蛹蟲(chóng)草口含片制備工藝及活性評(píng)價(jià)研究

（天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院，食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300457）

蛹蟲(chóng)草又稱為北冬蟲(chóng)夏草或北蟲(chóng)草，它的拉丁學(xué)名為 Cordyceps militaris（L：Fr）link，是由子座（即草的部分）與菌核（即蟲(chóng)尸體的部分）組成的復(fù)合體[1]。目前大多數(shù)蛹蟲(chóng)草都是以蠶蛹為寄主，采用人工栽培而成型的，這種蛹蟲(chóng)草具有一定的藥理作用，同時(shí)富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是制作保健品較好的原材料[2]。隨著經(jīng)濟(jì)技術(shù)的發(fā)展和生活節(jié)奏的加快，人們的工作學(xué)習(xí)壓力越來(lái)越大，很多人的免疫功能卻在減弱，身體處于一種亞健康狀態(tài)，免疫性疾病時(shí)有發(fā)生。蛹蟲(chóng)草作為一種食藥兼用真菌，其有效成分如蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草多糖等在醫(yī)療、食品、保健等方面都已證明具有顯著功效[3]。目前已有研究開(kāi)發(fā)蛹蟲(chóng)草的保健品，配方多以蛹蟲(chóng)草粉末為主，食用時(shí)也是直接吞服，具有較強(qiáng)的砂礫感及土腥味，并未對(duì)口味等感官指標(biāo)進(jìn)行進(jìn)一步的考察[4]。因此如何提高蛹蟲(chóng)草提取物產(chǎn)品的口感及藥效具有一定的研究意義。

目前，提取蛹蟲(chóng)草有限成分的方法有多種，如溶劑提取法、微波輔助提取、超聲提取法、酶提取法等。周國(guó)海等[5]采用水作為溶劑，提取蛹蟲(chóng)草多糖，得到的提取純度較高。但如今溶劑提取在蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中運(yùn)用較廣的主要是蛹蟲(chóng)草多糖提取和蛹蟲(chóng)草蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸的提取，一般都是提取單一的活性成分；已有利用微波輔助酶法，對(duì)蛹蟲(chóng)草基質(zhì)多糖進(jìn)行提取[6]但利用微波綜合提取蛹蟲(chóng)草子實(shí)體的報(bào)道十分少；楚玉南等人[7]通過(guò)超聲波對(duì)蛹蟲(chóng)草的總苷進(jìn)行提取研究，超聲波的發(fā)射范圍受到一定的衰減因素的制約，對(duì)設(shè)備功率要求較高，同時(shí)產(chǎn)生噪音較大；超高壓技術(shù)不僅在加工方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，近年來(lái)，超高壓在物質(zhì)的有效成分提取方面具逐漸發(fā)揮特有的優(yōu)勢(shì)。同時(shí)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體所含纖維含量較高，這也是影響對(duì)蛹蟲(chóng)草內(nèi)部活性成分提取率的原因，因此可以利用纖維素酶對(duì)蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中的細(xì)胞壁進(jìn)行降解，使得包裹在纖維內(nèi)的活性成分更好的溶出。目前，將超高壓協(xié)同酶解來(lái)提取蛹蟲(chóng)草的有效成分并開(kāi)發(fā)成產(chǎn)品的鮮有。

本文利用超高壓協(xié)同酶解所得蛹蟲(chóng)草提取物作為原料，研究了蛹蟲(chóng)草口含片的生產(chǎn)工藝及活性評(píng)價(jià)。為今后蛹蟲(chóng)草有效成分的提取及口含片的加工提供了參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

本試驗(yàn)以人工培養(yǎng)的蛹蟲(chóng)草（Cordyceps militaris）子實(shí)體：天津東方中濱農(nóng)業(yè)科技有限公司提供（本文統(tǒng)稱蛹蟲(chóng)草），經(jīng)粉碎后過(guò)80目篩的蛹蟲(chóng)草粉為原料。

蟲(chóng)草酸：北京索萊寶科技有限公司；高碘酸鉀、無(wú)水葡萄糖、L-鼠李糖：天津市江天化工技術(shù)有限公司；纖維素酶：諾維信（中國(guó)）生物技術(shù)有限公司；檸檬酸：北京北方霞光食品添加劑有限公司；白砂糖：廣西南寧東亞糖業(yè)有限公司；淀粉：蘭溪鴻香生物科技有限公司；硬脂酸鎂：湖州市菱湖新望化學(xué)有限儀器與公司；所有輔料用試劑均為食品級(jí)。

