不同產(chǎn)地南五味子中木脂素和總多糖的比較

王宇暉， 蔡子平

（1.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，江蘇 南京 210095；2.甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院中藥材研究所，甘肅 蘭州730070；3.甘肅省中藥材種質(zhì)改良與質(zhì)量控制工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730070）

南五味子為木蘭科植物華中五味子（Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.） 的干燥成熟果實(shí)［1］，具有收斂固澀、益氣生津、補(bǔ)腎寧心之功效，用于久嗽虛喘、夢(mèng)遺滑精、遺尿尿頻、久瀉不止、自汗、盜汗、津傷口渴、氣短脈虛、內(nèi)熱、消渴、心悸失眠等癥。其廣泛分布于江蘇、安徽、河南、山西、陜西、甘肅、湖北、四川、江西、湖南、貴州和云南等地［2］。南五味子現(xiàn)在陜西和甘肅隴南地區(qū)規(guī)模栽培，含五味子甲素、五味子酯甲、乙、丙、丁、戊等木脂素類(lèi)成分［3］。研究發(fā)現(xiàn)，南五味子中含有大量的木脂素類(lèi)成分，具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用［4］，如五味子酯類(lèi)成分能顯著降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶［5］，木脂素具有鎮(zhèn)靜、催眠等多種藥理作用［6］。藥理臨床實(shí)驗(yàn)表明，酯甲、酯乙、酯丙、酯丁對(duì)遷延性、慢性病毒性肝炎有較好的降SGPT作用，其商品制劑“五酯膠丸”已用于臨床治療急、慢性肝炎［7］。

為了探討不同產(chǎn)地南五味子的差異，我們于2017年8月在甘肅省中藥材種質(zhì)改良與質(zhì)量控制工程實(shí)驗(yàn)室以南五味子醇提物中木脂素的含量和總多糖為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用紫外分光光度法分別對(duì)甘肅、陜西、四川產(chǎn)地的南五味子木脂素和多糖含量進(jìn)行了測(cè)定，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試南五味子藥材分別購(gòu)自蘭州旭康藥業(yè)（批號(hào)：20130910），產(chǎn)地陜西；復(fù)興厚藥業(yè)（批號(hào)：20130510），產(chǎn)地甘肅；隴西百寶藥業(yè)（批號(hào)：20130225），產(chǎn)地四川。五味子乙素對(duì)照品（110765-201311）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。供試試劑變色酸、苯酚、95%乙醇、甲醇、濃硫酸均為分析純。

1.2 儀器設(shè)備

可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)，型號(hào)規(guī)格：T6新悅），電子天平（奧豪斯儀器有限公司生產(chǎn)，型號(hào)規(guī)格：SE602F），調(diào)溫型電熱套（型號(hào)規(guī)格：MH-250）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 試樣的制備 ①南五味子木脂素樣品溶液的制備。準(zhǔn)確稱(chēng)取甘肅、陜西、四川產(chǎn)南五味子各20.0 g，用95%乙醇80mL，回流提取2 h，室溫冷卻，過(guò)濾；提取液濃縮至60mL，取2mL水浴蒸干，用甲醇定容至50mL，即得南五味子木脂素樣品溶液。②南五味子多糖樣品溶液的制備。準(zhǔn)確稱(chēng)取甘肅、陜西、四川產(chǎn)南五味子各20.0 g，水煎煮提取2次，第1次加15倍水，煎煮1h；第2次加10倍水，煎煮0.5h。提取液過(guò)濾，合并兩次提取液，濃縮、醇沉、抽濾，取沉淀加蒸餾水溶解，即得南五味子多糖樣品溶液。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制 ①木脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。精確稱(chēng)取五味子乙素對(duì)照品0.0026g，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.26 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確吸取五味子乙素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL置5mL容量瓶中，加95%乙醇定容至刻度，搖勻，在570 nm處測(cè)定其吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制木脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。②多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制。精確稱(chēng)量葡萄糖0.9947g，定容于250mL容量瓶中，稀釋40倍，即得質(zhì)量濃度為0.099 47 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。稱(chēng)取苯酚固體5 g，蒸餾水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，備用。分別精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 、1.0mL置于20mL試管中，補(bǔ)加蒸餾水至1.0mL，再加入5%苯酚1mL及濃硫酸5mL，靜置10min，搖勻，室溫放置20min。以1.0mL水按同樣操作為空白。在490 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

