RhoE/Rnd3在子宮內膜樣腺癌中的表達及其臨床意義

楊云玲+鄭秀

[摘要] 目的 分析 RhoE/Rnd3在子宮內膜樣腺癌組織中的表達情況，以探討RhoE/Rnd3在子宮內膜樣腺癌發生發展中的作用及及其臨床意義。方法 采用免疫組化PV-9000法檢測2008年1月—2016年12月在福建醫科大學附屬第一醫院收住院診治的患者118例正常子宮內膜、非典型增生子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中RhoE/Rnd3蛋白的表達情況，并分析其表達情況與臨床病理特征的相關性。結果 ①RhoE/Rnd3在正常子宮內膜（陽性率76.0%）、非典型增生子宮內膜（陽性率60.0%）、子宮內膜樣腺癌組織中（陽性率42.6%）的表達陽性率呈逐漸降低趨勢，三者之間陽性率差異有統計學意義（P<0.05）。②在子宮內膜樣腺癌中，RhoE/Rnd3的表達陽性率與年齡、組織學分級及肌層浸潤深度相關，與手術病理分期、淋巴結轉移均未見相關性。結論 RhoE/Rnd3的低表達（陽性率12.5%）與子宮內膜樣腺癌病變的進展和不良預后有關，對這種基因進行監測，有助于判斷子宮內膜樣腺癌的惡性程度及預后，從而為子宮內膜樣腺癌尋找有參考意義的預測指標。

[關鍵詞] 子宮內膜樣腺癌；RhoE/Rnd3；免疫組織化學

[中圖分類號] R737 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）10（c）-0011-04

Expression of RhoE/Rnd3 in Endometrial Adenocarcinoma and Its Clinical Significance

YANG Yun-ling1，2， ZHENG Xiu2

1.Department of Gynaecology and Obstetrics， Fujian Provincial Hospital， South Branch （Fujian Provincial Jinshan Hospital）， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China； 2.Clinical School of Fujian Medical University， Fuzhou， Fujian Province， 350001 China

[Abstract] Objective This paper tries to analyze the expressions of RhoE/Rnd in endometrial adenocarcinoma and clinical significance in the development of endometrial adenocarcinoma. Methods From January 2008 to December 2016， 118 patients were admitted to the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， the expression of RhoE/Rnd3 was detected in normal endometria， endometrial atypical hyperplasias and endometrial adenocarcinoma with the method of imunohistochemistry （PV-9000）. And the relationships between their expression and the clinicopathological features in endometrial adenocarcinoma were analyzed. Results ①The positive expression of RhoE/Rnd3 was reduced gradually in the normal endometrium （positive rate was 76.0%）， the endometrial atypical hyperplasias （positive rate was 60.0%） and endometrial adenocarcinoma （positive rate was 42.6%）. The difference of postive rate between the three was statistically significant（P<0.05）；②The expression of RhoE/Rnd3 in endometrial adenocarcinoma was of great difference compared with that in the normal endometrial and the endometrial atypical hyperplasias. In endometrial adenocarcinoma， the positive expression of RhoE/Rnd3 was significantly assoeiated with age， histological grade and depth of myometrial invasion， but not with surgical stage and lymph node metastasis. Conclusion The low expression of RhoE/Rnd3 （positive rate of 12.5%） may contribute to progression and malignant behavior of endometrial adenocarcinoma cells. Joint detection of the expression of RhoE/Rnd3 can provide a reference for predicting the prognosis of endometrial adenocarcinoma patients.endprint

[Key words] Endometrial adenocarcinoma； RhoE/Rnd3； Immunohistochemistry

子宮內膜癌（Endometrial Carcinoma）是發生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，占女性全身惡性腫瘤7%，占女性生殖道惡性腫瘤20%～30%[1]。其發病率在各地區有差異，在北美和歐洲其發生率高居女性生殖系統癌癥的首位，在美國每年就有40 880例新發病例，其中7 310例死于子宮內膜癌。在我國，隨著社會的發展和經濟條件的改善，子宮內膜癌的發病率目前己接近甚至超過宮頸癌的發病率。但其發病機制仍不明確，該研究主要是對2008年1月—2016年12月期間收治的118例患者中RhoE/Rnd3蛋白表達在子宮內膜樣腺癌發生、發展過程中的作用及其臨床意義進行探論，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便收集在福建醫科大學附屬第一醫院收住院診治的臨床資料和病理資料完整的病例共118例。病理診斷正常子宮內膜（增生期15例，分泌期10例）共25例，平均年齡45.7歲。非典型增生子宮內膜 25例，平均年齡 46.9歲。子宮內膜樣腺癌68例 ，根據FIGO 2009手術-病理分期標準，I期44例，Ⅱ期16例，Ⅲ期8例；組織學分級：高分化24例，中分化31例，低分化13例；肌層浸潤<1/2者49例，肌層浸潤1/2者19例；淋巴結無轉移者65例，有轉移者3例；<50歲者16例，50歲者52例，年齡36～80歲，平均55.1歲。所有研究對象術前均未接受化療、放療和激素治療，除外合并妊娠、子宮內膜異位癥或腺肌病，其它婦科惡性腫瘤，且所有的病理診斷均經病理科專家復核。