1.2 設(shè)備

TGL-16B臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；DZF-6020型真空干燥箱：上海益恒科技有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；HPP.L3超高壓設(shè)備：天津市紐森科技有限公司；SRJX-4-9馬弗爐：天津五金機(jī)電廠；K9840自動(dòng)凱氏定氮儀：濟(jì)南能儀器有限公司；循環(huán)水真空泵：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；LS-B50L型立式壓力蒸汽滅菌器：上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 蛹蟲(chóng)草提取物口含片的加工工藝

1.3.1.1 口含片制備工藝流程

凈制蛹蟲(chóng)草→干燥→粉碎→超高壓協(xié)同酶解提取→凍干→研磨→輔料混合→壓片→滅菌→包裝

1.3.1.2 蛹蟲(chóng)草提取物功能成分測(cè)定

蛋白質(zhì)含量測(cè)定：依據(jù)GB 5009.5-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》中的自動(dòng)凱氏定氮儀的方法測(cè)定蛹蟲(chóng)草中蛋白質(zhì)的含量[8]。

蟲(chóng)草多糖含量的測(cè)定：采用苯酚-硫酸法測(cè)定總糖含量[9-10]。

蟲(chóng)草素、腺苷含量測(cè)定：采用高效液相色譜法測(cè)定蟲(chóng)草素與腺苷含量[11-12]。

蟲(chóng)草酸含量測(cè)定：采用比色法測(cè)定蟲(chóng)草酸含量。

1.3.1.3 口含片制備操作要點(diǎn)

粉碎：將凈制后烘干的蛹蟲(chóng)草通過(guò)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩，備用。

提取：根據(jù)我們以往做的工作，得到超高壓協(xié)同酶解的最佳條件進(jìn)行提取。按固液比為1∶10（g/mL）的蛹蟲(chóng)草子實(shí)體細(xì)粉與水相溶，然后裝入聚乙烯塑料袋中，真空包裝后浸泡于超高壓處理裝置的傳壓介質(zhì)水中，進(jìn)行超高壓處理，處理?xiàng)l件為400 MPa，8 min，后取出加入纖維素酶，按照料液比1∶10（g/mL），pH4.5，加酶量1 μL/mL，在50℃下提取4 h，75℃下滅活，在進(jìn)行水提，提取條件為58℃，2 h，提取兩次，最后抽濾。

輔料混合：先將白砂糖，淀粉與提取物混合均與，再加入硬脂酸鎂，麥芽糊精和β環(huán)糊精。

壓片：將混合好的原料粉傾倒與壓片機(jī)中，進(jìn)行壓片，去掉表面不光滑及有缺口的含片，使含片平均重量在0.25 g。

滅菌：壓好的含片送入紫外滅菌室，在紫外燈下滅菌30 min。

1.3.2 口含片輔料添加量的選擇

以淀粉及麥芽糊精為輔料，分別按2%、5%、10%、15%、20%的添加量添加蛹蟲(chóng)草提取物；按照物料質(zhì)量的5%、10%、15%、20%、25%的添加白砂糖，按照物料質(zhì)量的2%、4%、6%、8%、10%的添加檸檬酸；使β-環(huán)糊精添加量設(shè)定為物料質(zhì)量的2%、4%、6%、8%、10%；按照硬脂酸鎂添加量分別為為物料質(zhì)量的0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%進(jìn)行配比添加；淀粉和麥芽糊精作為最后的填充物料，添加的比例為3∶1、2 ∶1、1∶1、1∶2、1∶3（質(zhì)量添加比）。以感官評(píng)價(jià)方法為評(píng)定指標(biāo)，給出兩組評(píng)分（風(fēng)味評(píng)分、總感官評(píng)分），得出最佳添加量。

1.3.3 蛹蟲(chóng)草提取物口含片質(zhì)量評(píng)價(jià)

1.3.3.1 蛹蟲(chóng)草提取物口含片感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

蛹蟲(chóng)草口含片的研制過(guò)程中，根據(jù)配料及壓片后成型的效果，對(duì)感官標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)定，通過(guò)選擇10個(gè)以上具有一定經(jīng)驗(yàn)及鑒別能力的教師和學(xué)生組成評(píng)定小組，進(jìn)行感官評(píng)定，根據(jù)最終匯總統(tǒng)計(jì)，所得分值最高組的配比，將作為產(chǎn)品生產(chǎn)的參考配方，其評(píng)分的感官標(biāo)準(zhǔn)如表1。

