馬藍(lán)離體無菌系構(gòu)建影響因子的探索

劉富

摘 要：本試驗(yàn)采用組織培養(yǎng)的方法，對馬藍(lán)愈傷組織誘導(dǎo)進(jìn)行探索、研究，并利用正交設(shè)計(jì)對馬藍(lán)愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方進(jìn)行篩選，建立了馬藍(lán)離體無菌系。本試驗(yàn)為提高馬藍(lán)的生產(chǎn)效率、降低生產(chǎn)成本提供技術(shù)支持，并為今后馬藍(lán)組培快繁技術(shù)的研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞：馬藍(lán)；組織培養(yǎng)；正交設(shè)計(jì)；愈傷組織誘導(dǎo)率

中圖分類號：S567.23 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233028

引言

馬藍(lán)為爵床科，屬多年生草本植物，又名板藍(lán)根、南板藍(lán)、藍(lán)靛、大青葉。南板藍(lán)根具有清熱解毒、涼血的功效，具有良好的藥用價(jià)值。近幾年南板藍(lán)根野生資源出現(xiàn)枯缺，原料供不應(yīng)求，價(jià)格上漲。因此開發(fā)南板藍(lán)根野生資源，進(jìn)行人工栽培，產(chǎn)業(yè)化種植，具有很好的發(fā)展前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

外植體采集于紅河州建水縣關(guān)廳鄉(xiāng)，并栽種于紅河學(xué)院溫室。本試驗(yàn)接種的外植體為馬藍(lán)的葉片、幼嫩莖段、成熟莖段，下午14：00進(jìn)行取材。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒與無菌接種

取外植體葉片、幼嫩莖段、成熟莖段，用自來水沖洗30min，接著用洗滌劑浸洗，并用自來水流沖洗干凈，將葉片剪成2～3cm2，莖段剪成3～5cm；之后于超菌臺上用70%乙醇消毒10～30s，用0.1%HgCl2處理7～10min，再用無菌水沖洗5～8次，用無菌濾紙吸干水分后，把葉片切成0.5cm2、莖段切成1cm左右大小，無菌接種于不同培養(yǎng)基上。每瓶接種3個外植體，所有試驗(yàn)處理均進(jìn)行3次重復(fù)，每次重復(fù)10瓶。試驗(yàn)培養(yǎng)基均附加蔗糖3.0%，瓊脂0.8%，pH為5.8。

1.2.2 培養(yǎng)基配方篩選

選擇長勢好、顏色深綠的馬藍(lán)葉片為外植體，利用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選用L16（45）正交設(shè)計(jì)表安排馬藍(lán)愈傷組織誘導(dǎo)的試驗(yàn)方案。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同取材部位對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

以MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1為基本培養(yǎng)基，3種外植體葉片、幼嫩莖段、成熟莖段在同等處理、培養(yǎng)條件下進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，3種外植體都可以在MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.5mg·L-1培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出愈傷組織，葉片誘導(dǎo)效果最佳，且誘導(dǎo)時(shí)間最短，接種8d便長出愈傷組織，此時(shí)誘導(dǎo)率為26.7%，20d后誘導(dǎo)率趨于穩(wěn)定，為86.7%，是較理想的組培外植體。

2.2 培養(yǎng)基配方篩選

進(jìn)行馬藍(lán)愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基配方篩選，利用正交設(shè)計(jì)方法，以6-BA、2，4-D、NAA、IBA 4個激素因素的不同配比作處理，正交設(shè)計(jì)的試驗(yàn)方案與試驗(yàn)結(jié)果見表1。

3 結(jié)語

馬藍(lán)的葉片更有利于愈傷組織誘導(dǎo)，是較理想的組織培養(yǎng)外植體。馬藍(lán)葉片愈傷組織誘導(dǎo)較理想的培養(yǎng)基配方為MS+6-BA1.5mg·L-1+2，4-D0.5mg·L-1+IBA0.1mg·L-1

+NAA1.0 mg·L-1+蔗糖3.0%+瓊脂0.8%。endprint