不同溶劑艾蒿提取液對黃瓜枯萎病菌的抑菌活性研究

秦凱+劉永震

摘要 利用甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮4種有機(jī)溶劑在相同溫度和相同濃度下分別多次提取的方法提取了艾蒿中的抑菌成分，對經(jīng)多次提取得到的不同有機(jī)溶劑的艾蒿提取液進(jìn)行減壓濃縮，得到濃度為0.5 g/mL的艾蒿提取液。通過對比在加入不同量的不同有機(jī)溶劑提取液的PDA培養(yǎng)基上病原菌的生長直徑，測定了艾蒿提取液對黃瓜枯萎病菌的抑菌活性。結(jié)果表明，濃度相同時(shí)，艾蒿的乙酸乙酯提取液抑菌活性最好，且隨著加入量的增加，抑菌活性逐漸增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 艾蒿；提取物；黃瓜枯萎病菌；抑菌活性

中圖分類號 S436.421.1+3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）01-0107-01

艾蒿（Artemisia argyi）也稱艾草，屬于菊目菊科蒿屬，對多種真菌都有抗拒特性，能夠抑制菌絲生長和孢子萌發(fā)，還具有抗病毒作用[1]。本試驗(yàn)利用幾種有機(jī)溶劑對艾蒿莖葉進(jìn)行提取，通過試驗(yàn)測定其對黃瓜枯萎病菌的抑制效果，以為艾蒿在植物病害防治應(yīng)用方面提供理論依據(jù)，為開發(fā)新型農(nóng)藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

艾蒿莖葉采集于邢臺市平鄉(xiāng)縣河古廟鎮(zhèn)董固村，取莖和葉，洗去塵土，置于陰涼背風(fēng)處自然風(fēng)干。利用萬能粉碎機(jī)將風(fēng)干后的艾蒿莖葉粉碎成粉末狀，盛入預(yù)先消毒的牛皮紙袋中，密封，保存。

PDA培養(yǎng)基；甲醇、75%乙醇、乙酸乙酯、丙酮、均為分析純；黃瓜枯萎病病原菌。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 艾蒿抑菌物質(zhì)的提取。準(zhǔn)確稱取4份粉末狀的艾蒿莖葉7 g迅速放入4只容積為250 mL的三角瓶中，分別倒入60 mL甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮，迅速用封口膜密封，振蕩1～2 min，使粉末與有機(jī)溶劑均勻分布在三角瓶中。將三角瓶放入恒溫振蕩器中25 ℃ 振蕩提取24 h后，取出三角瓶用真空抽濾泵對液體進(jìn)行抽濾，濾液密封后放入冰箱中4 ℃保存，依此提取3次，將3次抽濾得到的濾液分別混合，得到提取液[2]。

將甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮提取艾蒿莖葉得到的濾液分別放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮，艾蒿的甲醇提取液在60 ℃ 水溫下濃縮，乙醇提取液和乙酸乙酯提取液在70 ℃ 水溫下濃縮，丙酮提取液在50 ℃ 水溫下濃縮，4種提取液均濃縮至14 mL，最終均得到0.5 g/mL艾蒿提取液，密封，放入冰箱中4 ℃ 保存[3]。

1.2.2 抑菌活性測試。在無菌條件下倒PDA培養(yǎng)基平板（每皿30 mL），待平板冷卻凝固后，用打孔法將黃瓜枯萎病原菌接種到培養(yǎng)皿中，重復(fù)4皿，作為對照組，放入25 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。分別在4個(gè)裝有120 mL PDA培養(yǎng)基的三角瓶中分別加入0.4 mL 4種有機(jī)溶劑的艾蒿提取液作為試驗(yàn)組的第1個(gè)濃度梯度，在4個(gè)裝有120 mL PDA培養(yǎng)基的三角瓶中分別加入0.8 mL 4種有機(jī)溶劑的艾蒿提取液作為試驗(yàn)組的第2個(gè)濃度梯度，在4個(gè)裝有120 mL PDA培養(yǎng)基的三角瓶中分別加入1.6 mL 4種有機(jī)溶劑的艾蒿提取液作為試驗(yàn)組的第3個(gè)濃度梯度。在無菌條件下用持皿法倒混入提取液的培養(yǎng)基平板（每皿30 mL），待平板冷卻凝固后，用打孔法將病原菌分別接種到混入不同濃度提取液的PDA培養(yǎng)基的平皿中，每個(gè)濃度梯度接種4皿，25 ℃ 恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。