表1 蛹蟲(chóng)草口含片感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Standard sensory score of Cordyceps militaris buccal tablets

1.3.3.2 蛹蟲(chóng)草提取物口含片總灰分的測(cè)定

取0.25 g口含片樣品研細(xì)，置于己烘干至恒重的坩堝內(nèi)，精密稱取重量后，至于電爐上燒至完全變黑并且無(wú)煙，在將坩堝移至馬弗爐內(nèi)，升溫至500℃～600℃，保持1 h～2 h，使之完全灰化后取出到干燥器中放置至室溫，精密稱量并計(jì)算總灰分的含量（%），公式如下：

1.3.3.3 蛹蟲(chóng)草提取物口含片水分的測(cè)定

取蛹蟲(chóng)草提取物口含片5片，平鋪于已干燥至恒重的稱量瓶中，精密稱定，精確至0.001，后放在烘箱中在105℃進(jìn)行干燥，首次干燥5小時(shí)，后稱重，再干燥，每隔1小時(shí)稱重，干燥時(shí)應(yīng)將瓶蓋取下，取出時(shí)須將瓶蓋蓋好。記錄每次重量直至恒重（系指連續(xù)兩次干燥后的重量差異在5 mg以下），后計(jì)算水分含量，公式如下：

1.3.3.4 片劑硬度、片重差異、含化時(shí)間檢驗(yàn)

片劑硬度的檢驗(yàn)：取20片供試品，依次放入片劑硬度儀的樣品槽，手動(dòng)壓片，讀取并記錄片劑破碎時(shí)的最大壓力，即為每片的片劑硬度。

片重差異的檢測(cè)：檢測(cè)時(shí)，先隨機(jī)取20片供試品于稱好重量的空稱量瓶中，稱其總重，計(jì)算平均片重，再精密稱定各片片劑的重量。根據(jù)中國(guó)藥典2005版一部附錄，0.3 g或0.3 g以上片劑的重量差異限度不得超過(guò)5%[13]。片重差異限度的計(jì)算公式如下：

含化時(shí)間的檢測(cè)：感官評(píng)定小組成員，記錄其每次入口含片及含片在口中消失的時(shí)間，每人含化口含片的時(shí)間，即為口含片的含化時(shí)間。

1.3.3.5 蛹蟲(chóng)草提取物口含片相關(guān)質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

菌落總數(shù)的測(cè)定參照GB 4789.2-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測(cè)定》；大腸桿菌含量的測(cè)定參照GB 4789.3-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)大腸菌群計(jì)數(shù)》；鉛元素的測(cè)定參照GB 5009.12-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中鉛的測(cè)定》，汞元素的測(cè)定參照GB 5009.17-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中總汞及有機(jī)汞的測(cè)定》，砷元素的測(cè)定參照GB 5009.11-2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無(wú)機(jī)砷的測(cè)定》[14-18]。

1.3.4 蛹蟲(chóng)草提取物口含片的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)

將實(shí)驗(yàn)所用小鼠（選擇昆明雌性小鼠）隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組（生理鹽水）、低劑量組（2 000 mg/kg·bw）、中劑量組（4 000 mg/kg·bw）、高劑量組（6 000 mg/kg·bw），每組10只。采用灌胃方式給藥，給藥量為0.2 mL/10 g，每天給藥1次，連續(xù)給藥21 d。

1.3.4.1 胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的測(cè)定

小鼠末次給藥后2 h，記錄小鼠體重并摘除眼球處死，將小鼠置于75%酒精中浸泡片刻，將小鼠仰位固定進(jìn)行剖檢，摘取脾臟、胸腺，在生理鹽水中清洗、修剪，去除脂肪及筋膜，濾紙上濾干后稱其濕重。臟器重量與體重之比，按下列公式計(jì)算[19]：

式中：m1為脾臟重量，mg；m2為胸腺重量，mg；M為體重，g。

1.3.4.2 小鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[19]設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。

