甲狀腺球蛋白基因外顯子33單核苷酸多態性與Graves’病停藥后復發的關系

盧洪文 黃靈玉 王雪松 張蓓（通訊作者）

（1青島大學基礎醫學院免疫學系 山東 青島 266071）

（2濰坊市人民醫院內分泌科 山東 濰坊 261041）

GD是臨床常見自身免疫性甲狀腺疾病，促甲狀腺激素受體抗體分泌水平異常增加所致甲狀腺功能亢進是GD發病的最主要因素[1]。臨床常采用ATD、手術、碘131等治療方法，以ATD治療為主，但停藥后復發率較高。近來針對GD的研究集中在基因抗原方面[2-3]，研究顯示甲狀腺球蛋白（Tg）E33SNP與GD的發病密切相關，但較少涉及到Tg基因外顯子多態性與GD停藥后復發之間的關聯性[4]。本研究對108例山東濰坊地區漢族GD患者進行臨床資料回顧分析，探討E33SNP與GD停藥后復發的關系。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年9月—2016年12月期間在濰坊市人民醫院內分泌科就診的GD患者108例為研究對象，均只接受ATD治療18個月以上。根據GD患者停藥后復發時間的不同分組：將停藥后1年內GD復發者設為A組（38例，男性4例，女性34例，年齡20～60歲，平均40.2±10.1歲）；將停藥后1～2年GD復發者為B組（37例，男性7例，女性30例，年齡為19～58歲，平均41.3±11.5歲）；將停藥后2年內GD未復發者為C組（33例，男性6例，女性27例，年齡為21～62歲，平均40.8±12.9歲）；另選擇我院體檢中心健康查體者排除GD共33例作為對照組（男性9例，女性24例，年齡25～60歲，平均40.5±12.3歲）。

各組一般資料對比差異無顯著性（P＞0.05）。

1.2 檢測方法

1.2.1 E33SNP基因型檢測 采集外周血2.0ml（EDTA抗凝），以血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA，以超微量核酸蛋白定量儀檢測其濃度，提取濃度A260/A280介于1.8，2.0范圍，樣本置于-20.0℃冷凍保存備測。利用RT-PCR技術檢測樣本E33SNP多態性并進行基因分型，引物由上海生工公司提供。PCR反應體系：模板1ul，上下游引物各1ul，2X HS TaqE mix 10 ul，20X EvaGreen 1ul，加ddH2O至20ul。PCR反應條件：94.0℃ 5.0min，94.0℃ 10.0s，65.0℃ 30.0s，72.0℃30.0s，循環反應35次，72.0℃ 10.0min。反應完成后以GeneScanning軟件分析處理，產物進行瓊脂糖凝膠電泳回收后外送進行基因測序，根據測序峰譜圖對E33SN基因型進行判斷。

1.2.2 觀察指標 比較各組受檢對象基因型頻率、等位基因頻率以及停藥后緩解期不同基因型GD患者甲狀腺功能指標（TRAb、Tg、TSH、FT3、FT4，免疫化學發光法）進行分析。

表2 不同基因型患者甲狀腺相關功能指標對比

1.2.3 統計學分析 相關數據以統計學軟件SPSS 19.0分析，以（±s）表示計量資料，經t檢驗；以率（%）表示計數資料，經χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

觀察組內A 組CC基因型患者構成比顯著高于B組及C組，CT型患者構成比顯著低于B組以及C組，C等位基因明顯高于C組，T等位基因明顯低于C組；B組CC型患者構成比顯著高于C組。觀察組和對照組的基因型頻率、等位基因頻率差異無顯著性。見表1。

表1 各組基因型頻率、等位基因頻率對比

各觀察組CC基因型患者TRAb水平均顯著高于組內其他基因型。不同基因型患者FT3、FT4、TSH、Tg差異無顯著性。見表2。

3.討論

導致GD復發的因素有多種，除去遺傳因素外，非遺傳因素如應激、年齡、性別、吸煙、病程、甲狀腺疾病家族史、碘鹽的攝取等也對GD復發有重要影響，具體機制比較復雜。大多數的研究針對GD復發的非遺傳性因素，較少涉及到遺傳性因素對GD復發的影響[5-6]。以往研究表明GD的ATD使用需2年以上的長程治療，療程較短緩解率很低。療程達到2年后也應認真評估后再考慮是否停藥，否則復發的可能性大。

E33SNP是近年來Tg基因研究較多的多態性位點，有關報道中針對我國不同地區漢族人群Tg基因多態性與AITD的關系進行了分析，顯示E33SNP與GD的發生具相關性[7-8]，但不同地區、不同種族的人群其E33SNP各基因型頻率、等位基因頻率及是否與GD發生相關具有一定的差異性。

本研究針對山東濰坊地區漢族人群不同時段復發GD患者E33SNP進行研究與分析，顯示A組CC型患者構成比顯著高于B組和C組，CT型患者構成比為顯著低于B組和C組；B組CC型患者構成比顯著高于C組。針對各觀察組基因型GD患者甲狀腺功能檢測發現，CC基因型患者TRAb水平均顯著高于組內其他基因型。提示甲狀腺球蛋白E33SNP C/C型患者是GD停藥后短期內復發的最高危人群，應考慮在ATD治療時延長低劑量維持給藥時間，以降低復發率，改善患者預后水平。

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