1.2 方法及試劑

標本經10%的甲醛固定，石蠟包埋，厚度4m厚度切片，常規 HE染色。所有病例均按照 WHO標準確定病理診斷。免疫組化染色采用 Pv-9000法，兔抗人RHOE/RND3多克隆抗體原液（克隆號bs-6095R）購自北京博奧森生物技術有限公司，PV-9000二步法免疫組化檢測試劑盒、DAB酶底物顯色劑等均購自北京中杉金橋生物公司，以已知蛋白表達陽性的組織作為陽性對照。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3 結果判定標準

RhoE/Rnd3陽性染色為出現淡黃色至棕褐色顆粒，RhoE/Rnd3定位于細胞漿及細胞膜上。結合半定量積分法判斷蛋白表達結果，首先按染色強度打分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。鏡下選擇10個高倍視野，分別計數100個細胞，根據平均陽性細胞的百分率分為5個等級：無陽性細胞為0分，陽性細胞≤10%為1分，10%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。染色強度與平均陽性細胞百分比的乘積>3，定為免疫反應陽性。最后用雙盲法進行資料統計。

1.4 統計方法

應用 SPSS 11.0統計學軟件進行統計學處理。組間陽性率的比較用 χ2檢驗，用[n（%）]表示，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

RhoE/Rnd3蛋白在正常子宮內膜、不典型增生子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中的表達RhoE/Rnd3在正常子宮內膜（包括增生期和分泌期）、不典型增生子宮內膜及子宮內膜樣腺癌組織中的表達陽性率分別為76.0%、60.0%、42.6%，呈逐漸降低趨勢，3者之間陽性率差異有統計學意義（P<0.05）。見圖1～5。RhoE/Rnd3蛋白在子宮內膜樣腺癌中的表達陽性率與年齡、組織學分級及肌層浸潤深度顯著相關。年齡50歲患者RhoE/Rnd3蛋白陽性率（60.2%）明顯高于年齡50歲（25.0%），差異有統計學意義（P=0.002）； 組織學分級G3期患者RhoE/Rnd3蛋白陽性率（15.4%）明顯低于G1期（58.3%）、G2期（41.9%）患者，且RhoE/Rnd3蛋白在子宮內膜樣腺癌中的表達陽性率按組織學分級G1、G2、G3呈依次遞減趨勢，差異有統計學意義（P=0.041）；肌層浸潤深度無或<1/2肌層患者RhoE/Rnd3蛋白陽性率 （53.1%）明顯高于肌層浸潤深度≥1/2肌層（15.8%）患者，差異有統計學意義（P=0.005）。RhoE/Rnd3蛋白表達與手術病理分期、淋巴結轉移均未見相關性（P>0.05），但手術病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白陽性率（12.5%）明顯低于Ⅰ期（52.3%）患者，且在手術病理分期為Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期中的表達呈遞減趨勢。見表1。

3 討論

RhoE是Rho家族比較獨特的一個分子，Rho家族成員與腫瘤的關系是近年來腫瘤研究的熱點。Rho蛋白家族在細胞的信號轉導通路中起著信號轉換器或分子開關的作用，通過對細胞骨架的重組，控制著細胞遷移、浸潤和轉移，還可通過對細胞生長周期的調控與細胞的生長、分化相聯系。RhoE是在1996年被Rosemary Foster等[2]應用p190RhoGAP的cDNA為探針，從HeLa細胞cDNA文庫中克隆了一個編碼245個氨基酸，分子量為27kD的Ras家族蛋白，依照發現的順序將該基因定名為RhoE，又稱為Rnd3。RhoE/Rnd3的生物學功能主要表現在以下幾個方面：①誘導細胞形態改變，增加細胞遷移能力；②抑制細胞的增殖，誘導細胞凋亡；③調節細胞分化；④參與信號傳導；⑤參與細胞周期的調節；⑥與腫瘤細胞的耐藥性有關。