末天灌胃2 h后，將小鼠稱重并記錄體重，按體重系數(shù)0.1 mL/10 g從小鼠尾靜脈注入用PBS∶墨汁=4∶1（體積比）稀釋的印度墨汁，分別在注入墨汁后2 min（t1）、10 min（t2），從內(nèi)眥靜脈叢取血 20 μL，并立即加到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，混勻。用分光光度計(jì)在600 nm處測(cè)吸光度值（OD），以0.1%Na2CO3溶液做空白調(diào)零，分別用OD1和OD2來(lái)表示2 min和10 min所取血樣的吸光度值。將小鼠處死，解剖動(dòng)物，取出肝臟、脾臟及胸腺，除去表面脂肪等組織，用濾紙吸干血跡后稱重。小鼠的碳粒廓清指數(shù)K、吞噬指數(shù)α的計(jì)算公式如下：

式中：t1、t2為注射印度墨汁后采血的時(shí)間；OD1為t1時(shí)取血清測(cè)得的吸光度值；OD2為t2時(shí)取血清測(cè)得的吸光度值；m為小鼠體重，g；M0為肝脾合重，g。

1.3.4.3 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[20-21]設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。

小鼠連續(xù)灌胃21天后，將小鼠摘眼球取血、處死。無(wú)菌取脾，將脾臟置于盛有適量Hank’s液的平皿中，將脾臟處理干凈后置于200目網(wǎng)篩上輕輕碾壓，使用適量Hank’s液沖洗鋼網(wǎng)篩，得到單細(xì)胞懸液，吸取置于15 mL離心管中。1 000 r/min離心10 min，棄上清，將細(xì)胞用適量Hank’s液吹勻、離心洗滌，2次～3次，至洗滌至細(xì)胞呈白色，用RPMI-1640完全培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞，采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)（活細(xì)胞數(shù)在95%以上），調(diào)整細(xì)胞濃度2×107個(gè)/mL。將細(xì)胞懸液加入96孔板中，每孔100 μL，空白對(duì)照加入100 μL RPMI-1640完全培養(yǎng)基，ConA刺激組加入100 μL終濃度為 5 μg/mL的 ConA溶液，LPS刺激組加入 100 μL終濃度為10 μg/mL的LPS溶液，每組3個(gè)平行孔。將96孔板置于5%，CO2培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)44 h后，采用MTT 法[22]，每孔加入 5 mg/mL MTT 溶液 20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束后，1 000 r/min離心10 min，棄上清，每孔加入150 μL的DMSO溶液，輕輕震蕩待紫色結(jié)晶紫溶解后，用酶標(biāo)儀在570 nm波長(zhǎng)測(cè)定光密度值。用實(shí)驗(yàn)孔與對(duì)照孔光密度值的比值表示脾細(xì)胞的增值能力，計(jì)算公式如下：

式中：SIConA為ConA刺激指數(shù)；SILPS為L(zhǎng)PS刺激指數(shù)；OD1為ConA實(shí)驗(yàn)組吸光度值；OD2為L(zhǎng)PS實(shí)驗(yàn)組吸光度值；OD3為對(duì)照組吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 超高壓協(xié)同酶解輔助提取蛹蟲(chóng)草提取物活性成分分析

蛋白質(zhì)含量22.14%，蟲(chóng)草多糖含量28.83%，蟲(chóng)草素含量0.616%，腺苷含量0.174%，蟲(chóng)草酸含量0.897 8%。超高壓協(xié)同酶解輔助提取工藝可以較大的提高蛹蟲(chóng)草的提取率及活性成分的含量，因此以超高壓協(xié)同酶解輔助提取制備蛹蟲(chóng)草提取物進(jìn)行口含片開(kāi)發(fā)。

2.2 蛹蟲(chóng)草提取物口含片工藝結(jié)果

2.2.1 蛹蟲(chóng)草提取物口含片配方確定

2.2.1.1 蛹蟲(chóng)草提取物添加量的選擇

以淀粉及麥芽糊精為輔料，添加蛹蟲(chóng)草提取物，所得感官評(píng)價(jià)如下表2所示。

表2 蛹蟲(chóng)草提取物添加量的感官評(píng)分表Table 2 Sensory value varying with the concentration of Cordyceps malitaris extractive

由表2可知，當(dāng)提取物添加量在10%時(shí)，不論是風(fēng)味還是感官總分值，都是比較好的，因此工藝中，蛹蟲(chóng)草提取物添加量定為10%。

2.2.1.2 白砂糖與檸檬酸添加量的考察

白砂糖添加量的感官評(píng)分表見(jiàn)表3。

表3 白砂糖添加量的感官評(píng)分表Table 3 Sensory value varying with the concentration of white sugar

