飼料添加劑葉黃素的測定

□ 田 蕓 杜明花 殷東東 山東天音生物科技有限公司

葉黃素又被稱為植物黃體素，是一種經溶劑萃取等工藝制得的黃色至暗黃色的浸膏，目前尚未有人工合成單一異構體的葉黃素成功的報告，大多數葉黃素均是從萬壽菊花朵等天然植物中提取獲得，因此，其具有良好的抗氧化作用，然后將其作為飼料著色劑和添加劑添加到蛋雞、肉雞、鴨、魚飼料中，不僅能使蛋心變紅、動物皮膚脂肪變黃，還能提升商品肉蛋品質和促進其營養含量增加[1]。本文主要是采用紫外分光光度法對飼料添加劑中的葉黃素含量進行測定，現報告如下。

1 實驗材料及方法

1.1 實驗材料

紫外可見分光光度計、超聲波清洗器、、石英比色皿（1 cm）。

葉黃素浸膏、甲醇、正己烷、無水乙醇、甲苯、丙酮、萃取劑HEAT（無水乙醇+甲苯+丙酮+正己烷=6∶7∶7 ∶10）、10%硫酸鈉水溶液（取100 g無水硫酸鈉，加純凈水溶解，再移入100 mL容量瓶中）、40%氫氧化鉀-甲醇溶液（取40 g純氫氧化鉀，加入20 mL純凈水迅速攪拌溶解，再加入50 mL甲醇，攪拌至澄清，再移入100 mL容量瓶中）。

1.2 方法

將樣品用56 ℃的水浴加熱，保持樣品全部溶解，混合均勻樣品準確稱取約0.03 g（準確到0.1 mg）于100 mL容量瓶中。移取30 mL萃取劑HEAT入容量瓶中。塞上塞子，平搖1 min，超聲溶解。然后，在容量瓶中加入40%氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL加蓋搖勻，置入（56±1）℃水浴上加熱皂化，取出容量瓶置于冷水中冷卻，待液溫與室溫相同時，將30 mL正己烷溶劑加入到容量瓶中輕搖1 min，然后加入10%硫酸鈉水溶液定容猛烈振搖2 min，完成上述操作后，將容量瓶存儲在避光處1 h，進行色層分離，上層液體積為50 mL（在整個色層分離期間，刻度線會下降，這是正常的，不必調整）。靜置完畢后，用移液管吸取1 mL上層清液至50 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻、待測。采用紫外可見分光光度計進行測定。在波長（445±1）nm、（474±1）nm處，葉黃素有最大吸收峰，取（474±1）nm測定吸光度，并根據此處波長對葉黃素的吸收度和含量進行測定。

葉黃素含量X=A474×K/（M×236）

其中，X表示試樣中葉黃素含量的質量分數（g/kg），A474表示吸光度，K表示樣品稀釋倍數，M表示樣品質量（g）。為保證測定結果的準確性，稱取5份試樣制備試樣溶液，再計算。另外，再按照上述方法，取測定準確度試驗的溶液連續測定6次，測定葉黃素含量精密度。

2 結果

通過測定5份試樣的葉黃素含量，測得葉黃素含量的質量分數分別為 154.7、152.7、153.1、151.5、154.9、150.6、150.1、148.1、154.4 g/kg和152.1 g/kg，平均值為152.2 g/kg，RSD為1.4%；通過測定6份準確度試驗的溶液，測得葉黃素精密度含量分別為152.7、153.7、153.4、152.7、152.4 g/kg和152.7 g/kg，平均值為152.9 g/kg，RSD為0.3%。

3 討論

葉黃素別名萬壽菊花素及植物葉黃素、核黃體、類胡蘿卜素等，是一種不溶于水，溶于己烷等有機溶劑的橙黃色粉末或漿狀浸膏，分子式為C40H56O2，相對分子量568.85。葉黃素本身屬于抗氧化物，對人體和動物均有一定的益處，如改善老年人群的眼視網膜、消化系統功能，改善動物皮膚脂肪外形和肉蛋品質等，其中，葉黃素作為飼料添加劑的應用最為廣泛[2]。然而，仍有不少飼養人員采用工業色素（一般為黃色化學合成染料）代替葉黃素添加到飼料中，從而易對人體產生一定的危害，為此，為保證食品安全，就需采取有效的方法對葉黃素的含量進行測定。

本次研究通過采用紫外可見分光光度計對飼料添加劑葉黃素含量進行測定，結果發現，5個葉黃素樣品含量平均值為152.2 g/kg，平行測定同一樣品平均值為152.9 g/kg，這些測定結果與國家規定的飼料添加劑葉黃素標示含量150 g/kg均較為接近，說明該樣品的準確度和精密度均良好。另外，準確度及精密度試驗測定結果RSD也均在國家規定的范圍內。

綜上所述，紫外可見分光光度計在測定飼料添加劑中葉黃素含量的準確性良好，能有效確保最終產品質量合格。