近來多項研究揭示RhoE/Rnd3在多種腫瘤細中表達降低或缺失，如胃癌[3]、結腸癌[4-5]、原發性肝癌[6]、前列腺癌、乳腺癌、膠質母細胞瘤、食管癌等，因此RhoE/Rnd3被認為可能是腫瘤抑制基因之一。朱亞杰等[7]采用免疫組化的方法分析胃癌 74例、結腸癌 32例及相應癌旁組織中RhoE/Rnd3的表達水平，分析結果表明RhoE/Rnd3在胃腸道正常組織中普遍表達， 但在癌組織中低表達或缺失，在癌組織中的染色平均值為（1.99±0.28），在相應癌旁組織中為（8.64±0.39），并隨腫瘤組織分化程度的降低染色強度有下降的趨勢（P<0.005）。從而表明RhoE很可能是抑癌基因。劉印欽等[8]研究結果顯示，RhoE在乳腺癌組織中表達率為46.48%，在癌旁組織中表達率為84.5l%，差異有統計學意義（P<0.01），RhoE表達水平與乳腺癌TNM分期、淋巴結轉移有關（P<0.05），因此 RhoE/Rnd3在肝細胞肝癌發生發展過程中起著負性調控作用，表明RhoE/Rnd3可能在肝細胞肝癌中代表1個腫瘤抑制基因。endprint

該研究結果發現，低分化（陽性率15.4%）、伴有肌層浸潤深度≥1/2肌層（陽性率15.8%）的子宮內膜樣腺癌組織中RhoE/Rnd3蛋白的表達是下調或缺失的，提示子宮內膜樣腺癌細胞通過RhoE/Rnd3的表達下調或缺失，使癌細胞分化異常，從而促進癌細胞的增殖、粘附、侵襲和遷移，近年來，幾項研究對子宮內膜癌預后因素進行多因素分析，手術-病理分期、組織學分級作為最重要的兩個獨立預后影響因素己達成共識[9]。該研究中手術病理分期Ⅲ期患者RhoE/Rnd3蛋白陽性率（12.5%）明顯低于Ⅱ期（陽性率31.3%）、Ⅰ期（陽性率52.3%）。由此可見，RhoE/Rnd3蛋白在子宮內膜樣腺癌中的表達陽性率與年齡、組織學分級及肌層浸潤深度顯著相關。隨著RhoE/Rnd3蛋白含量的減少或缺失，正常細胞向癌細胞轉化速度加快，其預后不良，提示RhoE/Rnd3蛋白低表達或表達缺失是正常子宮內膜向子宮內膜樣腺癌組織轉化的一種趨勢。因此，RhoE/Rnd3可以作為子宮內膜樣腺癌患者預后良好的有用指標。RhoE/Rnd3在多種腫瘤細胞中呈現低表達或缺失，并能夠通過多種途徑來抑制細胞增殖，從而參與調節腫瘤細胞的凋亡，因此被認為可能是腫瘤抑制基因之一。深入了解RhoE/Rnd3、的真正作用，有助于了解子宮內膜樣腺癌的發生發展機制，對于子宮內膜癌的預防、診斷、治療及預后可發揮重大作用。

[參考文獻]

[1] 曹澤毅.中華婦產科學[M].北京：人民衛生出版社，1999：1844.

[2] Foster R，Hu K Q，Lu Y，et a1.Identification of a novel human Rho protein with unusual properties：GTPase deficiency and in vivo famesylation.Mol Cell Biol，1996；16：2689-2699.

[3] Liang Chang，Fengjie Guo，Yudong Wang，et al.MicroRNA-200c regulates the sensitivity of chemotherapy of gastric cancer SGC7901/DDP cells by directly targeting RhoE.[J].Pathology oncology research： POR，2014，20（1）：93-98.

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[8] 劉印欽，馮慶箐，李永林，等.CD147和RhoE在乳腺癌組織中的表達及其生物學意義[J].中華實驗外科雜志，2014，31（2）：411-412.

[9] 吳鳴，沈鏗，郎景和，等.子宮內膜癌206例臨床分析[J].中華婦產科雜志，2002，37（10）：620-621.

（收稿日期：2017-07-23）endprint