由表3可以看出，口含片甜味較重還是比較得到大家的喜歡，在風(fēng)味評(píng)價(jià)上可以看出，由于蛹蟲(chóng)草口味較鮮，與糖的甜味組合，可以提升鮮味，當(dāng)糖的添加量在20%、25%時(shí)，風(fēng)味評(píng)分較高。由表2（c）可以看出，檸檬酸的添加量在6%時(shí)評(píng)分較高，與甜味劑相匹配，達(dá)到一個(gè)較好的口感，選擇糖含量在15%，檸檬酸含量為6%進(jìn)行配比。

檸檬酸添加量的感官評(píng)分表見(jiàn)表4。

表4 檸檬酸添加量的感官評(píng)分表Table 4 Sensory value varying with the concentration of citric acid

2.2.1.3 β-環(huán)糊精加量的考察

β-環(huán)糊精添加量的感官評(píng)分表見(jiàn)表5。

表5 β-環(huán)糊精添加量的感官評(píng)分表Table 5 Sensory value varying with the concentration of βcyclodextrin

根據(jù)感官試驗(yàn)結(jié)果，可以看出當(dāng)β-環(huán)糊精添加量為6%和8%時(shí)，感官總分值相差不大，因此繼續(xù)考察后期壓片的條件，根據(jù)壓片后成片的硬度，選擇8%的添加量為口含片的配方。

2.2.1.4 硬脂酸鎂添加量的考察

硬脂酸鎂添加量的感官評(píng)分表見(jiàn)表6。

表6 硬脂酸鎂添加量的感官評(píng)分表Table 6 Sensory value varying with the concentration of magnesium stearate

由表6可以看出當(dāng)硬脂酸鎂添加量在6%時(shí)，組織狀態(tài)評(píng)分較高。

2.2.1.5 淀粉和麥芽糊精添加量的考察

淀粉和麥芽糊精添加比例的感官評(píng)分表見(jiàn)表7。

表7 淀粉和麥芽糊精添加比例的感官評(píng)分表Table 7 Sensory value varying with the ratio of starch and maltodextrin

由表7可知，根據(jù)感官評(píng)分，當(dāng)?shù)矸酆望溠亢砑颖壤?∶1（質(zhì)量比）的比例進(jìn)行添加時(shí)，口感及感官評(píng)分較高，因此可以確定淀粉和麥芽糊精以1∶1（質(zhì)量比）的添加量進(jìn)行添加。

2.2.1.6 最終配方確定

根據(jù)感官評(píng)價(jià)試驗(yàn)，按照添加物的作用，選擇最佳口感及組織狀態(tài)的添加比例，最終確定配方如表8所示。

表8 超高壓協(xié)同酶解蛹蟲(chóng)草提取物口含片配方Table 8 Formulation of UHP treament combined with cellulase extractive buccal table

2.2.2 口含片的質(zhì)量檢測(cè)

2.2.2.1 片重差異、硬度、含化時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

按《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄中，隨機(jī)抽取藥片10片，精密稱取其總重量，如下表所示。按藥典規(guī)定0.3 g或0.3 g以上者，片重差異限度為±5%，超出片重差異的片劑一般要求≤2，由于含片單片重量較小，單片劑間差距小于±5%，符合要求。同時(shí)，按《中國(guó)藥典》2005版一部附錄中規(guī)定，硬度在3 kg～5 kg之間比較合適，共測(cè)10片，硬度在4左右，符合要求[23]。含化時(shí)間在12分鐘左右，超過(guò)要求中的水分含量。片重差異、片劑硬度及含化時(shí)間的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 片重差異、片劑硬度及含化時(shí)間的檢測(cè)結(jié)果Table 9 Test results of tablet weight differences，hardness and solution time

2.2.2.2 蛹蟲(chóng)草口含片衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果

蛹蟲(chóng)草口含片質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表10。

表10 蛹蟲(chóng)草口含片質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Table 10 Quality index results of Cordyceps malitaris buccal table

續(xù)表10 蛹蟲(chóng)草口含片質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果Continue table 10 Quality index results of Cordyceps malitaris buccal table

2.3 蛹蟲(chóng)草口含片增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 臟器/體重比值測(cè)定結(jié)果

蟲(chóng)草口含片對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響見(jiàn)表11。

表11 蟲(chóng)草口含片對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響Table 11 Effects of Cordyceps malitaris buccal tables on immune organ index in mice

