脆性組氨酸三聯(lián)體基因表達在外陰癌診斷中的作用

王艷，馬慶芬

（壽光市人民醫(yī)院，山東 壽光 262700）

0 引言

外陰惡性腫瘤是臨床上相對比較常見的一種疾病，高發(fā)人群是絕經(jīng)后的女性[1]。其中最為高發(fā)的是外陰鱗癌，給廣大女性患者帶來了嚴重的損害（身心），目前對于本病的病因尚不明確。脆性組氨酸三聯(lián)體（fragile histidine triad，F(xiàn)HIT）基因是利用外顯子捕獲法分離鑒定出來的一種新的腫瘤抑制基因，經(jīng)過相關研究證實，F(xiàn)HIT基因的異常轉錄和表達在多數(shù)的人類原發(fā)腫瘤組織和細胞系中等已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)。但是對于外陰癌這方面研究資料很少。本研究應用免疫組化技術檢測FHIT蛋白在外陰癌組織中的表達情況，以此為疾病的診治提供有力的證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標本來源

將本院病理科1997年1月至2015年8月存檔的石蠟標本作為研究資料，其中外陰癌(vulvar carcinoma，VC)40例，38例為鱗癌，2例為非鱗癌(腺癌)。選擇外陰上皮內(nèi)瘤變(vulvar intraepithelial neoplasia，VIN)的組織標本共計29例，外陰正常組織標本25例。患者的年齡在26-78歲范圍內(nèi)。

1.2 試劑

FHIT多克隆抗體、SP試劑盒等。

1.3 實驗方法

實驗方法應用的是常規(guī)免疫組化法，即SP法。應用的全部標本都應用10%福爾馬林固定，常規(guī)實施石蠟包埋，0.4μm厚切片，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度酒精等一系列操作，在實施二抗后滴加辣根酶標記鏈酶卵白素恒溫箱孵育半小時，經(jīng)過DAB顯色、染色后樹膠封片，在顯微鏡下對結果進行觀察。

1.4 判定結果

FHIT蛋白表達主要定位在細胞漿，陽性細胞指胞漿內(nèi)發(fā)現(xiàn)黃色或者是棕黃色顆粒，將切片在400倍光學顯微鏡下觀察，找到5-10個視野，每個視野中有100-200個癌細胞。計分方式是:（1）染色強度:1分：缺乏或者是弱染色；2分：中度染色；3分：強染色。（2）染色的范圍:1分：陽性細胞率小于10%；2分：陽性細胞率在10%-50%范圍內(nèi)；3分：陽性細胞率超過50%。將兩項計分的結果相乘得出每個標本得分值(1-9分)，總分1-3分：FHIT蛋白陰性(缺乏或降低)；3-6分：中度陽性；6-9分：強陽性。

1.5 統(tǒng)計學方法

應用軟件SPSS18.0進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采取率表示，比較各組之間、不同臨床分期、病理類型、有無淋巴結轉移之間陽性率結果，應用χ2檢驗，α=0.05(雙側),以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

在外陰正常組織、VIN、VC中FHIT蛋白的表達:FHIT蛋白在正常細胞的細胞漿位置，顯示為黃色或者是棕黃色，呈彌漫性表達，其中最為顯著的是上皮細胞，核表達為部分表現(xiàn)。正常外陰組織鱗狀上皮全部呈現(xiàn)中度或者是強陽性表達，陽性表達率為100.0%(25/25);在VIN中，13例(44.8%)出現(xiàn)陽性表達;40例外陰癌患者中，有20.0%（8/40）顯示為陽性表達，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。有淋巴結轉移FHIT蛋白陽性表達率為18.2%(2/11)，明顯低于無淋巴結轉移者的27.6%(8/29)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。這個結果顯示為，隨著外陰病變的不斷加重，F(xiàn)HIT蛋白陽性表達率會顯著降低。

