費者帶來了損失，同時也對羊肉產業的發展造成了不良影響。面對這樣的情況，必須要建立起快速準確的檢測方法，在不破壞物質的情況下，鑒別種屬類別，七重PCR檢測技術就是一種應用前景較好的檢測技術。

1 試驗材料

本文基于過往研究成上，針對七重PCR檢測技術體系進行全面的研究，形成：豬、牛、山羊、綿羊、雞、馬和牦牛的基因組DNA樣品，并圖嘗試運用這一體系對市面上銷售的羊肉熟制品進行檢驗，以此判斷七重PCR檢測技術的可行性和準確。試驗需要準備七重PCR檢測技術體系的基因組DNA樣品以及10種待檢羊肉熟制品。除了要準備待檢樣品之外，試驗中還需要相應的檢驗試劑和檢驗儀器，其中檢驗試劑包括：組織基因組DNA提取試劑盒、Taq DNA聚合酶、dNTPs、10×PCR 緩 沖 液、100 bp Ladder DNA Marker。而儀器需要準備：3K18型高速冷凍離心機、9700型PCR擴增儀、ND-1000型紫外分光光度計、DYY-8C型高壓電泳儀、UV-1000凝膠成像系統、LS水純化系統等[1]。

2 試驗方法

七重PCR檢測技術是在六重PCR方法基礎上，對方法體系進行進一步的優化而形成的，以基因組DNA樣品為模板，對多重PCR進行擴增，并調整配比，尋找最佳引物濃度和引物配比。PCR反應體系中加入不同比例的混合引物、聚合酶、模板DNA等物質，經過預變性、變形、退火、延伸等PCR的反應程序，最終采用相應的試驗儀器，進行觀察記錄。首先要對待檢羊肉產品的DNA進行制備，然后提取質量檢測。第一步，要對樣品進行處。需要注意的是，不同類型的樣品，取樣方法和取樣過程存在一定的區別，以羊肉串或者羊肉鹵制品為例，首先要讓樣品在10 ℃的蒸餾水中浸時1 h在去除樣品中的雜質在再進行下一步。第二步，取樣處。如果是一整塊的產品，可以從內層、中層、外層等部位進行取樣，如果是小袋包裝或者小塊產品，那么就要從內層取，取樣過程要嚴格按照有關規程進行操作，避免出現取樣污染的情況[2]。第三步要制備DN。根據基因組DNA樣品，按照使用說明進行操作。第四步，對DNA進行質量檢測。在對10種羊肉樣品進行七重PCR檢測后，要使用凝膠成像系統觀察記錄檢測結果，同時為了保證七重PCR檢測技術的可行性和準確性，還要對羊肉產品進行測序驗證。

3 結果分析

根據七重PCR檢測對10種羊肉樣品檢測所得到的結果，可以看出在豬、牛、山羊、綿羊、雞、馬和牦牛的基因組DNA樣品中，牦牛樣品基因組作為引物的特異性較好，而且在對牦牛樣品基因組的靈敏度檢測中也發現，七重PCR檢測對牦對DNA有著較高的檢測靈敏度。本文采用的是萬能引物mcb398和mcb869對10種待檢羊肉產品進了DNA擴增，均得到了472 bp的目的片。由此可知，提取出來的DNA質量較好，可以展開進一步的檢驗工作。根據10種羊肉產品七重PCR產物圖，可以看出在10種不同羊肉產品中，5號、9號、10號有問題，其五5號的目的片段為274 bp與328 bp，因此判斷在這個羊肉產于為牛肉中混有部分綿羊肉，而9號的目的片段為274 bp，因此判斷這個羊肉產品就是牛肉，而10號的目的片段為157、274和328 bp，因此判斷在這個羊肉產品屬于在山羊肉中混有部分牛肉和綿羊肉。為了保證結果的準確性，對每個樣品都進行了多次試驗，得到的結果相同。

4 結語

本文采用了七重PCR檢測技術，建立了較為準確的羊肉產品中若干動物源性成分的定性電量檢測法。通過這種檢測方法可以避免對物質進行破壞，并且完成對生鮮肉的檢測。七重PCR檢測技術的檢測原理是通過提取待檢樣品的DNA，根據提取DNA的質量以及測序驗證情況，判斷羊肉的質量，以及羊肉中是否混有其他動物肉質，通過本文的研究分析發現，七重PCR檢測技術可以有的鑒別羊肉產品中的動物源性成分。