牛血清蛋白在MnHCF修飾電極上的電化學行為及測定

李楠楠　王璐

牛血清白蛋白就是我們常說的BSA，相對分子質量為10的4次方這個級別，它不是一定的，是多聚物，在做PCR的時候會用到它。本文把鐵氰化錳修飾在玻碳電極表面，首次研究了牛血清蛋白在修飾電極表面的電化學行為。

1 實驗部分

1.1 試劑

牛血清蛋白，無水乙醇，氫氧化鈉，氯化鉀等。

1.2 儀器

LK98BⅡ微機電化學分析系統，Al204i型電子天平，PHS—3B型PH計，KQ-400KDE型高功率數控超聲波清洗器，微電腦微波化學反應器LWMC-201 ，二兩裝高速中藥粉碎機，PHS-3B型pH計。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液的配置

0.05moL/L 磷酸緩沖溶液（PBS）由1.0moL/L NaCl+0.01mo/LKCl+0.05moL/L磷酸氫二鈉+0.004moL/L磷酸二氫鉀組成；0.6moL/L鐵氰化錳修飾劑由0.6moL/L鐵氰化鉀和0.6moL/L硫酸錳組成，由PBS緩沖溶液定容；取10mg牛血清蛋白于50mL燒杯中、取NaCl1.46g于50mL燒杯中、取36%～38%的鹽酸9.27mL于50mL燒杯中，分別加少量去離子水稀釋后再分別轉移至100mL、50mL、50mL容量瓶中用去離子水定容至刻度，制成牛血清蛋白、0.5moL/L NaCl、6.0moL/L HCl溶液。

2 結果與討論

2.1 修飾時間的影響

取已配制好的鐵氰化錳修飾劑溶液50mL于小燒杯中，將清洗、晾干好的三電極體系置于燒杯中，在掃描速度為300mv/s的條件下，富集電位（+2v，-2v）的區間內，循環掃描一定時間修飾電極，發現隨著修飾時間的增加電極催化活性變強，修飾達60min后膜催化活性增加不明顯，綜合考慮工作效率等因素，最后確定修飾時間為60min。

2.2 pH值的影響

分別取已配制好的0.5mol/LNaCl溶液7mL和牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L）于9個50mL的小燒杯中，各滴加HCl溶液并用pH計調節溶液pH值分別為0～8。在電位-2.0V～+2.0V內，掃速300mv/s的條件下，分別進行線性伏安掃描。

結果表明，隨著pH值的增大峰電位變化不大，但是峰電流隨著隨著pH值的減小而增大，當pH大于6時，還原峰電流無明顯變化。由于牛血清蛋白氧化峰電流在pH較低時較穩定，且還原峰峰形最好，故選擇在HCl為0.6moL/L（即pH=0）環境下進行測試。綜上所述，測定體系確定為0.07moL/L NaCl-0.6moL/L HCl。

2.3 富集電位的影響

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小燒杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL進行循環伏安掃描，考查了不同的富集電位（+2.0V～-2.0V）對峰電流的影響，數據如表1所示。

結果表明不同的富集電位對峰電流有影響。電位區間在（-2.0v，+2.0v）內的峰電流最大，為最佳富集電位范圍。

2.4 牛血清在鐵氰化錳修飾電極上的電化學行為

取已配制好的6mol/LHCl溶液5mL和0.5mol/LNaCl溶液7mL于50mL的小燒杯中，加入牛血清蛋白溶液4mL（即0.008g/L），在-2.0V～+2.0V內，掃描速度為300mV/s的條件下分別以裸玻碳電極和修飾電極對0.008g/L牛血清蛋白進行循環掃描，結果如圖1所示。

由圖1曲線a可知，在電位窗口+2.0～-2.0V內無明顯還原峰出現，表明牛血清蛋白在裸玻碳電極上不能直接發生還原反應。而在鐵氰化錳修飾電極上牛血清蛋白在+1V～-0.5V處出現了還原峰，反向掃描時沒有觀察到相應的氧化峰（曲線b）。這表明鐵氰化錳對牛血清蛋白的還原反應具有良好的催化作用，但該反應為不可逆過程。

作者單位：1.長治市農產品質量安全檢驗監測中心；

2.西安京誠檢測技術有限公司