圖1 木脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

圖2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

1.3.3 木脂素質(zhì)量濃度和總多糖質(zhì)量濃度測(cè)定采用紫外-分光光度法測(cè)定南五味子中的木脂素質(zhì)量濃度和總多糖質(zhì)量濃度［8-15］。準(zhǔn)確吸取南五味子木脂素樣品溶液和多糖樣品溶液，按照1.3.2的方法操作，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算南五味子木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)和總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

木脂素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：Y=0.880X+0.0782（r=0.9997），在0～0.26 mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：Y=31.92191241X-1.377699945（R=0.998 2），在0～0.099 47 mg/mL范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2 不同產(chǎn)地南五味子總木脂素

在570 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定不同產(chǎn)地的南五味子樣品溶液的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算木脂素量，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可以看出，以四川產(chǎn)南五味子木脂素量最高，為374.498 9 mg，折合藥材木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.872 5%；陜西產(chǎn)南五味子次之，木脂素量為282.516 7 mg，折合木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.412 6%；甘肅產(chǎn)南五味子總木脂素量最低，為250.684 4 mg，折合藥材木脂素量為1.253 4%。

表1 不同產(chǎn)地南五味子藥材中木脂素

2.3 不同產(chǎn)地南五味子總多糖含量

在490 nm波長(zhǎng)處，測(cè)定不同產(chǎn)地的南五味子樣品溶液的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算總多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可以看出，整粒提取時(shí)，陜西產(chǎn)地南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.665%，四川產(chǎn)南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.080%，甘肅產(chǎn)南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為11.180%；研碎提取時(shí)，陜西產(chǎn)南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10.360%，四川產(chǎn)南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.560 0%，甘肅產(chǎn)南五味子的折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為12.830%。由此可看出，研碎后不同產(chǎn)地南五味子總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異性明顯，甘肅產(chǎn)南五味子總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前增加了1.650百分點(diǎn)，四川產(chǎn)南五味子總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前減少了0.520百分點(diǎn)，陜西產(chǎn)南五味子總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前增加了0.695百分點(diǎn)。

表2 不同產(chǎn)地南五味子藥材中總多糖①每個(gè)產(chǎn)地的南五味子均重復(fù)3次，多糖含量為平均值。

3 小結(jié)與討論

測(cè)定結(jié)果表明，甘肅、陜西、四川產(chǎn)南五味子中以四川產(chǎn)南五味子折合藥材木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，達(dá)1.872 5%；陜西產(chǎn)南五味子折合藥材木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)次之，為1.412 6%；甘肅產(chǎn)南五味子折合藥材木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)最低，為1.253 4%。整粒提取和研碎后提取均以甘肅產(chǎn)南五味子折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，分別為11.180%、12.83 0%，均高于四川產(chǎn)和陜西產(chǎn)。經(jīng)研碎處理后，甘肅產(chǎn)南五味子折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前增加了1.65百分點(diǎn)，四川產(chǎn)南五味子折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前減少了0.52百分點(diǎn)，陜西產(chǎn)南五味子折合藥材總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)較研碎前增加了0.695百分點(diǎn)。甘肅產(chǎn)和陜西產(chǎn)的南五味子研碎處理測(cè)的總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于研碎前整粒提取，說(shuō)明傳統(tǒng)“五味子宜研碎入藥”的合理性。四川產(chǎn)南五味子研碎之后提取所得多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于研碎前的整粒提取，這可能與人工研碎材料不均勻以及醇沉?xí)r間短有關(guān)。

有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，影響南五味子多糖提取得率的因素很多，如料液比、時(shí)間、pH、溫度等［8-15］。本研究測(cè)定的是南五味子水提物中的木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)和總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)，之所以選擇水提醇沉法提取木脂素和多糖，采用紫外-分光光度法測(cè)定木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)和總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)，因?yàn)槠浜?jiǎn)單，易操作。木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)和總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)有差異的原因，除產(chǎn)地環(huán)境外，南五味子的栽培管理、采收季節(jié)、加工方式都可能產(chǎn)生影響。近年來(lái)，由于市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)刺激，多數(shù)藥農(nóng)以及加工企業(yè)有搶收，或者以次充好的情況存在。在推廣規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)的同時(shí)，也不能忽視生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)南五味子木脂素質(zhì)量分?jǐn)?shù)和總多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響。

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