芎歸六君子湯對實驗性大鼠冠心病的治療作用

鄭麗莉

(山東協和學院，濟南 250109)

心血管疾病在我國城市居民死因中位居前三位，而冠心病是心血管疾病的第一死因[1]。冠心病屬于中醫學“胸痹”范疇，其病位在心，廣泛存在氣虛痰濁血瘀的病機。六君子湯源于《醫學正傳》，主治脾胃氣虛兼痰濕證，癥見食少便溏，胸脘痞悶嘔逆者，現代醫學常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在六君子湯基礎上，加味補血活血之當歸、川芎組成，具有補氣健脾，化痰散瘀之效，是治療脾胃氣虛，痰瘀內阻的常用方藥。本研究擬采用芎歸六君子湯治療大鼠冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，觀察該方對于冠心病的治療效果。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

SPF級SD大鼠60只，雄性，體重(200±20) g，山東省濟南市朋悅實驗動物繁育有限公司提供 [SCXK (魯) 2014-0007]，[SYXK (魯) 2014-0008]。

1.2 主要試劑與儀器

1.2.1 中藥材

芎歸六君子湯由人參、白術、茯苓、炙甘草、陳皮、姜半夏、川芎、當歸組成，藥物購于建聯藥店，經山東中醫藥大學中藥鑒定教研室鑒定。上述藥材按照比例3∶3∶3∶2∶1∶2∶3∶3稱取，加水浸泡2 h，常規煎煮3次，藥液混合，60℃水浴箱中濃縮至每毫升制劑相當于生藥0.6 g。滅菌，4℃冰箱保存備用。

1.2.2 對照藥

辛伐他丁，購于江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號：國藥準字H32020856。復方丹參滴丸，購于天津天士力制藥股份有限公司，批號：國藥準字H20013423。

1.2.3 造模用藥

膽固醇(百靈威科技有限公司，批號LR600108)；丙硫氧嘧啶(上海朝暉藥業有限公司，批號1404F12)；脫氧膽酸鈉(北京奧博星生物制藥有限公司，批號20151028)；維生素D3(哈爾濱市華晟科技動物藥品廠，獸藥字2015080511417)；垂體后葉素(南京新百藥業有限公司，批號100401)。脂肪乳的配比，每500 mL含10%膽固醇、20%豬油、1%丙硫氧嘧啶和2%脫氧膽酸鈉。

1.2.4 其他試劑

TC、TG、HDL-C、LDL-C試劑盒(南京建成生物有限公司，批號分別為20150311、20150327、20150328、20150403)；NO試劑盒(南京建成生物有限公司，20151216)，ET-1、PGI2、TXA2 ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，CSB-E06979r、CSB-E13706r、CSB-E12689r)，血漿PAI-1、t-PA ELISA試劑盒(南京森貝伽生物科技有限公司，批號分別為SBJ-R0574、SBJ-R0585)，TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA試劑盒(深圳達科為生物技術有限公司，批號分別為20151121、20151012、20150923)，hs-CRP ELISA試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，批號D19018885)，MCP-1、ICAM-1 ELISA試劑盒(美國R&D公司，批號20150101A、20150211A)。

1.2.5 主要儀器

Synergy2酶標儀 [美國伯騰儀器有限公司(Bio Tek)]；冷凍離心機(上海安亭科學儀器廠)；LG-10A電熱恒溫水浴箱(北京科偉永鑫儀器廠，HH-S4)；MS-18型全自動生化測定儀(奧普森公司)。

1.3 實驗方法

1.3.1 動物分組

將大鼠隨機分為5組，每組12只，分別為空白對照組、模型對照組、西藥對照組(辛伐他丁)、中藥對照組(復方丹參滴丸)、芎歸六君子湯組。

1.3.2 給藥方法

以等效劑量計算，于實驗開始即口服灌胃給藥，每日一次，持續12周。其中，空白對照組和模型對照組分別給予生理鹽水20 mL/kg；西藥對照組給予辛伐他丁2.1 mg/kg，中藥對照組給予復方丹參滴丸85 mg/kg；中藥組給予芎歸六君子湯6.3 g/kg。

1.3.3 模型制備

除空白對照組外，按每千克60萬單位一次性腹腔注射維生素D3，同時每天灌服脂肪乳10 mL/kg，連續12周。實驗結束前72 h，對照組腹腔注射生理鹽水1 mL/kg，其余各組腹腔注射垂體后葉素30 U/kg，連續3次，每次間隔24 h，誘發冠狀動脈痙攣，制備冠心病模型[2-3]。記錄造模前和末次給藥后30 min心電圖。本文的動物實驗已通過實驗動物使用與管理委員會批準(編號：IACUC-2016-017)。

