黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的合理應用及篩選

黃建華　何志剛　胡滸

摘 要：本文對黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的合理應用及篩選的研究，從芽孢桿菌概況入手，分析黃顙魚腸道中對病原拮抗性芽孢桿菌的篩選，然后闡述病原拮抗性芽孢桿菌在水產中應用，為水產品的生產安全與魚類的健康養殖提供一定的幫助，對益生菌在黃顙魚配合飼料中合理應用具有重要的現實意義。

關鍵詞：黃顙魚；病原拮抗性芽孢桿菌；抗菌性；合理應用；篩選

中圖分類號：S943 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20171233116

近幾年，隨著經濟的快速發展，漁民為了追求更多的利潤，而長期濫用藥物，這不但使耐藥性細菌增加而影響水產業食品安全，還威脅了自然環境的安全，甚至是帶來嚴重的社會問題。而黃顙魚作為我國重要的淡水魚類，黃顙魚腸道中病原拮抗性芽孢桿菌可分泌抗菌物質，有效解決了現有生物抗生素耐藥性問題，并且不會污染環境及對人類造成傷害。

1 芽孢桿菌概況

芽孢桿菌屬于菌科，其對外界有害因子抵抗力較強，分布比較廣，存在水、空氣及動物腸道等，具有產酶種類多、生物活性強等性質，其對植物性碳水化合物降解能力突出[1]。芽孢桿菌特征是細胞內產生內生孢子，形狀為圓形、弧形，具有高光學反射性，物理特性穩定，是一種處于休眠狀態的活細胞，特點為耐受高溫高壓、抗性強及不變質等，屬于兼性厭氧菌，存活率比較高，易于進行培養。在制劑中芽孢桿菌以內生孢子形態存在，可耐受飼料加工、儲藏，其飼料用后在腸道環境中穩定極高，而孢子進入腸道后則可以迅速復活。

2 黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的篩選

由于黃顙魚腸道中存在大量的桿菌，而如何將有益的病原拮抗性芽孢桿菌進行利用，就要對其進行篩選，其主要分為指示菌、芽孢桿菌的分離與純化、病原拮抗菌篩選及芽孢桿菌的鑒定，將有益的病原拮抗性芽孢桿菌進行使用，從而促進水產業的可持續發展，以下是具體的內容。

2.1 指示菌

選擇健康的黃顙魚，體重為30～50g，該魚的體表與體內在解剖后，均無出現出血與充血情況，且腸道無明顯的食糜情況。對于腦心浸液（BHI）培養基，采用源于青島高科園海博生物技術有限公司。將草魚的柱狀嗜纖維菌與嗜水氣單胞菌、鰻鱺養殖水體的遲緩愛德華氏菌及羅非魚的溫和氣單胞菌進行分離，保存大腸桿菌在本單位。

2.2 芽孢桿菌的分離與純化

采用無菌方法，將取0.5g黃顙魚腸斷組織，均漿，加無菌生理鹽水4.5mL制成原液，待稀釋10倍后進行使用。將細菌懸液稀釋后放于80℃水浴中，并進行15min的處理。然后在腦心浸液體培養基中進行接種，溫度保持在37℃，增菌進行培養24h。待梯度稀釋后，在 BHI 平板上涂布0.1mL菌液進行培養。隨機對菌落挑取，純化后接種斜面，在培養后進行保存備用（溫度為37℃）。以革蘭氏染色與氧化酶的試驗每株菌，保留陽性芽孢桿菌。

2.3 篩選病原拮抗菌

對于病原拮抗菌的篩選，需要采用牛津杯法，活化24h芽孢桿菌和指示菌。待離心洗滌后調整濃度為 106cfumL。在BHI平板上進行涂布，以吸取0.1mL指示菌菌液為基礎，用無菌鑷子，將滅菌后牛津杯取出，置于其上，待輕壓后，使杯底與培養基緊貼。加入0.2mL芽孢桿菌菌液于每個牛津杯中，將皿置放置30℃恒溫進行培養24h，測量抑菌圈的直徑，包括牛津杯直徑，將此實驗重復進行3次。

2.4 鑒定芽孢桿菌

在培養細菌活化24h后，觀察菌落的形態，然后進行革蘭氏染色，鏡檢芽孢以率和形態形成。采用API50CHB試劑盒（法國生物梅里埃公司）進行鑒定。

3 黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的合理利用

黃顙魚腸道中存在大量的桿菌，而對病原拮抗性芽孢桿菌在水產中應用，主要依靠枯草芽孢桿菌。由于枯草芽孢桿菌成桿狀，在水體或飼料中進行添加，而芽孢桿菌具有很強的蛋白酶、淀粉酶活性及脂肪酶，可抑制或殺滅水體中或生物體內的一些有害致病菌，使有益菌的群落增強，飼料轉化率提高8%以上，促進魚類生長，從而實現防治水產疾病。

4 結語

本文對黃顙魚腸道病原拮抗性芽孢桿菌的合理應用及篩選的研究，了解了芽孢桿菌的特點與功能，對其篩選，其主要分為指示菌、芽孢桿菌的分離與純化、病原拮抗菌篩選及芽孢桿菌的鑒定，對于病原拮抗性芽孢桿菌在水產中合理應用，應根據水產環境與魚類的實際情況，邀請相關的專家，待分析之后，進行芽孢桿菌的應用，這有利于水產品的生產安全與魚類的健康養殖，對在黃顙魚配合飼料中添加益生菌應用具有重要的現實意義。

參考文獻

[1]職愛民，賈國超，鄭春華，等.芽孢桿菌作為微生物飼料添加劑的功能及其應用[J].飼料與畜牧，2014（5）：41-44.endprint