我院婦科門診就診女性HPV亞型分布情況

馬艷云 王春霞

（甘肅省蘭州市第一人民醫院檢驗科 甘肅 蘭州 730050）

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤，病因明確，持續感染高危型人乳頭瘤病毒（HR -HPV）是其主要致病因素[1]，可以通過預防性HPV疫苗進行預防，但高危型HPV亞型多且分布具有明顯的地域性差異[2-3]，甘肅省地處西北偏遠地區，經濟水平落后，衛生資源匱乏，是宮頸癌的高發地區。而目前的HPV疫苗只覆蓋HPV-16和HPV-18兩種高危亞型，防御能力有限。本研究旨在對甘肅地區HPV感染做出客觀的評估，為甘肅地區HPV疫苗的研發和其他相關研究提供基礎數據。

1.材料與方法

1.1 一般資料

樣本源自2014年9月—2017年3月于我院婦科就診的宮頸HPV感染篩查患者。

1.2 儀器和試劑

試劑盒：《人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向點雜交法）》（廣州安必平醫藥科技股份有限公司），可檢測28種HPV亞型，是目前分型較多的一款試劑，它可以檢測出15種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82型，3種中危型：26、53和66型，10種低危型：6、11、40、42、43、44、54、61、81、和83型；實時熒光PCR儀Rotor-Gene Q（德國QIAGEN）；核酸分子雜交水浴搖床（上海精宏）；生物安全柜Hfsafe-1200B2（上海力申）；臺式冷凍高速離心機H1850R(長沙湘儀)；移液器（德國eppendorf）。

1.3 方法

1.3.1 標本采集 用陰道張開器暴露宮頸，棉拭子拭去宮頸口分泌物，將宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉5周，取得足夠的移行區上皮細胞，取出宮頸刷置于放入2ml生理鹽水的無菌小試管中，立即送檢驗科檢測，不能立即檢測者于-20℃保存，一周內檢測。

1.3.2 PCR擴增 將樣本提取DNA并行PCR擴增，擴增條件為：50℃3分鐘，95℃預變性15分鐘，然后按94℃40秒→55℃40秒→72℃40秒擴增40個循環，最后72℃延伸7分鐘。

1.3.3 雜交染色，分析結果。

2.結果

被檢患者例數1584，其中陽性367例，陽性率23.17%（367/1584）；單一感染281例，占總感染例數的76.57%，多重感染86例，占感染例數的23.43%（見表1）；單一感染中高危型198例，占70.46%(198/281)，主要以HPV-16、52和58為主，中危型16例，占5.69%(16/281)，26型未檢出；低危型67例，占18.26%（67/281）(見表2、表3)；HPV-73和-83（MM7）型未檢出。多重感染中以雙重感染居多，占70.93%（61/86），雙重感染中最多見的型別組合為16+52型，占9.83%（6/61）；86例多重感染中出現頻次最多的亞型為52（25次）、16型（15次）和58（13次）。

3.討論

甘肅地處偏遠地區，經濟水平落后，衛生條件差，衛生資源匱乏，宮頸癌篩查工作起步晚于發達地區，人們對HPV與宮頸癌的相關性認知程度不高，宮頸癌患病率居高不下。上世紀70年代和90年代腫瘤流行病學調查顯示，甘肅省武都區等地的宮頸癌死亡率在全國處于較高水平；2010年—2013年，甘肅隴南市作為全國重大公共衛生服務項目農村婦女宮頸癌篩查項目試點，有9萬名35～59歲農村婦女免費接受宮頸癌篩查，共檢出宮頸癌147例，患病率為163/10萬；而肅州區7402名35～59歲城鎮婦女中，篩查出5例宮頸癌，患病率為67.5/10萬,省內各地宮頸癌患病率有差異,城鎮低于農村，但均高于全國平均水平14.9/10萬。不足之處是這些大規模篩查工作采用巴氏涂片細胞學檢測方法，并未行HPV檢測，不能為HPV疫苗的研發提供數據支持。

HPV28種分型是目前國內市場較全面的HPV分型模式，本文旨在統計分析用該分型模式檢測的我院就診女性HPV感染情況及各亞型的分布情況，為宮頸癌的防治提供基礎數據。

表1 各感染類型構成比

表2 單一感染病例不同亞型分組的構成比

表3 單一感染高危型HPV各亞型感染例數及比值

[1]zur Hausen H.Papillomaviruses and cancer: from basic study to clinical application [J].Nature Reviews Cancer.2002.

[2]Guan P,Howell-Jones R,Li N,Bruni L,de Sanjosé S,Franceschi S,Clifford GM. Human papillomavirus types in 115,789 HPV-positive women:a meta-analysis from cervical infection to cancer [J]. Int J Cancer. 2012 Nov 15；131(10):2349-59.

[3]Li N,Franceschi S, Howell-Jones R, Snijders PJ,Clifford GM. Human papillomavirus type distribution in 30,848 invasive cervical cancers worldwide:Variation by geographical region, histological type and year of publication [J].Int J Cancer. 2011 Feb 15；128(4):927-35.