1.3.4 檢測指標與方法

于12周末，末次給藥后12 h，稱重，戊巴比妥麻醉，下腔靜脈取血，低溫離心10 min，轉速3000 r/min，分離血清或血漿。

(1)心電圖檢測：戊巴比妥麻醉，連接BL-420E+生物機能實驗系統，記錄造模前和末次造模后30 min標準Ⅱ導聯心電圖，以QRS波群的終點與ST段交接處的J點位移判斷心肌缺血發生與否，并以PR段為基線記錄J點位移，以J點上升或下降超過0.1 mV視為發生心肌缺血。

(2)血脂測定：采用酶學法，用全自動生化分析儀檢測血清血脂(TC、TG、HDL-C、LDL-C)，具體操作按照試劑盒上說明進行。

(3)炎癥因子測定：ELISA法分別測定TNF-α、IL-1β、IL-6、hs-CRP、ICAM-1、MCP-1的濃度，實驗嚴格按照試劑盒步驟操作。

(4)血管內皮活性物質和纖溶系統檢測：硝酸還原酶法測定血清NO含量，ELISA法檢測血清ET-1、PGI2、TXA2和血漿PAI-1、t-PA的水平，嚴格按照試劑盒說明完成操作。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 芎歸六君子湯對冠心病大鼠心電圖ST段變化的影響

造模前后，模型組ST段變化超過0.1 mV，與空白對照組相比，ST段變化差異有顯著性(P< 0.05)，說明造模成功，出現冠脈痙攣，導致心肌缺血。與模型對照組相比，各給藥組ST水平改善，差異有顯著性(P< 0.05)。辛伐他丁組與丹參滴丸組差異無顯著性，芎歸六君子湯組效果優于辛伐他丁與丹參滴丸組，差異有顯著性(P< 0.05)。

2.2 芎歸六君子湯對冠心病大鼠血脂的影響

與空白對照相比，模型對照組TC、TG、LDL-C顯著升高，HDL-C顯著降低(P< 0.01)，說明模型對照組出現明顯高血脂，造模成功。與模型對照組相比，各給藥組血脂水平均改善，差異有顯著性，其中，辛伐他丁組與丹參滴丸組僅HDL-C差異有顯著性，TC、TG、LDL-C差異無顯著性，而芎歸六君子湯組效果優于辛伐他丁與丹參滴丸組，差異有顯著性。

2.3 芎歸六君子湯對冠心病大鼠炎癥因子的影響

與空白對照組相比，模型對照組TNF-α、IL-1、hs-CRP、MCP-1、ICAM-1顯著升高，說明模型對照組出現明顯的炎癥反應。與模型對照組相比，各給藥組炎癥因子均顯著降低，芎歸六君子湯組降低最為明顯，與辛伐他丁組和丹參滴丸組相比差異有顯著性。

2.4 芎歸六君子湯對冠心病大鼠血管內皮活性物質的影響

與空白對照組相比，模型對照組ET-1、TXA2顯著升高，縮血管作用增強，NO、PGI2顯著降低，擴血管作用減弱。各用藥組血管活性物質的水平均有所改善，與模型對照組相比差異有顯著性，其中芎歸六君子湯組效果優于辛伐他丁組及丹參滴丸組，而辛伐他丁組與丹參滴丸組相比差異無顯著性。

表1 芎歸六君子湯對冠心病大鼠心電圖ST段變化的影響

注：與空白對照組相比，*P< 0.05；與模型對照組相比，△P< 0.05；與辛伐他丁組相比，☆P< 0.05；與丹參滴丸組相比，●P< 0.05。下同。

Note. Compared with the blank control group,*P< 0.05. Compared with the model control group,△P< 0.05. Compared with the simvastatin group,☆P< 0.05. Compared with the Danshen dripping pill group,●P< 0.05. The same bellow.

表2 芎歸六君子湯對冠心病大鼠血脂的影響

表3 芎歸六君子湯對冠心病大鼠炎癥因子的影響

表4 芎歸六君子湯對冠心病大鼠血管內皮活性物質的影響

表5 芎歸六君子湯對冠心病大鼠纖溶系統的影響

2.5 芎歸六君子湯對冠心病大鼠纖溶系統的影響

與空白對照組相比，模型對照組t-PA顯著降低，PAI-1顯著升高，說明模型對照組纖溶功能降低，凝血功能增強。各給藥組t-PA升高，PAI-1降低，與模型對照組相比差異均有顯著性。芎歸六君子湯組改善最為明顯，優于辛伐他丁組和丹參滴丸組。

3 討論

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種以脂質沉積、纖維組織增生、炎癥細胞浸潤為特征的累及全身大、中動脈的慢性疾病，嚴重者導致急性心肌梗死或腦梗死等。脂質代謝紊亂和炎性反應貫穿于動脈粥樣硬化病變過程始終。

高血脂是動脈硬化的始動因素和主要危險因素，血清膽固醇和低密度脂蛋白水平升高與動脈硬化發生呈正相關[4]。高密度脂蛋白可將膽固醇逆向運至肝臟處理，降低機體膽固醇水平，且能抗氧化和抗炎，延緩動脈硬化進程。