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蛹蟲(chóng)草提取物口含片在高劑量組中可以極顯著增加小鼠的免疫器官指數(shù)，中劑量組也有顯著的提高，但低劑量組中變化不大，可以認(rèn)為超高壓協(xié)同酶解蛹蟲(chóng)草提取物口含片具有提高機(jī)體的體液免疫與細(xì)胞免疫的作用。

2.3.2 小鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)

小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)顯示，口含片含量高、中、低劑量組吞噬指數(shù)較空白對(duì)照組均顯著增加（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05），但中劑量為較顯著，說(shuō)明中劑量是對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞系統(tǒng)較有利的劑量，如表12。

表12 蛹蟲(chóng)草提取物口含片對(duì)小鼠碳粒廓清能力的影響Table 12 Effects of Cordyceps malitaris buccal tables on Macrophage Function

巨噬細(xì)胞廓清指數(shù)可以反映其吞噬功能的強(qiáng)弱[24]，巨噬細(xì)胞有吞噬、處理和呈遞抗原，激活淋巴細(xì)胞和分泌多種可溶性因子從而加強(qiáng)淋巴細(xì)胞活性的功能，參與免疫反應(yīng)的傳入支路；同時(shí)它也是免疫效應(yīng)細(xì)胞，能夠殺死細(xì)菌和腫瘤細(xì)胞，引起組織損傷，而參與免疫反應(yīng)的傳出。在免疫應(yīng)答反應(yīng)中，免疫細(xì)胞通過(guò)直接接觸和它們分泌的可溶性因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)和免疫效應(yīng)作用[25]。

故試驗(yàn)中喂食蛹蟲(chóng)草提取物口含片對(duì)小鼠碳廓清的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其可以明顯增強(qiáng)小鼠的巨噬細(xì)胞吞噬能力，從而增強(qiáng)小鼠的非特異性免疫功能。

2.3.3 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

蛹蟲(chóng)草提取物口含片對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖能力的影響見(jiàn)表13。

表13 蛹蟲(chóng)草提取物口含片對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖能力的影響Table 13 Effects of Cordyceps malitaris buccal tables on spleen lymphocyte proliferation in mice

MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，如表13，低劑量組與空白組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），中計(jì)量組與空白組比較具有顯著性差異（P＜0.05），而高劑量組與空白組比較有較顯著性差異（P＜0.01）說(shuō)明蛹蟲(chóng)草提取物口含片能夠刺激小鼠的T淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫能力；LPS刺激指數(shù)：喂食蟲(chóng)草口含片低劑量組與空白組比較無(wú)顯著性差異（P＞0.05），中、高劑量組與空白組比較均具有顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明蟲(chóng)草口含片能夠刺激小鼠的B淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫能力。

3 結(jié)論

以超高壓協(xié)同酶解所得到的蛹蟲(chóng)草提取物為原料，以感官評(píng)定為主要指標(biāo)，確定了蛹蟲(chóng)草口含片的工藝及配方。配方為蛹蟲(chóng)草提取物10%，白砂糖15%，檸檬酸6%，淀粉30%，麥芽糊精30%，β一環(huán)糊精8%，硬脂酸鎂1%。同時(shí)考察所生產(chǎn)出的片劑的水分、灰分、硬度、片重差異等質(zhì)量指標(biāo)，均符合藥典對(duì)口含片的要求。

將口含片按照低中高的劑量喂食小鼠40 d，結(jié)果顯示喂食高劑量組的小鼠體重有較小的減少，但其胸腺及脾臟指數(shù)有顯著增加，而中劑量組小鼠在碳廓清及脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)出現(xiàn)顯著提高。與空白中對(duì)比，喂食蛹蟲(chóng)草提取物口含片可以提高小鼠巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)、T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和B淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，說(shuō)明蛹蟲(chóng)草提取物口含片具有一定的增強(qiáng)免疫的作用。

所研制的蛹蟲(chóng)草口含片喂食小鼠后，高劑量組的小鼠體重明顯下降，對(duì)蛹蟲(chóng)草提取物是否具有減肥等其他功效可以進(jìn)一步研究。以蛹蟲(chóng)草提取物為主題的研究很廣，既有抗腫瘤、抗病毒、增強(qiáng)免疫方面的研究，也有與礦質(zhì)元素結(jié)合成螯合物，促進(jìn)人體的代謝吸收的研究，這些研究都涉及到人的生理代謝機(jī)制，對(duì)此，以后的研究要結(jié)合人體的代謝活動(dòng)進(jìn)行展開(kāi)。

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