3 討論

外陰癌的發(fā)生是比較復雜的，導致其發(fā)病的原因是很多的，其中，癌基因過度表達或者抑癌基因的滅活與突變可能是細胞發(fā)生癌變的分子基礎[2]。近年來發(fā)現(xiàn)的比較新的候選抑癌基因就是FHIT基因，但是對其研究還不太完善，因此對其分子生物學功能還不是很清楚，當前，對其抑制腫瘤機制的相關研究主要在這些領域：細胞周期的調(diào)控、細胞凋亡等[3]。FHIT基因在正常人體組織都有表達，而在許多惡性疾病中，如：宮頸癌、卵巢癌、肺癌等的腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)了該基因表現(xiàn)為缺失和或異常表達情況[4]。到目前為止，有很多的臨床研究結果證實，F(xiàn)HIT蛋白出現(xiàn)異常表達和人類腫瘤預后的關系密切[5-7]。本研究發(fā)現(xiàn)：FHIT蛋白表達異常與外陰癌的發(fā)病有緊密的關系，并且在疾病的整個發(fā)展過程中其都參與。在正常的外陰鱗狀上皮組織（25例）中，F(xiàn)HIT蛋白全部呈現(xiàn)中度陽性或者是強陽性表達；29例VIN中44.8%會顯示為陽性表達，在外陰癌患者中20.0%的患者表現(xiàn)為陽性表達。這就顯示出：FHIT蛋白異常的表達程度直接顯示出了外陰病變的相關程度。疾病的程度加重之后，F(xiàn)HIT蛋白的陽性表達率就會呈顯著降低的趨勢，這個就說明：FHIT蛋白能夠對外陰癌的發(fā)生發(fā)展起到抑制作用，反映出了FHIT基因的抑癌特點[8]。總之，在VIN中FHIT蛋白的丟失能夠作為判斷病情早晚與發(fā)展程度的重要依據(jù)。本研究中有11例患者出現(xiàn)了淋巴轉移情況，經(jīng)過檢測顯示，F(xiàn)HIT蛋白的陽性表達率為18.2%，要比未發(fā)生淋巴轉移組患者的FHIT蛋白表達率低。這個結果就說明了：在外陰癌出現(xiàn)了淋巴結轉移的患者中FHIT蛋白一般呈低表達表現(xiàn)。這個結果給我們的提示就是，它與外陰癌潛在的惡性生物學行為有緊密的關系，貫穿在外陰癌的整個發(fā)生、發(fā)展過程中。Kaplan-Meier生存分析結果顯示：外陰癌患者的5年生存率為48.8%，F(xiàn)HIT蛋白陽性組患者的5年生存率較高，顯著比FHIT蛋白陰性組要高，這個結果直接顯示了FHIT蛋白的表達和外陰癌的預后是有緊密聯(lián)系的，可以作為外陰癌診斷中的一個較為有效的指標。但是因為本研究的研究資料比較少，研究跟蹤時間不長，探究的FHIT蛋白和外陰癌的關系還需要進一步的研究證實。

[1] 東敏,劉建華,阮正一.ODC和CD10在良性、癌前和惡性外陰腫瘤中的表達及意義[J].海南醫(yī)學,2015(4):481-483.

[2] 林仲秋,謝玲玲.FIGO2012婦癌報告解讀1:外陰癌[J].國際婦產(chǎn)科學雜志,2013,40(1):100-102.

[3] 李黎洪,黃昌明,吳黎敏.FHIT基因與腫瘤的研究進展[J].疾病監(jiān)測與控制,2013,31(12):920-923.

[4] 李龍,趙娟,侯萌,等.FHIT基因在宮頸癌細胞中的表達及其甲基化調(diào)控[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展,2013,13(30):5837-5840.

[5] 宋春麗,王惠蘭.宮頸病變中FHIT基因遺傳不穩(wěn)定性與錯配修復基因[J].河北醫(yī)藥,2013,35(1):121-123.

[6] 賈要麗,吳擁軍,吳秋歌,等.肺癌患者RASSF1A和FHIT基因啟動子區(qū)甲基化檢測[J].鄭州大學學報(醫(yī)學版),2013,48(3):373-376.[7] 李娜,賈秀紅.FHIT基因與腫瘤[J].國際腫瘤學雜志,2013,40(8):563-566.

[8] 羅雪慧.FHIT和p21基因在外陰癌、外陰上皮內(nèi)瘤變及外陰尖銳濕疣組織中的表達及其意義[D].廣西醫(yī)科大學,2010.