炎癥是動脈粥樣硬化的基本特征，炎癥導致血管局部中性粒細胞和單核細胞浸潤，脂質沉積，平滑肌細胞增殖遷移，細胞外基質合成降解紊亂及新生血管增多。炎癥的活躍程度是鑒定不穩定斑塊的指標之一。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)可通過多種信號通路介導炎癥反應，在炎癥反應中具有核心作用地位，其表達量在一定程度上反映動脈粥樣硬化的程度，并與再發心肌梗死的危險成正相關[5]。IL-6、IL-10被認為是動脈硬化的標志物[6]。C-反應蛋白(CRP)是冠心病發生事件的獨立預測因子，動脈硬化不同階段CRP的水平隨之改變[7]。單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)對單核、巨噬細胞的遷移和激活起特異性調控作用，影響粥樣斑塊的增長及穩定性。ICAM-1是單核細胞遷移至血管內膜過程的重要誘導劑[8]。

內皮功能不全是動脈粥樣硬化和冠心病發展過程中的關鍵步驟，炎癥反應與內皮細胞功能損傷密切相關。內皮功能受損后，炎癥因子釋放增加，其他活性物質的分泌與釋放也出現紊亂。內皮素(ET)、一氧化氮(NO)、前列環素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)對血管舒縮功能、凝血系統及血小板聚集起平衡調節作用[9]。ET具有強烈的縮血管和促血管平滑肌細胞增殖作用。NO是能阻止動脈粥樣硬化發展的內皮保護因子。PGI2是強烈的血管舒張劑和血小板聚集抑制劑，而TXA2作用正好與PGI2相拮抗。血管內皮損傷時，ET-1、TXA2釋放增加，NO、PGI2減少，縮血管與凝血功能增強。

纖溶活性功能減低是急性冠脈綜合征的重要病理生理基礎。纖溶酶原激活物(t-PA/u-PA)能激活纖溶酶原，降解纖維蛋白。纖溶酶原激活物抑制物(PAI-1)能迅速與t-PA結合而使之失活，抑制纖維蛋白降解。PAI-1調節細胞黏附、遷移和增殖及凋亡等多個過程，促進動脈粥樣硬化。t-PA、PAI-1活性與冠心病的臨床類型和發展變化有關[10]，伴隨不穩定型心絞痛病情進展，血液纖溶功能紊亂加重，斑塊不穩定狀態惡化。PAI-1活性與再發心肌梗死密切相關，是心肌梗死的獨立危險因素。

本研究通過芎歸六君子湯治療大鼠冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，結果顯示，冠心病大鼠血脂和心電圖ST段改善；炎癥因子顯著下降；血管內皮活性物質ET、TXA2降低，NO、PGI2增加；纖溶系統t-PA升高，PAI-1降低。說明芎歸六君子湯對血管硬化和缺血心肌具有保護作用。

冠心病屬于中醫學胸痹范疇，病位在心。病機主要為心氣虧虛，但多兼有氣滯、痰濁和瘀血。《金匱要略·胸痹心痛短氣病脈證治》曰：“胸痹，心中痞，氣結在胸，胸滿脅下逆搶心，枳實薤白桂枝湯主之，人參湯亦主之。”張仲景在《備急于金要方》提出：“心勞病者，補脾以益之。”現代中醫名家鄧鐵濤教授認為，脾胃氣虛，痰濕阻滯是冠心病的常見成因。沈紹功認為，冠心病的治療應從傳統的“補氣活血”轉到“補氣祛痰”上來。徐秋[11]認為，心氣虛的根源是脾氣虛，臨證多補脾氣以促心氣。王振濤[12]提出，老年冠心病患者其體質特點多為氣血不足、津血同虧、脾胃和腸道功能下降。因此氣血不足，痰瘀內阻是冠心病的重要病機。

六君子湯源于《醫學正傳》，由人參、白術、茯苓、甘草、半夏、陳皮組成，現代醫學常用于治療慢性胃炎、消化性潰瘍等屬于脾胃氣虛者。芎歸六君子湯在其基礎上，加味補血活血之當歸、川芎，功能健脾益氣、化痰消脂、補血活血。本研究采用芎歸六君子湯治療冠心病，方中以人參、白術、茯苓和甘草增強脾胃功能，改善水谷運化，一則促進氣血化生，增加心肌供血；二則消除水濕痰飲，改善脂質代謝；以半夏、陳皮化痰理氣，調節血脂，改善動脈硬化；加之當歸、川芎補血活血行氣，改善血液高凝，促進纖溶；八藥合參，共同改善血管硬化和心肌供血，與本實驗結果相吻合。

該實驗結果提示，補氣健脾，化痰活血，能夠化生氣血，促進心肌供血，改善脂質代謝，緩解血液高凝，減輕血管硬化，對于冠心病治療大有裨益。關于其治療機制，尚有待下一步研究予以深入闡釋。

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