藏雞致病沙門菌耐藥性分析及質粒基因檢測探析

蔣衛國

（湖南省常德市澧縣動物衛生監督所415500）

1 試驗材料與方法

1.1 菌株與藥敏紙片

本次試驗中所使用的菌株源于西藏山南市隆子縣隆子鎮新巴村，從中選取14株致病性沙門菌。由西藏山南試驗室提供大腸桿菌。本次試驗的主要應用試劑為MH瓊脂培養基、LB及MH肉湯培養基等。主要應用到的藥敏紙片為頭孢唑啉、CFP、鏈霉素、AMK、多西環素、SPT等。

1.2 藥物敏感性試驗

本次試驗主要采用瓊脂紙片擴散方式對藏雞致病性沙門菌進行藥物敏感性試驗，將大腸桿菌作為質控菌株。在引物設計與合成方面，根據相關文獻資料中記載，采用相應設計方式，將沙門菌耐藥基因引物擴展到20種，并且由西藏山南桑日縣實驗中心負責合成。

1.3 PCR擴增分析

將PCR擴增產物與10g/L的瓊脂糖融合之后，通過凝膠成像儀對其進行觀察，確定其為耐藥基因陽性菌株。從試驗樣本中隨機抽取2株，然后將PCR產物的試劑回收后送至相關單位進行檢測，將最終檢測結果與耐藥基因序列進行對比分析。

2 試驗過程

為了對藏雞致病性沙門菌的耐藥性進行分析，主要采用PCR擴增技術對其進行耐藥表型及質粒耐藥基因進行檢測，通過藥敏試驗、質粒基因試驗等方式獲得最終結果。

2.1 藥敏試驗

將14株藏雞致病性沙門菌與抗菌藥物進行試驗，分離株對85.71%含量的氨芐西林耐藥性最強，然后是78.57%的阿莫西林，71.43%的復方新諾明、42.86%的四環素等。全部菌株對于頭孢唑啉、丁胺卡那敏感，在13株分離菌當中，對3類以上藥物耐藥的情況稱之為是多重耐藥，在本次試驗中發現，其比例為92.86%。

2.2 質粒耐藥基因試驗

將14株藏雞致病性沙門菌進行質粒耐藥基因試驗，從分離株中檢測出其具有 blaXOA、blaDHA、blaCMY-2等11種質粒耐藥基因，并沒有檢測出blaACC、blaFOX、blaSHV等質粒耐藥基因。將acc(6')-Ib-cr與blaTEM與產物進行測定后，檢測結果顯示，其擴增序列與耐藥物基因序列相對比，在同源性方面達到99%。

3 試驗結果

在耐藥表型與質粒耐藥基因之間的相關性方面，將14株藏雞致病性沙門菌耐藥表型與基因進行試驗，在所有分離株當中，除了其中1株沒有表現出耐藥表型，并且具有acc(6')-Ib-cr外，其他13株有4～8株具有多重耐藥性，且有超過兩種質粒耐藥基因。近年來，藏雞中沙門菌的耐藥性問題成為相關行業中關注的重點話題，對養殖場構成嚴重威脅，造成較大的經濟損失。通過上述試驗研究得出，阿莫西林、四環素、多西環素等藥物具有較強耐藥性。其中，阿莫西林耐藥率為78.15%，中介率為14.29%，敏感率為7.14%；四環素的耐藥率為64.29%，中介率為21.43%，敏感率為14.29%；多西環素耐藥率為42.86%，中介率為28.57%，敏感率為28.57%；頭孢哌酮的耐藥率為0，中介率為7.41%，敏感率為92.86%；雖然頭孢哌酮不具備耐藥性，但其中介率較高，這將意味著在藥物壓力下，分離菌將會向耐藥菌發生轉變，進而致使耐藥率上升。另外，大部分菌株都具備多重耐藥性，對超過3類抗菌藥物呈現出耐藥反應，這也充分說明試驗中養雞場的致病性沙門菌多重耐藥現象較為嚴重。當同一質粒對ESBLs及AmpC酶進行介導時，將被稱為是超廣譜β內酰胺酶，此類細菌將對所有類型抗生素藥物具有耐藥作用。在本次試驗當中，有64.57%的菌株中被檢測出攜帶有上述兩種基因，據此可以推測出，這兩種基因很可能存在于同一種質粒中，并且能共同參與到內酰胺酶的耐藥機制中。

4 結束語

綜上所述，藏雞致病性沙門菌問題將對養殖場運營產生重大影響，因此，對此方面展開試驗調查顯得十分必要。在本次試驗中共得到57.25%的質粒耐藥基因，通過試驗檢測后能得出，當陽性基因接合之后，大多數得到供體菌的相應抗性表型，這將意味著對上述藥物進行介導的耐藥基因可能與質粒處于不同的細菌中，并且將以較高的頻率發生水平轉移。