高效液相色譜的應(yīng)用與展望

□ 王 茜 鞍山市食品藥品檢驗(yàn)所

高效液相色譜分析是以高壓下的液體為流動(dòng)相的色譜過(guò)程，即在液相色譜的基礎(chǔ)上采用了高壓輸液泵，高效固定相，高靈敏度的檢測(cè)器和強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。目前，高效液相色譜法已經(jīng)廣泛應(yīng)用到化工、生物、食品安全、醫(yī)學(xué)制藥和臨床、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域，也是分離、分析、純化有機(jī)化合物的有效方法之一。

1 概述

1.1 儀器結(jié)構(gòu)與原理

高效液相色譜儀一般由高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、記檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分組成。

其原理是以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入固定相內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)[1]。

1.2 高效液相色譜分析的分類(lèi)

①固液吸附色譜：固定相是固體吸附劑，按被分離組分的分子與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心的吸附能力的差別而分離。②液液分配色譜：固定相是在惰性載體表面涂敷或鍵合一層固定液薄膜，根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。③鍵合相色譜：正鍵合相色譜分離使用的是極性鍵和固定性，主要靠范德華作用力的定向作用力、誘導(dǎo)作用力或氫鍵作用力；反鍵合相色譜分離是使用的是極性較小的鍵合固定相，其分離機(jī)理可用疏溶劑作用理論來(lái)解釋。④凝膠色譜：凝膠色譜又稱(chēng)分子排阻色譜，它是按照分子尺寸大小順序進(jìn)行分離的一種色譜方法。

2 高效液相色譜法應(yīng)用現(xiàn)狀及優(yōu)缺點(diǎn)

2.1 高效液相色譜法應(yīng)用

劉俊、吉曉佳等[2]對(duì)反相高效液相色譜技術(shù)測(cè)定苯甲酰化多胺的方法進(jìn)行了探討，優(yōu)化了多胺的色譜分析條件，研究和確定了苯甲酰化反應(yīng)的最佳溫度、時(shí)間和影響苯甲酰化多胺穩(wěn)定性的因素。鄭屹、陳賽慧等[3]建立了高效液相色譜法測(cè)定細(xì)胞中腺嘌呤核苷三磷酸、腺苷二磷酸和腺苷酸含量的方法，以比較高糖培養(yǎng)的MRC-5細(xì)胞和D-半乳糖誘導(dǎo)的擬衰老MRC-5細(xì)胞能量代謝水平。結(jié)果表明高效液相色譜法可檢測(cè)出不同狀態(tài)細(xì)胞能量物質(zhì)的差異，可以作為線(xiàn)粒體能量代謝功能的評(píng)估方法之一。祁彥、占春瑞等[4]將大豆樣品經(jīng)乙腈提取，用凝膠滲透色譜和中性氧化鋁SPE柱凈化，然后采用反相高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)法測(cè)定，建立了同時(shí)檢測(cè)大豆中13種三嗪類(lèi)除草劑多殘留量的方法，可同時(shí)滿(mǎn)足進(jìn)、出口大豆中多種除草劑殘留量的檢驗(yàn)工作需要。吳敏[5]等用高效液相色譜儀紫外檢測(cè)器，配用 Zorbax 80A Extend-C8 色譜柱，可同時(shí)測(cè)定食品中對(duì)位紅和蘇丹紅等8種脂溶性染料。

2.2 高效液相色譜法的優(yōu)缺點(diǎn)

液相色譜法的優(yōu)點(diǎn)是適用性廣，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差的化合物；應(yīng)用范圍廣，約占80%的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析；分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多；分離效能高、靈敏度高，可選擇多種新型固定相以達(dá)到最佳分離效果。

高效液相色譜的缺點(diǎn)是在進(jìn)樣器、柱接頭、連接管和檢測(cè)池等中，存在“柱外效應(yīng)”，色譜峰加寬，柱效率降低；分析生物大分子和無(wú)機(jī)離子困難；流動(dòng)相消耗大且有毒性的較多；分析成本及日常維護(hù)費(fèi)貴較高。

3 發(fā)展前景

色譜柱顆粒度將不斷降低，色譜分離效率將不斷加快，這不僅要求液相色譜儀配備高速采樣速度的靈敏檢測(cè)器，還要求檢測(cè)器能綜合聯(lián)用的分析儀器，做出綜合判斷和數(shù)據(jù)管理。此外，從石油化工、環(huán)境監(jiān)測(cè)、海關(guān)、食品檢測(cè)到生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，將配備標(biāo)準(zhǔn)分析、放大配套的專(zhuān)用分析系統(tǒng)，數(shù)據(jù)分析的針對(duì)性更高。相信高效液相色譜分析法不僅對(duì)現(xiàn)在具有非凡的意義，在不久的將來(lái)在更多的領(lǐng)域會(huì)發(fā)揮出更大的作用。