待對照菌落長滿全皿時(shí)，分類記錄各個(gè)培養(yǎng)基中植物病原菌的半徑。對照組中每種植物病原真菌的平均直徑作為最終采用的對照組菌落直徑。根據(jù)對照組菌落的直徑和試驗(yàn)組菌落的直徑分別計(jì)算出每種植物病原真菌在不同有機(jī)溶劑提取和不同提取液混入量下的抑制率[4]。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，當(dāng)加入提取液量相同時(shí)，艾蒿的乙酸乙酯提取物對黃瓜枯萎病病原菌的抑制效果最好，且隨著乙酸乙酯提取物濃度增加抑菌活性在增強(qiáng)，分別為51.10%、54.21%和55.94%，均高于加入相同量提取液的甲醇提取液、乙醇提取液和丙酮提取液的抑菌活性。在加入同等濃度不同溶劑提取液中，艾蒿的丙酮提取物對黃瓜枯萎病病原菌的抑制效果最差。由此可見，在艾蒿中提取對黃瓜枯萎病病原菌有抑制作用的物質(zhì)時(shí)，乙酸乙酯效果好，應(yīng)作為優(yōu)先考慮使用的有機(jī)溶劑。

3 討論

艾蒿中具有抑菌效果的物質(zhì)主要為黃酮類和揮發(fā)油，兩者對植物病原菌均有一定的抑制效果，提取物的濃度與其抑制率成正相關(guān)[5]。黃酮類化合物具有較強(qiáng)的抗氧化性，可以起到抗氧化、清除自由基的作用，對很多植物類病原菌都有抗拒特性，能夠抑制菌絲生長和孢子萌發(fā)。通過有機(jī)溶劑浸泡法制得的艾蒿提取液中的抑菌物質(zhì)熱穩(wěn)定性不好，同時(shí)溫度較高會(huì)加速有機(jī)溶劑的揮發(fā)，從而減弱了提取效果。通過本試驗(yàn)可以推測，艾蒿的有機(jī)溶劑浸提物對一些黃瓜枯萎病原菌具有一定的抑制作用，但由于本試驗(yàn)是在離體培養(yǎng)條件下進(jìn)行的，因而室外自然生長狀態(tài)下的抑菌效果以及艾蒿提取液的有效成分對各類植物病原菌的抑制作用機(jī)理還需進(jìn)行研究[6]。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 盧學(xué)根.艾葉中抑菌物質(zhì)的提取及抑菌作用研究[J].食品科技，2006（10）：54-56.

[2] 胡林峰，崔乘幸，吳玉博，等.艾蒿化學(xué)成分及其生物活性研究進(jìn)展[J].河南科技學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，38（4）：75-77.

[3] 孫福娟，陳莉，孫衛(wèi)國.微波法艾蒿色素提取及抗菌性能研究[J].毛紡科技，2011，39（2）：17-20.

[4] 徐芙清，何偉，鄭星，等.野艾蒿及其有幾提取物對銅綠微囊藻生長的抑制作用[J].生態(tài)學(xué)報(bào)，2010，30（3）：745-750.

[5] 吳娜，張瑞巧，孫智達(dá).艾蒿中黃酮類化合物的提取工藝研究[J].食品工業(yè)科技，2008（1）：228-229.

[6] 陳純.艾蒿的抑菌作用及其在果蔬保鮮中的應(yīng)用[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué)，2009.