流行病學、環境醫學

1例國內罕見的輸入性卵形瘧的實驗室檢測

師永霞，黃吉城，蘇錦坤，等

摘要：目的：卵形瘧原蟲感染經常發生在中東、西非和印度尼西亞等地，我國本土瘧疾無卵形瘧報告病例，使用傳統的吉姆薩染色觀察法進行瘧原蟲鏡檢時易對卵形瘧原蟲漏檢或誤檢。本文將傳統鏡檢法與巢式 PCR、實時熒光PCR等分子生物學檢測技術相結合，對1例國內罕見的赤道幾內亞輸入性卵形瘧原蟲感染進行了實驗室檢測。方法：對白云機場入境的發熱病例進行流行病學調查，并采集病例抗凝血送至實驗室進行檢測。制備疑似瘧疾患者血樣的血涂片，吉姆薩染色后進行瘧原蟲的初次鏡檢觀察。根據瘧原蟲的小亞單位核糖體核糖核酸基因序列，實驗室自行設計瘧原蟲屬特異性（通用型）和4種瘧原蟲種特異性引物和探針，建立瘧疾巢式PCR和實時熒光PCR檢測及分型方法，并對該血樣進行瘧疾檢測及分型。將PCR擴增片段進行序列測定，將序列遞交到GenBank數據庫，并與GenBank上已有的瘧原蟲序列進行BLAST比對分析。結合血樣的分子生物學檢測和BLAST分析結果，重新對鏡檢結果進行復核。結果：口岸發現的該發熱病例入境查體溫度為 38.3℃，曾在赤道幾內亞國家工作兩年，期間染瘧疾，曾多次反復發作。實驗室對血樣的初次鏡檢為瘧疾陰性，但使用瘧原蟲巢式PCR通用引物對血樣的DNA進行PCR檢測，擴增出了預期大小約240 bp的條帶，表明瘧原蟲核酸陽性；巢式PCR分型檢測表明，血樣僅擴增出預期大小約450 bp的卵形瘧條帶，無對應大小的惡性瘧、間日瘧和三日瘧擴增條帶產生，初步判定該病例為卵形瘧感染。實時熒光PCR檢測進一步確認了卵形瘧原蟲陽性結果，血樣的瘧原蟲通用型檢測為瘧原蟲核酸陽性，有典型的 S形陽性曲線；利用染料摻入法進行卵形瘧的特異性實時熒光PCR檢測，檢測結果為卵形瘧陽性，擴增片段特異性強，熔解曲線的Tm值為72.5℃，惡性瘧、間日瘧和三日瘧無擴增曲線，說明該病例無惡性瘧、間日瘧或三日瘧混合感染。序列分析表明，卵形瘧擴增片段長度為434 bp，將該序列遞交到 GenBank上，GenBank登錄號為JF505386。blast比對發現去除引物后的 393個堿基與GenBank DQ845247等卵形瘧的SSU rRNA對應部分的基因序列同源性為100%。重新對血涂片進行鏡檢復核，結果在薄血膜中發現了卵形瘧的環狀滋養體，被寄生的紅細胞為橢圓形，邊緣呈傘矢狀。結論：使用巢式PCR、實時熒光 PCR、序列分析和鏡檢等方法，證實該例輸入性的疑似瘧疾患者為卵形瘧原蟲感染。提醒出境人員出行前應了解前往國家或地區的瘧疾流行情況和瘧疾預防措施，加強個人防蚊措施，必要時攜帶防蚊用品和抗瘧藥品。建議國境口岸、疾病預防控制及醫療部門應加強國內少見分布的卵形瘧病例的技術儲備，做好入境人員的輸入性瘧疾篩查、檢測和診治工作，做到早發現、早診斷、早治療。

來源出版物：中國人獸共患病學報, 2011, 27(10): 914-917

入選年份：2016

全國血吸蟲病疫情資料回顧性調查Ⅲ傳播控制和傳播阻斷后疫情回升地區疫情變化分析

許靜，林丹丹，吳曉華，等

摘要：目的：我國部分血吸蟲病流行區達到傳播控制和傳播阻斷標準的地區，由于防治經費不足、防治力度下降，或者受釘螺面積回升以及外來傳染源輸入等因素的影響，存在血吸蟲病重新流行的威脅。本文對已達到傳播控制和傳播阻斷后疫情回升地區的疫情變化情況進行分析，以為修訂血吸蟲病控制和消滅標準、鞏固達標地區防治成果提供參考。方法：選擇全國 7個血吸蟲病流行省中的 12個疫情回升縣（市、區），采用回顧性調查法，收集各縣達傳播控制前 10年和以后各年（至 2008年或 2009）的疫情數據及相關資料，分析其疫情變化情況及達標后疫情回升因素。疫情回升情況按《血吸蟲病傳阻和傳控地區疫情回升評估與處理方案（試行）》相關規定判定。所有調查數據均錄入計算機，應用 Microsoft Excel 建立數據庫，并用 SPSS 13.0、SAS 9.1.3和GraphPad Prism 5.0統計軟件包進行統計分析和制圖。結果：12個調查縣（市、區）中，湖沼型、山丘型、水網型流行區分別為4個、7個、1個，于1970—1997年間先后達到傳播控制階段。其中 4個縣（市、區）仍處于傳播控制階段，其他8個縣市區于1983—2000年間先后達到傳播阻斷，從傳播控制到傳播阻斷歷時6～30年。共有 8個縣（市、區）分別在達傳播控制后的第 1～12年出現疫情回升，平均年限為5±3年，各地符合疫情回升判定標準的指標較單一：5個縣（市、區）為“出現當地急性血吸蟲感染”，2個縣（市、區）為“現有釘螺達歷史釘螺面積的10%以上”，1個縣在達傳控后1年居民或家畜感染率即＞1%，釘螺面積超過歷史累計的10%。山丘型和湖沼型流行區釘螺面積分別在達標后第 7年和第12年回升至歷史累計有螺面積的10%以上，水網型流行區釘螺面積相對穩定在較低水平；感染性釘螺密度的回升時間與活螺密度的回升高峰基本一致；湖沼型流行區在達傳控后2年居民感染率即回升至＞10%。8個傳阻縣（市、區）分別在達傳阻后的第 3～13年出現疫情回升，平均時間為7±4年。傳阻縣（市、區）達標后疫情回升情況相對復雜，有 6個縣（市、區）釘螺面積回升至歷史累計有螺面積的2%以上，4個縣發現了當地新感染的病人或病畜，3個縣查獲了感染性釘螺，其中4個縣同時出現了2～3項疫情指標的回升。達傳阻后湖沼型、水網型和山丘型流行區的人群感染率均穩定在較低水平，但釘螺面積在達傳阻后的3～6年先后回升至歷史累計有螺面積的2%以上，而活螺密度和感染性釘螺密度則在釘螺面積回升的當年或隨后2～3年相繼出現回升。結論：受生物、自然、社會等諸多因素的影響，傳控和傳阻達標地區疫情回升主要表現為螺情回升。建議修訂我國血吸蟲病控制和消滅標準時，應綜合考慮不同類型流行區的螺情變化規律、釘螺面積或感染性釘螺密度等因素對疫情的影響。傳控和傳阻地區應建立敏感而有效的監測預警體系，加強達標后的疫情監測和鞏固工作。

來源出版物：中國血吸蟲病防治雜志, 2011, 23(4):350-357

入選年份：2016